几种显微镜的区别

1、荧光显微镜小广告O（n_n）O川大细胞425297250荧光技术（1）荧光原理荧光分子吸收入射光能量后，电子由基态跃迁到激发态。激发态电子不稳定，会自发跃迁回基态，并辐 射荧光。辐射荧光入入射光入。（2）荧光探针荧光素如：罗丹明B荧光蛋白如：绿色荧光蛋白（GFP）（3）荧光分类自发荧光：如叶绿素、血红素等荧光分子经紫外线照射后，能够自发辐射红色荧光。诱发荧光：物质经荧光染料染色后，再经紫外线照射，进而辐射荧光。荧光显微镜（1）荧光显微镜概述荧光显微镜是指利用短波长电磁波为光源，激发样品辐射荧光，之后利用样品产生的自发荧光或诱发荧 光，对细胞内特异性蛋白质进行定性与定位研究的装置。（2）荧光显微

2、镜的特殊构件石英透镜滤光片系统激发滤片，位于光源与样品之间，滤过可见光，只允许作为光源的紫外光通过。阻断滤片，位于物镜与目镜之间，只允许荧光分子产生的荧光通过。（3）荧光显微镜的特点优点：荧光显微镜主要用于定性、定位研究细胞内特异性蛋白质。可以观察活细胞。缺点：无法排除来自样品焦平面以外的荧光，使得图像的反差与分辨率降低。激光扫描共焦显微镜（1）激光扫描共聚焦显微镜概述激光扫描共焦显微镜是指以激光为光源，对样品进行逐点、逐行、逐面扫描成像的装置。其物镜与聚光镜 共焦点，以提高分辨率。通过调节焦平面即可获得样品不同层次的图像，通过计算机分析和模拟，可以构 筑样品的三维图像。（2）激光扫描共焦显微

3、镜的成像原理光源为激光，经双色镜反射后，通过物镜汇聚于样品某一焦点，激发荧光。样品所激发的荧光经透镜 汇聚成像，通过共焦小孔被检测器检出。物镜与聚光镜共焦点，使得只有从样品焦平面发出的荧光聚焦成像，其他部分的激发荧光不能通过共 焦小孔，检测器不能检出。（3）激光扫描共焦显微镜的特点分辨率比普通荧光显微镜提高1.5倍。通过改变焦平面，可以获得样品不同层次的图像，从而可以构筑样品的三维图像。可以实现长时间活细胞动态观察。电子显微镜无耻小广告：川大细胞425297250 。（八_八）。一、透射电子显微镜透射电子显微镜概述透射电子显微镜（TEM）是指利用电子枪发出的高能电子束照射超薄样品，透射电子经电

4、磁透镜多次放 大后成像的装置。其原理为样品不同部分对电子束的散射程度不同。主要用于观察样品精细结构。透射电子显微镜的分辨本领是指电镜处于最佳状态时的分辨率。透射电子显微镜的基本构造（1）照明系统：电子枪、聚光镜（2）成像系统：电磁透镜（物镜、中间镜、投影镜等）（3）真空系统（4）记录系统：荧光屏or感光底片透射电子显微镜的样品制备（1）超薄切片技术：固定包埋切片染色固定：使样品的形态、结构与性质尽可能不发生变化。固定剂的种类：锇酸、戊二醛、高锰酸钾包埋：使样品的精细结构在切片中得到支撑，获得的超薄切片连续完整并有足够的强度，耐电子轰击、耐高温、耐真空蒸发。包埋前常需脱水处理。包埋剂的要求：A.

5、高倍放大时不显示本身结构；B.聚合时不发生明显收缩；C.具有良好的机械性能。包埋剂的种类：环氧树脂切片：切片厚度的调控通常通过金属热膨胀或机械伸缩。染色：通常通过重金属盐对样品染色以形成明暗差，得到黑白图像。常用重金属盐A.锇酸-脂质铅盐-蛋白质醋酸铀-核酸（2）负染色技术负染色技术是指对背景染色的技术。通过用重金属盐对铺展在载网上的样品染色，使电子密度高的重金 属盐布满整个载网，而凸出载网表面的样品则没有染料沉积，从而使背景散射电子能力增强，而样品散射 电子能力减弱，以此衬托出样品的精细结构。负染色技术适合于观察生物大分子组成的结构，如：病毒、核糖体等。（3）冰冻刻蚀技术冰冻刻蚀技术主要用于

6、观察膜断面表面形貌与膜断面蛋白质，样品无需包埋、固定，能够更好的反应样 品的真实结构。冰冻断裂：在液氮中将样品迅速冷冻，之后在低温、真空环境下用冰刀将其切断。由于断面的冰在真空 中少量升华，可以增强刻蚀效果。刻蚀复型：用金属铂进行倾斜喷涂，以形成电子反差，再用碳垂直于断面进行真空喷涂，形成连续碳膜， 以复制样品的表面形貌。再用消化液消除样品本身，之后将之移到载网上用电镜观察。 二、扫描电子显微镜扫描电子显微镜概述扫描电子显微镜(SEM )是指利用高能电子束扫描样品，激发样品表面产生二次电子，进而依据样品 不同部位产生二次电子数量的多少而成像的装置。主要用于观察样品表面形貌。扫描电子显微镜的样品

7、制备喷镀技术在样品表面喷涂一层金膜，以增强其导电性。CO2临界点干燥法将样品浸入液态CO2中，在临界温度之上使CO2以气态逸出，由于没有气液相面产生，因此不存在表 面张力，故能够保持样品的表面形貌。相差显微镜小广告 O(G_Q)O| I大细胞 425297250相差显微镜相差显微镜概述相差显微镜是指利用光线的干涉、衍射特征，使相位差转变为振幅差，增强样品的明暗对比，从而观察无 色透明样品的装置。相差显微镜的特殊构件：相差板、环状光阑相差显微镜在物镜后装有相差板，相差板部分区域有吸光物质，使得光线分别通过相差板不同区域时相位 差增大，汇聚后经叠加使振幅增大或减小。从而将相位差转变为振幅差，增强样品的明暗对比。相差显微镜的优点：样品无需染色，可观察活细胞及细胞器动态。微分干涉显微镜微分干涉显微镜概述微分干涉显微镜是指以平面偏光为光源，光源经棱镜后分为两束，在不同时间经过样品相邻部位，再经 过另一棱镜后会合，从而使样品的厚度差转变为振幅差，增强样品的明暗对比，从而观察无色透明样品的