基因芯片在胃癌及肿瘤球细胞差异表达基因筛选中的应用探讨

1、基因芯片在胃癌及肿瘤球细胞差异表达基因筛选中的应用探讨【摘要】目的：探讨基因芯片在胃癌及肿瘤球细胞差异表达基因筛选中的应用价值。方法：有血清培养液的条件下、无血清培养液的条件下，分别进行人胃癌细胞HCG-27的培养，进行总RNA的提取、纯化、基因表达谱芯片杂交处理，采集芯片图像，读取和分析相关数据。结果：应用DMEM培养基，在有血清培养液培养的过程中，可见胃癌细胞HCG-27均匀生长。应用DMEM/F12培养基，在无血清培养液培养的过程中，可见致密状态肿瘤球形成。在总RNA提取后，应用基因芯片技术进行试验。经过基因表达谱芯片杂交，采集芯片图像以及读取、校正和数据，对照胃癌细胞HCG-27和肿瘤

2、球细胞，存在差异表达基因 924条。结论：应用基因芯片技术，进行胃癌及肿瘤球细胞差异表达基因的筛选，明确胃癌与肿瘤球细胞的相关性，为胃癌的临床诊疗工作提供有价值的参考。【关键词】基因芯片；胃癌；肿瘤球细胞；基因表达胃癌的临床治疗过程中，疾病的分期、组织类型以及治疗干预时间，在一定程度上影响着患者的预后。在胃癌发生早期，及时进行根治性手术治疗，可以获得较为理想的治疗效果，增加治愈疾病的可能性。病情发展至晚期，疾病的危险程度更高、治疗难度更大，患者的预后往往较差1。胃癌的早期诊治，应用基因芯片技术，根据胃癌细胞的基因表达，分析肿瘤发生机制。受到细胞生长因子诱导的影响，富集肿瘤干细胞，进而形成肿瘤球

3、。肿瘤干细胞具有自我更新的特点，同时还存在着多向分化潜能，对于肿瘤的发生、转移产生着重要的影响，与疾病的复发有着密切的联系。应用基因芯片技术，针对胃癌细胞、肿瘤球细胞进行检查，从中筛选差异表达基因，能够为疾病的诊治提供有价值的参考，进而寻找更为安全、有效的胃癌治疗方法，探究新的治疗途径，对于提高胃癌的治疗成功率和改善患者的预后有着积极的影响2。1材料与方法1.1.材料应用胃癌细胞HCG-27（通派生物科技有限公司），标准级胎牛血清（爱必信生物科技有限公司），胰蛋白酶（山东谷硕生物科技有限公司），DMEM培养基（上海信裕生物技术有限公司），DMEM/F12培养基（维森特生物技术有限公司），EGF

4、（上海博湖生物科技有限公司）以及bFGF（上海蓝基生物科技有限公司）作为试验材料。1.2方法在DMEM培养基中，加入10% 胎牛血清+青霉素（100U/ml）+链霉素（100g/m），有血清培养液的条件下进行胃癌细胞HCG-27的培养。将DMEM培养基置于恒温培养箱（37，5%CO2）。在培养期间，密切关注细胞生长情况，及时更换培养液。细胞传代消化时，基于0.25%的胰蛋白酶。与此同时，在DMEM/F12培养基中，加入青霉素（100U/ml）+链霉素（100g/m）+EGF（20ng/ml）+bFGF（10ng/ml），无血清培养液的条件下进行胃癌细胞HCG-27的培养。将DMEM/F12培养

5、基置于恒温培养箱（37，5%CO2），在培养期间，密切关注肿瘤球形成情况。完成胃癌细胞培养和肿瘤球细胞培养后，进行总RNA的提取。该过程中，应用Trizol试剂提取RNA，并进行纯化、定量等操作，检测RNA质量（甲醛变性胶电泳）。在此基础上，进行基因表达谱芯片杂交（45），持续18h左右。针对基因芯片进行洗涤、染色处理，经扫描后，采集芯片图像，读取和校正数据。结合数据资料，对于胃癌及肿瘤球细胞差异表达基因进行筛选。2结果2.1肿瘤球培养结果分析肿瘤球培养结果，有血清培养液培养的过程中，可见胃癌细胞HCG-27均匀生长。无血清培养液培养的过程中，可见肿瘤球形成，呈致密状态，肿瘤球形成时间为培养后

6、7d左右。2.2总RNA提取提取胃癌细胞HCG-27和肿瘤球细胞的总RNA。通过紫外分光光度计检测、甲醛凝胶电泳后。根据A260/ A280值（1.794）、RNA电泳图，确认无蛋白质污染、无降解等情况，RNA的完整度高，符合芯片实验要求。2.3芯片图像数据经过基因表达谱芯片杂交后，根据各位点信号强度，对于基因表达水平进行判断。采集芯片图像，对相关数据进行定性、定量分析。参考差异显著性标准（2倍差异），进行胃癌细胞HCG-27和肿瘤球细胞的对照。其中差异表达基因 924条（表达上调319条、表达下调605条）3讨论在胃癌的临床诊断和治疗中，将肿瘤干细胞理论应用其中，分析疾病的发病机制。该过程中，胃癌的发生、进展与肿瘤球细胞联系起来。在细胞生长因子的作用下，肿瘤干细胞发生增殖、分化，逐渐富集，进而形成肿瘤球3。肿瘤球细胞的特异基因表达，与胃癌的发病机制存在着一定的联系4。应用基因芯片技术，对于胃癌细胞、肿瘤球细胞的差异表达基因进行筛选和分析，判断肿瘤球细胞是否参与到