生物安全管理体系文件

1、试验室生物安全治理制度治理制度。一、人员准入条件1、试验室人员、关心人员和外来人员必需具备相应的专业技能、受过相关的试验可进入相应的试验室工作。感染后果严峻的额人员也不得进入试验室。3、试验室人员必需在身体状况良好、穿戴好防护服白外套的状况下，方能感染状态或呈重度疲乏状态时不得进入。二、生物安全日常治理：(一)生物安全行为标准饰物。白外套。全防护用品，如安全镜、面罩或护目镜。皮肤受损时应以防水敷料掩盖。护目镜，面罩带护目镜的面罩或其它防护用品。的任何地方贮存人用食品及饮料。放在有规定禁放的和可能发生污染的区域。(二)操作准则染时应脱掉手套，马上洗净双手，再换一双手套。2、当试验过程可能涉及到直

2、接或意外接触到血液、有传染性的材料或被感染的体液或其他污染材料后，即使戴有手套也应马上洗手。套离开试验室或在试验室来回走动。里。制止舔标签。5、尽量用塑料制品代替玻璃制品，不使用裂开或有缺口的玻璃器具。破损的玻的玻璃器具和比例碎片应丢弃在有特地标记的、单独的，不易刺破的容器里。6、全部的试验步骤都应尽可能使气溶胶或气雾的形成把握在最小程度。任何使接排放。7、应尽可能削减使用利器和尽量使用替代品。包括针头、玻璃、一次性手术刀之二前置换。室负责人报告。此类事故的书面材料应存档。在从试验室中取走之前，应以安全方式处理和处置，使其到达生物学安全。操作台面、离心机、加样枪、试管架必需擦拭、消毒。(三)监

3、视与检查1、涉及病原体的科室负责人要经常对各项试验的生物安全性进展检查和监视。并报告安全隐患大事。三、常见试验室废弃品处理试验室废弃品按物理类型而言可分为固体废弃品、液体废弃品及气体废等。分类特征常见废弃物名称处理程序感染性废携带病原微生包括被感染性试验材料等污放入盛有适宜消毒液的不易碎弃物物具有引发感染性疾病传播危急的废弃物管等试验器材以及废弃的感基等。裂的容器中浸泡。留意消毒剂的种类、浓度及浸泡时间，浸泡后放入适宜的容器内进展高压灭菌或燃烧处理病理性废试验动物尸体集中与试验室指定位置，严格弃物等废弃物动物组织、尸体等。与感染性生物材料区分，高压灭菌后废弃。盛放容器宜浸泡消毒。损伤性废能刺伤

4、或割伤高压灭菌或燃烧处理，盛放锐弃物人体的锐器等废弃物刀及裂开玻璃等器的一次性容器不易刺破，不宜将容器装得过满小于四分之三，如感染性废弃物进展高压灭菌及燃烧处理化学性、具毒性、腐蚀强酸强碱等化学性物品须经中放射性废性、易燃易爆化学性废弃物一级放射性废和消退腐蚀行前方可废弃，其弃物的化学性废弃物及放射性废弃物弃物等。他物品经稀释对环境与人体无毒后可废弃。含有毒、有害化学物品的试验材料在使用后应置于带明显危急标志的容器内送至指定地点统一处理。四、支持文件中华人民共和国传染病防治法病原微生物试验室生物安全治理条例试验室生物安全通用要求(转变 9489-2022)微生物和生物医学试验室生物安全通用准则

5、WS233-2022试验室生物安全守则WHO,第三版，2022病原微生物试验室生物安全生物安全培训卫生部规划教材，第 2 版医疗废弃物治理条例试验室生物安全病毒制备质量治理体系名目原始病毒的扩增病毒制备程序腺病毒的收获和纯化病毒滴度测定病毒质控细菌污染及检测 基因检测病毒活性检测体外细胞杀伤复制力量检测原始病毒的扩增-病毒种子制备细胞，80%细胞处于对数生长期，T175 培育瓶中进展：细胞计数：超净工作台。去除细胞培育瓶中的旧培育基。 10mlPBS 冲洗细胞后弃上清，12 次，以到达彻底洗掉培育基中的血清成份。1ml 0.25%胰酶消化液，使之铺满细胞外表，放入培育可终止消化。 终止消化：轻

