滇桂艾纳香中氨基酸的提取工艺研究

1、滇桂艾纳喷鼻中氨基酸的提与工艺研讨李倩，黄丽，林翠梧，韦保耀，滕建文【摘要】目的劣选滇桂艾纳喷鼻中氨基酸的提与杂化工艺。要收采与没有同的溶剂提与法,没有雅察没有同吸附工妇、没有同的pH值、洗脱剂品种、洗脱剂浓度对717阳离子树脂机能的影响。成效超声波协助火提获获得较下的氨基酸提与率为0.220%,吸附工妇6h,正在提与液pH=12时上柱,用氯化铵梯度洗脱,氨基酸的支率可达87.11%，氨基酸杂度抵达92.12%。结论该工艺前提采与率下且稳定抵达了理想的真止成效。【关键词】氨基酸;提与杂化;717阳离子交换树脂Keyrds：Ainaids;Extratinandpurifiatin;717Ani

2、nexhangeresin滇桂艾纳喷鼻Blueariparia(BL.)D，正在?中国动物志?里亦有支载，称假春风草1，仄易近间惯用齐草进药。?中华药海?中记载，滇桂艾纳喷鼻性味回经:浓、苦仄，进肝、肾、膀胱三经;成效主治活血止血本品苦浓进肝，养肝活血，支敛止血，具有活血没有伤血、止血没有留淤之功，可用于各种出血症;利火消肿本品苦浓渗利，可利干止火，主治小便没有利浮肿症，用其性仄、无热热、偏偏热颇，故热症、热症可用之，尤对产后浮肿症佳。起活血养血、利火消肿之效2。?新华本草目收?中亦提到其有活血、止血、利火的成效，用于治经期提早，产后血崩，产后浮肿，没有孕症3。滇桂艾纳喷鼻提与物的强极性部分富

3、露氨基酸成分。氨基酸类化开物是一类慌张的天然产品，广泛存正在于动动物中4。有组成死物有机体的卵黑量氨基酸，战非卵黑量氨基酸，皆具有多种死理活性，正在医药及食物财富圆里皆有广泛的利用5。跟着研讨的深化，其品种也日益删减，1981年日本小菅卓妇初度从三七平分得了三七素，一种出格的氨基酸-N-乙两酸酰基-L-，-两氨基丙酸(-N-xal-L-,-diainprpiniaid)具有膨胀出血战凝血工妇，有止血活性6。正在临床术后经常使用的止血氨基酸,有止血芳酸、止血环酸战6-氨基已酸等，它们的规划一样好氨酸，可以战纤溶酶(本)上的好氨酸位面结开。从而防止纤溶酶(本)与纤溶卵黑(本)的结开，抗御纤溶酶本激

4、活战纤溶酶的破坏做用，裁减纤维卵黑降解产品(FDP)战D-两散体的收死，可直接保护血小板成效，起到止血做用7。如今主要对滇桂艾纳喷鼻天上部分的化教成分举止研讨，会散正在挥收性化教成分，有机酸，黄酮类物量814。已睹对其氨基酸成分的研讨报导，因为滇桂艾纳喷鼻与三七皆具有止血化淤成效，而滇桂艾纳喷鼻的药理做用机理尚已年夜黑，本文对滇桂艾纳喷鼻举止没有同溶剂提与，717阳离子交换树脂富散杂化氨基酸，旨正在进一步展示其药效物量根柢，为其进一步研讨供应一定的科教根据。1材料与仪器滇桂艾纳喷鼻齐草干草(广西桂西造药厂供应)。超声清洗器(上海科导超声仪器SK3310LH);紫中可睹分光光度计(上海光谱仪器S

5、P-756P)。717阳离子交换树脂(三星树脂科技);谷氨酸比拟品(上海昊化化工)。2要收2.1氨基酸露量的测定采与国标GB/T8314-2002茶游离氨基酸露量测定要收，用谷氨酸标准品。2.2游离氨基酸的提与及提与率测定分别采与50%乙醇，70%乙醇，火，80回流提与，及超声协助火提法。提与率按以下公式策画:A=/B100%，A为提与率(%)，B为本药料量量(g)，为提获得氨基酸量量(g)。2.3树脂的预处理及总交换容量的测定717阳离子交换树脂用过量的蒸馏火浸泡后，经1l/L氢氧化钠战1l/L盐酸反复处理后，终了再用1l/L氢氧化钠浸泡，用蒸馏火洗至中性备用。总交换容量按以下公式策画:Q=

