血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及发病机制

1、血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及发病机制【关键词】血管性痴呆;学习记忆;免疫组化;流式细胞术;硫化氢血管性痴呆(VD)是老年期痴呆的主要类型之一，它是由一系列脑血管因素(缺血、出血、急慢性缺氧性脑血管病等)导致脑组织损害引起的以认知功能障碍为特征的痴呆综合征1，不仅给病人带来长期痛苦，严重影响其生活质量，而且给家庭、社会造成沉重负担，因此研究VD的发病机制以指导其防治具有很高的社会价值和现实意义。H2S是第三类气体信号分子，广泛参与机体的多种生理和病理过程，为进一步理解其在VD发病中的作用，本研究观察大脑缺血/再灌注(I/R)不同时间对大鼠学习记忆才能的影响、血清中H2S含量改变及海马A1区神经细

2、胞凋亡情况，从行为学、细胞凋亡及内源性H2S表达量及其互相关系等方面，讨论VD的发病机制，为其防治提供理论根据。1材料与方法1.1动物与分组安康istar雄性大鼠64只，体重300350g(由河北省实验动物中心提供)，随机分为8组，正常组，假手术组和VD模型组，VD模型组又分为大脑I/R2，8，24，72，168和720h组，每组8只动物。1.3学习记忆才能的测定rris水迷宫检测3：实验开场于VD术后4，预先将迷宫任意分为4个象限。平台放入上述4个象限中随机选择的1个象限中，在大鼠游泳池边标记4点作为大鼠的入水点，记录120s内大鼠从入水到爬上平台所需的时间，即逃避埋伏期。记录各组大鼠的逃避

3、埋伏期，作为学习记忆才能检测指标。1.4取材大鼠10%水合氯醛(3l/kg体重)腹腔注射麻醉后，快速开胸暴露心脏，心尖取血45l，别离血清，用于血清H2S含量测定;然后断头处死，并立即在冰台上开颅，迅速别离大鼠海马，用70%酒精固定，4冰箱保存过夜，用于流式细胞术检测。1.8血清中H2S含量的检测亚甲蓝分光光度法。1.9统计学处理用SPSS13.0统计软件，采用单因素方差分析，两两比拟采用SNK法。2结果2.1学习记忆才能检测结果各组大鼠在迷宫各入水点搜索平台的结果见表1，随着训练天数的增加，各组大鼠的逃避埋伏期均缩短，第2天I/R720h组与正常组和假手术组比拟逃避埋伏期明显延长(P0.01

4、);正常组和假手术组逃避埋伏期差异不显著(P0.05)。2.2VD大鼠病理形态学结果HE染色后，神经细胞胞浆呈淡红色，核呈蓝黑色。假手术组大鼠海马A1区神经元排列整齐、密集，细胞完好，构造正常，胞浆丰富，胶质细胞无增生;细胞核呈圆形、椭圆形，无变性，无固缩或溶解现象。VD模型组海马A1区神经元排列紊乱，神经元变性，体积变小，胞核与胞浆界限不清，核固缩成三角形或不规那么形，而且随I/R时间的延长，变性神经元数目越多，见图1。表1各组逃避埋伏期比拟2.3凋亡蛋白表达结果2.3.2VD大鼠模型海马A1区Bax的表达I/R早期Bax在海马A1区的表达明显增强，随着再灌注时间的延长，其表达量不断增加，I

5、/R72168h达顶峰。假手术组与I/R不同时间点组之间，Bax的表达均有显著差异(P0.01)(表2)。转贴于论文联盟.ll.2.4流式细胞术检测海马神经细胞凋亡率结果随着I/R时间的延长，大鼠海马神经细胞凋亡率逐渐增高，其中I/R2h组凋亡率最低，I/R168h组凋亡率最高。VD模型各时间组与假手术组比拟，海马神经细胞凋亡率明显增加(P0.01);I/R不同时间组间两两比拟，各组间海马神经细胞凋亡率均差异显著(P0.01)，见表3。2.5血清H2S含量检测结果随着I/R时间的延长，大鼠血清H2S含量呈现直线降低趋势，其中IR2h组血清H2S含量最高，I/R168h组血清H2S含量最低。VD

6、模型各时间组与正常组和假手术组比拟，血清H2S含量明显减少(P0.01);I/R不同时间组间两两比拟，血清H2S含量均差异显著(P0.01);正常组和假手术组血清H2S含量无显著差异(P0.05)，见表3。2.6血清H2S含量与海马神经细胞凋亡率相关分析随着血清H2S含量的降低，海马神经细胞凋亡率逐渐升高，两者呈现明显的负相关，回归方程为：y=-0.135x+12.068，相关系数r=-0.861(P0.01)，提示内源性H2S可能具有保护神经细胞的功能。表3各组海马神经细胞凋亡率及血清H2S含量(各组间两两比拟：1)P0.013讨论目前认为，I/R后神经元死亡的机制是损伤级联反响，脑缺血性损伤级联反响大多以能量衰竭和兴奋性氨基酸毒性开场，以细胞凋亡完毕。本实验中用HE染色观察到海马A1区大量细胞呈现明显的凋亡特征，VD模型组大鼠海马A1区可见神经元排列紊乱，神经元变性，体积变小，核固缩成三角形或不规那么形，胞核与胞浆界限不清。流式细胞术检测海马神经细胞的凋亡率发现VD模型各组与假手术组相比海马神经细胞凋亡率明显增加，而且随着I/R时间的延长，大鼠海马神经细胞的凋亡率逐渐增加。VD主要表现为学习记忆才能的降低，而海马是学习记忆的重要构造，I/R损伤后海马区的神经细胞凋亡势必对学习记忆功能产生重要的影响。本研究利用rris水迷