6、拍培育瓶使细胞自瓶壁脱落，从无细胞面侧参加适量完全培育基含血清的DMEM终止消化，并用移液管吸吹数次以打散细胞团块，混合均匀，使之成为单细胞混合液。计数板预备：用酒精清洁计数板及专用盖玻片，然后用绸布轻轻拭干。 加样：用移液管轻轻吹打细胞悬液，取少许细胞悬液可酌情稀释，计数板冲洗拭干重加样。 计数：静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移，将细胞计度。16 个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的 4 ，对沉降在格的 4 ，对沉降在格线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。按下式计算：细胞悬液细胞数/ml4 个大格细胞总数/410 000 稀

7、释倍数感染种子：取平行比照培育优质融合度80%的细胞，弃旧培育基并L 感染培育基% ，轻轻晃动培育瓶，使病毒在培育基中充分混匀。72 条件下培育。 冻存于-80备用，并测定病毒滴度，以备感染病毒使用。大量病毒制备的灭菌预备工作500mL菌。 灭菌包布包被灭菌。，枯燥，灭菌包布包被灭菌。确保离心管实在一个大烧杯上，这样漏液不会污染操作台。菌。Beckman 超高速离心机及特制转子和离心管预备。V96病毒制备程序一细胞预备：建立细胞种子库：复苏细胞CV1 用于痘苗病毒病毒；JH293 用于腺病毒病毒3/5/7/14 天取上清两份，一份用于支原体检测，另一份加至80%消化传代扩增并冻存足量细胞种子于

8、液氮中，冻存管上须准确慢冻速溶细胞扩增培育：当1瓶T175培育瓶中细胞生长融合度80% 完全培育基终止消化， 6ml2ml 此混合液参加含 18ml 完全培育基%血清5 培育瓶中共三瓶连续培育1 3，原瓶连续培育待下一次传代。 4%6 瓶为一批1 ，其中1 5 培育瓶中细胞作37CO248-72 80%。二病毒感染：80%时，预备进展病毒感染；同时也观看其它全部细胞，比照细胞增殖速度是否全都。取平行比照瓶细胞计数，并计算需要感染病毒量1pfu/cell)。-80冰箱中取出测定过病毒滴度的病毒种子，按计算好的病毒量配制2%DMEM 37二氧化碳孵育48-72 小时，或直到90%CPE。痘苗病毒的

9、收获和纯化三病毒收获：36 T175 培育瓶，轻轻晃收集500ml 离心瓶中。3500rpm，15min，4离心。弃上清，移液管取10mlPBS50ml心管中。 500ml 50ml离心管中。3500rpm，15min，4离心。弃上清，47ml 冷VV-Buffer-80待纯化。四病毒纯化：病毒颗粒完全释放。60 次。 离心管中配平，1200rpm，5min ，4离心。吸取上清于另一 50ml 离心管中， 取 3ml VV-Buffer 重悬沉淀， 2ml50ml 60 次。 离心管中配平，1200rpm，5min ，4离心。裂开 20s。在 SW41Beck man 离心机专用离心管中参加

10、7ml 36%蔗糖w/v)10MM-lH0l 研磨超声处理过的病毒液，使之形成分层。VV-Bufferg误差越小越好k离心机中14 / 25 / 36 转子对应配平13500rpm/32900 xg，80min，4。6mlVV-Buffer 重悬沉淀。梯度蔗糖：% 蔗糖溶液 (10mMTris-HCLpH9.0 配制)，依次向上分别为% % % 蔗糖溶液最上层。每个病毒样本制备至少两份梯度，分别留神在上层参加病毒悬液，使之形成分层。M-H0称重配平，误差须小于误差越小越好，移kn4/5/6转子对应配平0m4。2mlVV-Buffer 重悬沉淀。EP 管，取少量病毒液进展滴度测定，其余依据试验

11、/100ul/ 支并按规定明确标记病毒名称，日期等信息后，冰上分装冻存于-80冰箱病毒库。腺病毒的收获和纯化三.病毒收获：36 T175 培育瓶，轻轻晃收集500ml 离心瓶中。2022rpm，10min，4离心。弃上清，移液管取10mlPBS50ml心管中。PBS5ml 500ml 离心瓶，并将液体转致同 离心管中。1000rpm，10min，4离心。 -80待纯化。四病毒纯化：37水浴中反复冻融三次。50ml 离心管中，室温，6000 rpm 10-80CsCI 梯度离心。 10ml1.25g/mlCsCI.再留神轻轻参加, CsCI 液面上。 LE-80K 14/ 25/36 转子对应配