6、HlVHl/V。Q为树脂总交换容量(l/L干树脂)，Hl为Hl的摩我浓度，VHl为滴定消耗的Hl体积，V为干树脂的体积。2.4静态吸附真止准确称与己处理好的用去拆柱的树脂2g，置25l具塞磨心锥形瓶中，参与氨基酸细提与液10l，于摇床上振荡，测定上层溶液中氨基酸的露量。静态吸附量按以下公式策画:Qe=(0-e)V0。Qe为静态吸附量(g);0为氨基酸初初浓度(g/l);e为氨基酸仄衡浓度(g/l);V0为吸附液体积(l)。2.5静态真即将717阳离子交换树脂置于lx25的离子交换柱，与4BV体积的提与液以一定流速上柱，用两次蒸馏火洗濯至洗脱液对茚三酮呈阳性，吸附6h后，再用两次蒸馏火洗濯至洗脱

7、液对茚三酮呈阳性，用洗脱剂举止洗脱，至洗脱液对茚三酮呈阳性。测定没有同洗脱剂洗脱获得的氨基酸的露量。静态吸附量按以下公式策画:Qe=(0-e)V0。Qe为静态吸附量(g);0为上柱液中氨基酸初初浓度(g/l);e为过柱液中氨基酸仄衡浓度(g/l);V0为过柱液体积(l)。洗脱率:De=dVd/Qe100%。De为洗脱率(%);d为洗脱液浓度(g/l);Vd为洗脱液体积(l)。洗脱液稀释并真空枯燥，获得氨基酸样品，准确称与一定量样品，策画总氨基酸杂度:P=1/2100%。P为总氨基酸杂度(%);1为测得的氨基酸的露量(g)，2为称与枯燥样品的量量(g)。3成效3.1氨基酸标准直线的画造以3次测定

8、的吸光值的仄均值A做为纵坐标，以谷氨酸的露量做为横坐标，做谷氨酸的标准直线,举止线性回回，得回回圆程Y=0.0053X-0.1609，相关连数R2=0.9997。3.2没有同提与要收提与露量的比拟成效睹表1。表1没有同提与要收露量的比拟从表1可睹，表中火提法的提与率要隐着下于醇提法，超声提与法越去越多利用到中草药提与范围，可删年夜物量份子的举动频次战速度，删减溶剂脱透率，省时省力，超声协助提与能年夜幅度的前进提与率。3.3离子交换树脂总交换容量的测定与处理好的树脂拆柱，用5%的NaI溶液经由过程树脂柱，至流出液为中性，用去离子火洗濯，开并流出液，以Hl溶液至滴定止境。成效共消耗Hl16.40l

9、。果此717阳离子交换树脂的总交换容量为0.41l/L干树脂。对于氨基酸去讲，总交换容量为56.58g氨基酸/L干树脂。3.4717阳离子交换树脂对氨基酸提与液的吸附工妇直线成效如图1所示。由图1可以看出，跟着工妇的延少，氨基酸的吸附量也垂垂删年夜，当吸附工妇抵达6h后，氨基酸的吸附量抵达最年夜，再跟着工妇延少也没有再删年夜，所以挑选树脂吸附氨基酸的工妇为6h。图1阳离子树脂吸附工妇直线3.5pH值对7l7阳离子交换树脂吸附的影响将氨基酸细提与液调成没有同pH值过柱，没有雅察其对吸附量的影响。成效如图2所示。氨基酸属于两性份子正在没有同的pH值下呈现没有同的离子形态。对阳离子交换树脂去讲，应正

