GMP质量体系029-人工牛黄检验标准操作规程

1、* * * * 制 药 厂操作标准-质量管理文件名称人工牛黄检验标准操作规程编 码SOP-QC-029-00页 数5-1实施日期制 订 人审 核 人批准人制订日期审核日期批准日期制订部门质管部分发部门检验室目的: 规范人工牛黄检验的操作。适用范围: 人工牛黄的检验。责任: 检验室检验人员按本规程操作，检验室主任对本规程的有效执行承担监督检查责任。程序： 本品为贝斯素、胆酸、猪去氧胆酸、胆红素、胆固醇、无机盐等配制而成。1.性状：本品为黄色疏松的粉末，味苦，微甘。2.鉴别：2.1仪器及用具：干燥、超声波清洗仪、分析天平、玻璃层析缸、显色喷瓶、硅胶G薄层板、点样器、量瓶、刻度吸管等。2.2试剂及试

2、液：硫酸、硝酸、甲醇、异辛烷正丁醚冰醋酸（8：5：5）、10%磷钼酸乙醇液、冰醋酸甲苯水（10：7.5：0.3）、正丁醇冰醋酸乙醇水（4：2：1：1）、1%茚三酮乙醇液。2.3测定法2.3.1鉴别（1）取本品适量，分为二份，置点滴板上，一份加硫酸，数分钟后，显污绿色，另一份加硝酸即显红色。2.3.2鉴别（2）取本品加甲醇制成每1ml中含10mg的溶液超声处理，使充分提取后，取上清液，作为供试品溶液。另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法标准操作规程（SOP-QC-082-00）试验，吸取上述供试品溶液4l，对照品溶液2l，分别点于同一硅胶

3、G薄层板上，以异辛烷正丁醚冰醋酸（8：5：5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸的乙醇溶液，于105烘约5分钟。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。* * * * 制 药 厂操作标准-质量管理文件名称人工牛黄检验标准操作规程编 码SOP-QC-029-00页 数5-22.3.3鉴别（3） （2）项下的供试品溶液，另取贝斯素对照品约30mg于10ml量瓶中，加甲醇适量超声处理便充分提取后，用甲醇稀释至刻度，静置使澄清，取上清液作为对照品溶液，照薄层色谱法标准操作规程（SOP-QC-082-00）试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各8l，分别点于一硅胶G薄层板上，

4、以甲苯冰醋酸水（10：7.5：0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸的乙醇溶液，于105烘约5分钟。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.3.4鉴别（4）取本品约100mg于10ml量瓶中，加水5ml，超声处理使充分提取后，用甲醇稀释至刻度，静置使澄清，取上清液作为供试品溶液，另取贝斯素对照品约30mg置10ml量瓶中，同理处理，取上清液作为对照品溶液，照薄层色谱法标准操作规程（SOP-QC-082-00）试验。吸取上述供试品及对照品溶液各2l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇冰醋酸乙醇水（4：2：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，于105烘约10分

5、钟喷以1%茚三酮乙醇液，于105烘约5分钟，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点3.检查3.1仪器及用具：干燥箱、玻璃层析缸、硅胶G薄层板、称量瓶、刻度吸管。3.2试剂及试液：甲醇、异辛烷正丁醇冰醋酸（8：5：5）、10%磷钼酸乙醇液。3.3测定法3.3.1水分：照水分测定法标准操作规程（SOP-QC-085-00）测定，水分不得过5.0%3.3.2猪去氧胆酸3.3.2.1对照品溶液的配制精密称取猪去氧胆酸适量，用甲醇制成每1ml含1ml的溶液。* * * * 制 药 厂操作标准-质量管理文件名称人工牛黄检验标准操作规程编 码SOP-QC-029-00页 数5-33.3.2.2供试品溶

6、液的配制精密称取供试品适量，用适量甲醇转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，密塞，振摇，使样品中猪去氧胆酸溶解，放置，制成每1ml含10mg的溶液，取上清液作为对照品溶液。3.3.2.3检查法照薄层色谱法标准操作规程（SOP-QC-082-00）试验，精密量取供试品溶液4l及对照品溶液2l，交点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷正丁醇冰醋酸（8：5：5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇液，于105烘约5分钟，供试品色谱中，猪去氧胆酸斑点的颜色应深于或等于对照品色谱。4.含量测定4.1仪器及用具：紫外分光光度计，分析天平、具塞试管、棕色量瓶、水浴锅、刻度吸管等。4.2试剂及试液：60%

7、冰醋酸溶液、新配制的糠醛溶液（1100）、硫酸溶液（取硫酸50ml与蒸馏水65ml混合制成）4.3测定法4.3.1胆酸4.3.1.1标准溶液的制备取在105干燥至恒重的胆酸对照品12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加60%冰醋酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含胆酸0.5mg）。4.3.1.2标准曲线的绘制精密量取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8与1.0ml，分别置于带塞试管中，均用60%冰醋酸溶液稀释成1.0ml，加新配制的糠醛水溶液（1100）各1.0ml，在冰浴中放置5分钟，加硫酸溶液（取硫酸50ml与蒸馏水65ml混合制成）13ml，混匀，在70水浴中加热10

8、分钟，迅速移至冰浴中，放置2分钟，以相应的试剂为空白，照紫外分光光度法标准操作规程（SOP-QC-079-00）测定，在605nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。* * * * 制 药 厂操作标准-质量管理文件名称人工牛黄检验标准操作规程编 码SOP-QC-029-00页 数5-44.3.1.3供试品测定取本品约0.1g，精密称定，加60%冰醋酸溶液数ml，充分研磨，移入50ml量瓶中，残渣再加60%冰醋酸溶液，研磨后，全部移入量瓶中，再用60%冰醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，弃去初滤液，精密吸取续滤液各1ml，分别置于甲、乙两个带塞试管中，于甲管中加新配制的糠醛水

9、溶液各1ml，乙管中加水1ml作空白，按标准曲线的绘制项下的方法自“在冰浴中放置5分钟”起，依法测定吸收度。按标准曲线计算含量，即得。本品胆酸（C24H40O5）含量按干燥品计算，不得少于13.0%。4.3.1.4计算公式式中：C表示按标准曲线换算出的供试品浓度； W表示供试品的取样量。4.3.1.5允许偏差：3%4.3.2胆红素4.3.2.1对照品溶液的制备取胆红素标准品约10.0mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿80ml超声处理使充分溶解，加氯仿稀释至刻度，作为对照品储备液（0.1mg/ml）精密吸取对照品储备液10.0ml，置50ml棕色量瓶中，加氯仿稀释至刻度，即为对照品溶液（约20l /ml）4.3.2.2标准曲线的绘制精密吸取胆红素对照品溶液4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，分别置25ml棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，照紫外分光光度法标准操作规程（SOP-QC-079-00）测定，在453nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。4.3.2.3供试品测定取样品80mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿80ml超声处理，使充分溶解，加氯仿稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液， * * * * 制 药 厂操作标准-质量管理文件名称人工牛黄检验标准操作规程编 码SOP-QC-029-00页 数5-5取续滤液