12、平离心，25000rpm，15，2 小时。19 号针头刺入离心管，留神抽取夹层膜状物病毒条带呈乳白色50ml 离心管中。将 50ml离心管中含病毒液体顺液面轻轻平均安排参加至已参加 5ml 超高速离心用离心管中。 LE-80K 14/ 25/36 转子对应配平离心，40000rpm，15，15 小时。19 号针头50ml 离心管中。24 小时。病毒分装与储存：透析完毕后，将透析袋转至无菌工作台中，取少量病毒20ul/50ul/100ul/支并按规定明确标记病毒名称，日期等信息后，冰上分装储存于-80冰箱病毒库。病毒滴度测定TCID50CV-1VVJH293AD细胞。当培育瓶中细胞生长率80%

13、5mL10FBS DMEM 培育基混匀，细胞计数。6 303 0 FBS DMEM，过夜。1：105 稀释：10ul 10ul 病毒原液990ulDMEM3ul 混合液2997ul 3ul 混合液2997ul DMEM20ul 96 孔板第一排 5 次，去掉枪头；22 5 次; 5 次；依次到倒数其次排，最终一排做比照。810 天观看。先观看最终一排细胞状态，长满时，CPE 的数值。计算病毒滴度。DilutionsNo.DilutionsNo. infectedwellsNo.un-infectedwellsTotal no.infectedinfected% totalinfectedAbo

14、ve0.5%above0.5%below 0.5log diluabove51.00E-051206901TRUE0001.00E-061205701TRUE0001.00E-071204501TRUE0001.00E-081113310.9705882TRUE0001.00E-091022230.88TRUE0001.00E-105712100.5454545TRUE0.54545450-101.00E-11757150.3181818FALSE00.31818180#ofWells12mls/well0.020.50.54545450.3181818-10Prop.Dist.0.2Log-

15、10.2TCID50TCID506.3096E-111/TCID501.5849E+10TCID50/ml7.9245E+11pfu/ml5.4679E+11cellnumbervolumenumbervolumepfu/cell90000212150848一、细菌污染及检测； 三、基因检测；四、病毒活性检测；五、体外细胞杀伤复制力量检测。一、细菌污染及检测：背景介绍：细菌是一种元和细胞微生物，其大小以微米计。格外必要。试验步骤：10ul 4ml 的培育基 37，1800rpm 的摇床上摇过夜12-16h,假设有细菌污染，16h 内就可获得阳性结果。结果判读：细菌污染。假设无，则判读为阴性。二

16、、支原体污染及检测：背景介绍：支原体是一种介于细胞和病毒之间、能独立生活的最小微生物，最小的直径1%可通过滤菌器，无细胞壁，形态呈多形性，可为圆形、丝状或梨子密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。期试验产生潜在影响，所以对支原体的污染必需严加防范。DNA PCR PCR 检测法。试验步骤：1 试验前预备： 样本和比照预备：5ul 495ul 细胞培育确定无污染100 倍稀释。50ul 一支做阳性比照。阴性比照：灭菌蒸馏水。 引物的预备：Fwd-1.： ACT CCT ACG GGA GGC AGC AGT A Fwd-2.：CCTAAAGGAATTGACGGGAACCCGRev.：TGCACCAT

17、CTGTCACTCTGTTAACCTC14 种不同支原体。50pmol/ul50ul/管，20保存，待使用。2PCR反响：配置全过程需在冰上操作：1st band at 720bpPCR反响液：灭菌蒸馏水upto 20ul10*PCR Buffer2ulDntp(2.5mM)1.6ulMgCl2(25mM)Fwd-1.1.2ulMIX1ulRev.1ulTaq 酶0.3ul样本/比照1ul1st反响条件95x30s95x3095x30s56 x30s72x 1min72 x 1minPCRPCR145bpPCR鉴定。2ndRound Band at 145bpPCR反响液：灭菌蒸馏水upto