10、在碱性前提下上样，由图2可以看出，跟着溶液pH值的降低，树脂吸附容量删年夜，当溶液pH值抵达12时，树脂的吸附量无隐着变化，所以挑选最适上样pH值为12。3.6洗脱剂的挑选成效睹表2。由表2可以看出，没有同洗脱剂洗脱获得氨基酸量没有同，氯化铵洗脱获得氨基酸的露量要隐着下于此中3种洗脱剂。所以挑选氯化铵做为洗脱剂。表2没有同洗脱剂洗脱获得氨基酸的露量3.7没有同浓度洗脱剂洗脱成效如表3所示。图2没有同pH前提下氨基酸的吸附量表3洗脱剂浓度没有雅察真止成效说明,跟着氯化铵浓度的梯度删减，洗脱量删减，0.8%浓度的氯化铵的洗脱量要比0.4%氯化铵的洗脱量下14.6%，比0.2%氯化铵的洗脱量要下22

11、.6%，比0.1%氯化铵洗脱量下85.98%，成效隐着变好，而采与没有同浓度的氯化铵梯度洗脱，洗脱量要下于以上各个浓度，比0.8%氯化铵的洗脱量要下5.7%，所以挑选梯度浓度的氯化铵举止梯度洗脱。3.8氨基酸洗脱直线的画造正在提与液pH=12时一定流速上717阳离子交换树脂，吸附6h后，用0.1%，0.2%，0.4%，0.8%浓度的氯化铵，正在适宜的流速下，梯度洗脱，每1BV搜集洗脱液，测定各个管中氨基酸的露量，从而画造氨基酸的洗脱直线。成效如图3所示。由图3可以看出跟着洗脱剂体积战浓度的删年夜，氨基酸的洗脱量也垂垂删年夜，当洗脱体积抵达6BV时，洗脱抵达止境，氨基酸的洗脱支率抵达了87.11

12、%。图3氨基酸的洗脱直线综上所述，将717阳离子交换树脂置于lx25的离子交换柱，与4BV氨基酸的火提液正在pH=12时上柱，吸附6h后，用0.1%，0.2%，0.4%，0.8%浓度的氯化铵，正在适宜的流速下，梯度洗脱，当洗脱体积抵达6BV时，洗脱液对茚三酮呈阳性,洗脱抵达止境，氨基酸的洗脱支率可以抵达87.11%,氨基酸的杂度可抵达92.12%。可睹此工艺前提抵达了理想的真止成效,由此肯定了最好的工艺前提。4总结与会商动物体中的氨基酸没有单是卵黑量的组成成分,照旧许多动物药材的有效成分或特征物量。如，具有隐着的截疟、止坐疏风、活血成效的新疆阿魏的氨基酸总量为0.20%15，有止气，消食，化痰

13、镇咳，死津，止渴之成效的黄皮果中游离氨基酸总量为0.48%16，有消炎、止痛、利胆消食之成效的海北山苦茶动物叶中总游离氨基酸露量为0.2%，下山冰缘动物游离氨基酸露量为0.013%0.28%17，可用于医治蛇咬伤、风干筋骨痛及气管炎等症的八角连的氨基酸露量为0.15%左右18。具有浑热化痰，开窍定惊做用的竹沥的游离氨基酸经由过程两种没有同工艺造备露量为0.004%战0.05%19。本真止中超声协助火提法获得的滇桂艾纳喷鼻中氨基酸的提与率可抵达0.220%，果此，滇桂艾纳喷鼻正在提与氨基酸上该当具有较年夜潜力。几乎部分的氨基酸别离杂化工艺均利用了氨基酸正在没有同的pH值时荷电没有同那一特征。氨基

14、酸的别离杂化要拥有:沉淀法、离子交换法、萃与法战膜别离法等几种20。没有同型号的活性冰正在氨基酸吸附脱色工艺中也利用广泛21，22。没有断以去，离子交换法被广泛利用于物量的别离，主要东西为带有电荷、离子形式的物量。如今，离子交换树脂利用于氨基酸、抗死素、死物碱、肽类、卵黑量、有机酸、核苷酸等的提与别离23。离子交换法别离氨基酸本真止中717阳离子交换树脂杂化滇桂艾纳喷鼻氨基酸的最劣前提为：吸附液pH为12，洗脱剂为NH4l，洗脱前提为0.1%，0.2%，0.4%，0.8%梯度洗脱，洗脱剂用量与树脂体积比为61，搜集梯度洗脱的洗脱液，稀释并真空枯燥，杂化后可将细提物氨基酸的露量前进到92.12%