无菌检查法验证要点

1、浙江红雨医药用品有限公司无菌检验方法验证方案及报告 TOC o 1-5 h z 验证方案申请人：日期：年月日验证方案审核人：日期：年月日验证方案审批人：日期：年月日浙江红雨医药用品有限公司1概述无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制 约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。检验 方法的验证是

2、现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础 。2验证目的对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本 公司产品的无菌检查。3实验原理直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作 用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得 出直接接种法无菌检验的有效性。4验证范围实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。5执行程序文件编码文件名称存放部门HY-QC-012尢菌检验操作规程品管部6职责姓

3、名职务职责刘传杰经理负责验证方案的批准实施、验证报告的批准周德标QC验证方案、验证报告的起草并负责验证过程中现场的监控及取样张思东QC负责按制订无菌检验规程实施检验和验证实验7验证内容建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养2472小时，比较观察菌落的生长状况，得出结论。8验证指示物本实验所用菌种为购于 浙江省食品药品检验研究所标准菌株：金黄色葡萄球菌、白色念球菌、大肠埃希菌及生胞梭菌。浙江红雨医药用品有限公司9实验过程(1)培养基的配制用于大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的营养琼脂培养基用于白色念球菌的改良马丁培养基用于生抱梭菌的流体硫乙醇酸盐培养基(2)供试品的制备创可贴供

4、试品：将包装好的创可贴打开，用剪刀将创可贴剪碎，放入100ml pH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液中浸泡1小时，取水层作为供试品。无菌敷贴供试品：将包装好的无菌敷贴打开，用剪刀将无菌敷贴剪碎，放入100mlpH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液中浸泡1小时，取水层作为供试品。(3)供试菌液的制备大肠埃希菌菌液：取经 35c培养19小时的大肠埃希菌培养物 1ml,加9ml生理盐水， 10倍稀释至约10-510-8之间，混匀备用。金黄色葡萄球菌菌液：取经35c培养19h小时的金黄色葡萄球菌培养物1ml,加9ml生理盐水，10倍稀释至约0-510-8之间，混匀备用。白色念球菌菌液：取经 25.5C培养72小

5、时的白色念珠菌真菌斜面培养物，加入生理盐 水4ml洗下抱子，吸出转移至空试管作为原液，取 1ml力口 9ml生理盐水，10倍稀释至10-6, 取1.2ml加生理盐水9ml,混匀备用。生抱梭菌菌液：取经 35 c培养18h的生抱梭菌硫乙醇酸盐流体培养基培养物1ml,加9ml生理盐水，10倍稀释至10-6,混匀备用。(3)实验设计实验样品组：按照本公司常规微生物检验方法进行，加入抑菌中和剂，最后接入已知 量的菌株(& 100cfu),培养观察。阳性对照组：以0.1%的蛋白月东代替供试品，加入抑菌中和剂，最后接入同样量的菌株， 培养观察。阴性对照组：取与实验样品组等量的供试品，加入与中和剂等量的生理

6、盐水，最后接 入已知量的菌株(w 100cfu),培养观察菌种活性检查组：直接将菌种接种到培养基上，培养观察。10标准与判断.如果实验样品组与阳性对照组的微生物计数相似，表明所用中和剂(中和剂类别及用 量)具有足够的中和效力；.如果阳性对照组与菌种活性检查组的微生物生长数量相似，表明所用的中和剂不影响微生物的生长。.阴性对照组微生物生长量应低于实验组，才能证明供试剂有抑菌性，否则该实验无意 义。.样品组的平均菌检计数结果不得低于对照组的70%,否则直接否定无菌检验方法。浙江红雨医药用品有限公司11检验与记录无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿）NO:供试品：实验时间:试验组名检验菌而一-实验样品

7、组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希 菌12345平均金黄色葡 萄球菌12345平均白色念球 菌12345平均生抱梭菌12345平均结论：实验人:日期：年 月 日复核人：日期： 年 月 日浙江红雨医药用品有限公司12编写验证报告(1)根据验证方案设计实验；(2)统计实验数据编写验证报告。13再验证周期及日常监测(1)无菌检查按所生产的每批次进行日常监测；(2)当无菌检查日常监测出现不符合标准时，必须进行再验证；(3)当无菌检查方法发生改变和生产工艺发生改变时，必须重新验证；(4)本验证方案有效期为 1年。14验证结果与评价实验人对验证实验结果做好相关记录并进行科学性评价；15验证方案的批准