18、20ul10*PCR Buffer2ulDntp(2.5mM)1.6ulMgCl2(25mM)Fwd-2.1.2ulMIX1ulRev.1ulTaq 酶0.3ul第一轮PCR对应样本/比照1ul模板，第一轮产物可加1ul放置4冰箱。待跑琼脂电泳胶。2nd反响条件与第一轮一样95x30s95 x30 s56 x30 s72 x 1min72 x1min35 cycles轮产物加1ul10*lodingbuffer ，终止反响，跑琼脂电泳胶。3琼脂电泳跑胶： 配置 1%的琼脂糖凝胶即可。首先将锥形瓶洗干净，然后依据样本量和胶的大小取肯定量的电泳缓冲液煮好的凝胶需无气泡、色泽及质地均匀。50左右时，

19、参加相应EB,胶倒入装好的干净模具中。待凝胶完全凝固30min后， 垂直方向拔梳子。此时，凝胶需平坦、不漏孔，可以用于电泳检测。胶前预备：槽正中心。留意：放凝胶前，需将胶托底部的凝胶抹干净，防止胶托在电泳槽中滑动；此时，可顺便观看凝胶是否漏孔。留意保持桌面卫生，防止缓冲液洒到桌。 上样： 挨次应与电泳槽上的标记全都。留意:合后，轻甩，依据规定的挨次上样，上样在电泳槽旁边，用于核查；点样时不戳孔、不外漏、不溢出；样品完全沉到底部后，再固定凝胶.样品上完后，加阳性比照，阴性比照。 bp) ,5ul. 跑电泳：留意：确认电极正确连接100400mA star 键开头电泳。 凝胶成像： PE 手套上留

20、意B 染液甩干入凝胶成像系统中，依据“Tanon留意EB EB 鼠标，最终保存胶图信息至规定的文件夹内，命名规章为：日期+姓名+工号部门+电泳铜人阵考核。留意事项务必留神，勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。PE 手套和口罩。三基因检测： 基因组测序试验一、目的 序列信息二、试剂来源、配制及保存条件试剂来源/品牌货号存储BioTTT001深圳S160324A-80度QIAmp DNA blood minikitQIAGEN51104室温KTIANGEN040204 度三、仪器设备仪器品牌型号离心机ThermoIECMICROMAX微量分光光度计ThermoNANODROPONE恒温数显水浴锅晶

21、玻HH-S2振荡器SCIENTIFICINDUSTRIESVORTEXGENIX2四、试验过程病毒基因组提取200ulBioTTT001 10ul 蛋白酶K，混匀。 56 度水浴锅内，孵10 分钟。 15s 1 2ml 离心管中。 3 分钟。1 1.5ml 离心管中。50ul 1 分钟，14000 1 分钟浓度测定2ul 超纯水，滴到样品检测孔处，进展校准。抬起测量臂，擦拭残留液体。1ul 待检测样品，滴加到样品检测处，放下测量臂，记录数据。送华大基因测序80ng/ul 的样品，进展测序。华大基因进展样品检测，并出示检测报告。样品检测合格后，建立样品库进展测序。数据分析。 SOP一、目的 的构

22、建二、试剂来源、配制及保存条件试剂来源/品牌货号存储BioTTT001深圳S160324A-80度QIAmp DNA blood minikitQIAGEN51104室温KTIANGEN040204 度EcoR VNEBR1095S-20度Buffer 3.1NEBB7203S-20度琼脂糖Invitrogen75510-019室温DNAMarkerTIANGEN100bp4 度三、仪器设备仪器品牌型号离心机ThermoIECMICROMAX微量分光光度计ThermoNANODROPONE恒温数显水浴锅晶 玻HH-S2振荡器SCIENTIFICINDUSTRIESVORTEXGENIX2琼脂糖

23、凝胶电泳仪北京六一DYY-6C琼脂糖凝胶成像仪Tanon3500四、试验过程病毒基因组提取200ulBioTTT001 10ul 蛋白酶K，混匀。 56 度水浴锅内，孵10 分钟。 15s 1 2ml 离心管中。 3 分钟。1 1.5ml 离心管中。50ul 1 分钟，14000 1 分钟浓度测定2ul 超纯水，滴到样品检测孔处，进展校准。抬起测量臂，擦拭残留液体。1ul 待检测样品，滴加到样品检测处，放下测量臂，记录数据。酶切配制酶切体系基因组基因组EcoR V Buffer 3.1超纯水总体积40ul约500ng)1ul 5ul 4ul50ul37 16-18 小时。电泳 25-30 分钟

24、，成像观看。 PCR IL-12PCR SOP一、目的 的构建二、试剂来源、配制及保存条件试剂来源/品牌货号存储BioTTT001深圳S160324A-80度QIAmp DNA bloodkitminiQIAGEN51104室温KTIANGEN040204 度2MixVazyme102151-20度引物详见附注DNAMarkerTIANGEN100bp4 度三、仪器设备仪器品牌型号离心机ThermoIECMICROMAX微量分光光度计ThermoNANODROPONE恒温数显水浴锅晶 玻HH-S2振荡器SCIENTIFICINDUSTRIESVORTEXGENIX2PCR 仪Life tech

25、nologies2720 Thermal cycler琼脂糖凝胶电泳仪北京六一DYY-6C琼脂糖凝胶成像仪Tanon3500四、试验过程病毒基因组提取200ulBioTTT001 10ul 蛋白酶K，混匀。 56 度水浴锅内，孵10 分钟。 15s 1 2ml 离心管中。 3 分钟。1 1.5ml 离心管中。50ul 1 分钟，14000 1 分钟浓度测定2ul 超纯水，滴到样品检测孔处，进展校准。抬起测量臂，擦拭残留液体。1ul 待检测样品，滴加到样品检测处，放下测量臂，记录数据。PCRPCR 体系：基因组0.5ul2Mix2ulPrimer-F1ulPrimer-R1ul超纯水16.5ul

26、总体积20ulPCR 仪进展扩增,反响体系如下：94949455727245min30s 30s 40s 5min+电泳 25-30 分钟，成像观看。附注：引物信息95 forward8 对 E3-gp19k 上游3 reverse11 nsIL12 下游105 forward11 nsIL12上游3 reverse8 对 E3-gp19k 下游115 forwardATGatatgggaactgaagaaag3 reverseTTAGGAAGCATTCAGATAG92871530109E3-gp19k+nsIL121394102853429135nsIL12+E3-gp19k60111112

27、853430109nsIL121575 IL-12 SOP(ELISA)一、目的 IL12 的表达水平二、试剂来源、配制及保存条件试剂来源/品牌货号/配制存储BioTTT001深圳S160324A-80度DMEMGibco75510-0194 度FBSGEMINI900-108-20度Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100X)Gibco10378-016-20度Human IL12 ELISA KITeBioscien88-7126-88Human IL12 ELISA KITeBioscien88-7126-884 度ce仪器品牌型号生物安全柜Therm

28、o1300SERIESA2细胞培育箱Thermo3111超低温冰箱ThermoFORMA8800 SERIES水浴锅晶 玻SS-H2酶标仪BECKMANDTX880四、试验过程细胞培育及铺板 80-90%时进展传代。3-5 次，观看细胞状态良好，消化收集细胞，制备单细胞悬液。利用血球计数板进展细胞计数。S-M 00l孔进展铺板。将六孔板放置于细胞培育箱中，过夜培育。病毒感染 3 个孔，分别进展计数，取平均值。 2ml DMEM。 培育基,放置于细胞培育箱中进展培育。样品收集及冻融 200ul 吸点收集三个复孔。样品保存于超低温冰箱中。37 度水浴锅中进展解冻。3-5 37 度水浴至完全溶解。3

29、 次。IL12 表达的检测相关试剂预备试剂试剂1 X ELISA Diluent1 X Coating Buffer1 X Capture Antibody1XDetectionAntibody1X Avidin-HRP1 XTMBStop SolutionWash Buffer稀释10ml 5X Diluent 40ml 超纯水中12ml 10X Coating Buffer108ml 超纯水中48ul 250X Capture Antibody 加到 12ml 1 X CoatingBuffer中 Antibody 12ml 1 X ELISADiluent 中 12ml 1 X ELIS

30、A Diluent中Working Concentration2N H2SO41 XPBS,0.05%Tween-20包被 ELISA 96 孔板每孔中参加100ul 1 X鲜膜包裹后放入4 度冰箱中，过夜。洗板吸走孔中液体，清洗3 次，每次每孔参加250ul Wash Buffer，轻轻晃动板子1 分钟，吸走清洗液，吸水纸吸干剩余液体；封闭 Diluent，室温放置1 小时。 12ml 1 X ELISA Diluent 中，得到浓度为500pg/ml8 个梯度浓度的标准品，一3 个复孔。50025012562.531.7515.8757.93753.96875pg/mlpg/mlpg/ml