8、验证小组审阅所有结果及评价分析意见，同意验证结果，签字并按此结论实施。浙江红雨医药用品有限公司直接接种无菌检查法验证报告一实验目的对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本 公司产品的无菌检查。二实验原理直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作 用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得 出直接接种法无菌检验的有效性。三实验步骤1、.培养基的配制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌用的营养琼脂培养基：准确称取营养琼脂培养基16.5g,加入500ml纯化水，缓慢加热使其完

9、全溶解。白色念球菌用的改良马丁培养基：准确称取改良马丁培养基14.5g,加入500ml纯化水，在加入6g琼脂粉，加热使其溶解。生抱梭菌用的流体硫乙醇酸盐培养基：准确称取流体硫乙醇酸盐培养基14.5g,加入500ml纯化水，在加入6g琼脂粉，加热使其溶解。将上述配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中115 C , 30min。2、供试品的制备创可贴供试品：将包装好的创可贴打开，用剪刀将创可贴剪碎，放入 100ml pH7.0氯 化钠一蛋白脐缓冲液中浸泡1小时，取水层作为供试品。无菌敷贴供试品：将包装好的无菌敷贴打开，用剪刀将无菌敷贴剪碎，放入100mlpH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液中浸泡1小时，取

10、水层作为供试品。3、供试菌液的制备：大肠埃希菌菌液：取经 35c培养19小时的大肠埃希菌培养物1ml,加9ml生理盐水，10倍稀释至约10-510-8之间，混匀备用。金黄色葡萄球菌菌液：取经35c培养19h小时的金黄色葡萄球菌培养物1ml,加9ml生理盐水，10倍稀释至约10-510-8之间，混匀备用。白色念球菌菌液：取经 255c培养72小时的白色念珠菌真菌斜面培养物，加入生理盐 水4ml洗下抱子，吸出转移至空试管作为原液，取 1ml力口 9ml生理盐水，10倍稀释至10-6, 混匀备用。生抱梭菌菌液：取经 35 c培养18h的生抱梭菌硫乙醇酸盐流体培养基培养物1ml,加9ml生理盐水，10

11、倍稀释至10-6,混匀备用。4、分别取上述两种供试品100ml,加入抑菌中和剂，接入w100cfu菌株（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌及生抱梭菌分别进行实验），再接种到每种菌株所需的上述培养基中，作为实验样品组。5、用0.1%的蛋白月东溶液代替供试品进行同上步骤操作，作为实验阳性对照组。6、取与实验样品组等量的供试品，加入与中和剂等量的生理盐水，再同第4步操作，作为阴性对照组。7、取100ml 0.1%蛋白月东溶液，不加中和剂直接接种等量菌株，再接种到培养基上，作为 菌种活性检查组。浙江红雨医药用品有限公司8、将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及生抱梭菌培养温

12、度为35 C,白色念球菌培养温度为25.5 C,培养数天后，观察并记录菌落数。四实验结果记录无菌检查验证实验数据表（菌落数 /皿）NO:1供试品：创可贴实验时间:2验组名 检验菌而实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希 菌12345平均金黄色葡 萄球菌12345平均白色念球 菌12345平均生抱梭菌12345平均结论：实验人:日期：年 月 日复核人：日期： 年 月 日浙江红雨医药用品有限公司无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿）NO:2供试品：创可贴实验时间：一试验组名菌种 实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希 菌12345平均金黄色葡 萄球菌12345平均白色念球国123

13、45平均生抱梭菌12345平均结论：实验人：日期：年 月 日复核人：日期： 年 月 日浙江红雨医药用品有限公司无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿）NO:3供试品：创可贴实验时间:一试验组名菌种 实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希 菌12345平均金黄色葡 萄球菌12345平均白色念球国12345平均生抱梭菌12345平均结论：实验人：日期：年 月 日复核人：日期： 年 月 日浙江红雨医药用品有限公司无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿）NO:4供试品：无菌敷贴实验时间:一试验组名菌种 实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希 菌12345平均金黄色葡 萄球菌12345平均白色念球国12345平均生抱梭菌12345平均结论：实验人：日期：年 月 日复核人：日期： 年 月 日浙江红雨医药用品有限公司无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿）NO:5供试品：无菌敷贴实验时间:一试验组名菌种 实验样品组阳性对照组阴性对照组活性检查组大肠埃希 菌12345平均金黄色葡 萄球菌12345平均白色念球国12345平均生抱梭菌12345平均结论：实验人：日期：年 月 日复核人：日期： 年 月 日10浙江红雨医药用品有限公司无菌检查验证实验数据表（菌落数/皿