31、pg/mlpg/mlpg/mlpg/mlpg/ml10ul+12500l500l500l500l500l500l500lmlDiluentDiluentDiluentDiluentDiluentDiluentDiluentDiluent500ul500ul500ul500ul500ul500ul500ul500ul1XAt 可预先摸索稀释倍数，100ul/3 个复孔；4 度过夜孵育。4.7 洗板 同 4.33-5 次。孵育检测抗体 每孔参加 Antibody1 小时；同 3-5 次。100ul1XAvidin-HRP30 m, 4.3 洗 100ul 1 X TMB15 分钟后，每孔参加Sol

32、ution。读板 吸光值，绘制标准曲线，计算样品IL12 表达量。四病毒活性检测： 一、目的 二、试剂来源、配制及保存条件试剂来源/品牌货号/配制存储BioTTT001深圳S160324A-80度DMEMGibco75510-0194 度FBSGEMINI900-108-20度Penicillin-Streptomycin-Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100X)Gibco10378-016-20度1%solutioncrystalvioletSigmaV5265室温三、仪器设备仪器品牌型号生物安全柜Thermo1300SERIESA2细胞培育箱Ther

33、mo3111超低温冰箱ThermoFORMA8800 SERIES四、试验过程细胞培育及铺板 80-90%时进展传代。3-5 次，观看细胞状态良好，消化收集细胞，制备单细胞悬液。利用血球计数板进展细胞计数。 1.0 X105/ml，500ul/孔进展铺板。24 孔板放置于细胞培育箱中，过夜培育。病毒感染 3 个孔，分别进展计数，取平均值。 DMEM 培育基稀释500ul DMEM；铺板如下：DoseBioTTT001比照病毒dl1520104VP/cell复孔1复孔2复孔1复孔2103VP/cell复孔1复孔2复孔1复孔2102VP/cell复孔1复孔2复孔1复孔2101VP/cell复孔1复

34、孔2复孔1复孔2100VP/cell复孔1复孔2复孔1复孔2Mock复孔1复孔2复孔3复孔4病毒梯度稀释：11150ul150ul150ul150ul111111110Total 2022ul1350ul1350ul1350ul1350ul2022ul无血清DMEM2 小时，吸走含病毒培育基，500ul/PBS 轻轻晃动清洗一次。 培育基,5 天;结晶紫染色PBS 洗一遍。4%30 分钟。500ul/PBS 洗一遍。20ul 结晶紫溶液，晃动板子，至孔底完全浸染结晶紫。 分钟，1ml/PBS 洗两遍。五体外细胞杀伤复制力量检测： SOP一、目的 对靶细胞的杀伤力量二、试剂来源、配制及保存条件试

35、剂来源/品牌货号/配制存储BioTTT001深圳S160324A-80度DMEMGibco75510-0194 度FBSGEMINI900-108-20度Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100X)Gibco10378-016-20度MTSPROGEMAG111-20度PMS-20度三、仪器设备仪器品牌型号生物安全柜Thermo1300SERIESA2细胞培育箱Thermo3111超低温冰箱ThermoFORMA8800 SERIES酶标仪BECKMANDTX880四、试验过程细胞培育及铺板C时进展传代。80-90%3-5 次，观看细胞状态良好，消化收集细胞

36、，制备单细胞悬液。利用血球计数板进展细胞计数。S-M 0l/孔进展铺板104/孔。铺板方式如下(PBS100ul/孔，2%Medium90ul/孔)：PBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBS2%McellscellcellcellcellcellcellcellcellcellPBSsssssssss2%McellscellcellcellcellcellcellcellcellcellPBSsssssssss2%McellscellcellcellcellcellcellcellcellcellPBSsssssssss2%Mcellscellcellcellc

37、ellcellcellcellcellcellPBSsssssssss2%McellscellcellcellcellcellcellcellcellcellPBSsssssssss2%McellscellcellcellcellcellcellcellcellcellPBSsssssssssPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBS96 孔板放置于细胞培育箱中，过夜培育。病毒感染 小时，观看细胞完全贴壁。BioTTT001，最高感染剂量为10000PFU/cell，使用2%FBS-DMEM 培育基10ul 2%FBS-DMEM；40ul40ul40ul40ul40ul40ul40ul40ul40ul40ul10410310210110-11