版稀释平板计数法

1、实验十一稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基来源理和方法。实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适合稀释以后，此中的微生物充分分别成单个细胞，取必定量的稀释样液接种到平板上，经过培育，由每个单细胞生长生殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。可是，因为待测样品常常不易完整分别成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的23或更多个细胞。所以平板菌落计数的结果常常偏低。为了清楚地论述平板菌落计数的结果，此刻已偏向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对

2、菌落数来表示样品的活菌含量。平板菌落计数法固然操作较繁，结果需要培育一段时间才能获得，并且测定结果易受多种要素的影响，可是，因为该计数方法的最大长处是能够获取活菌的信息，所以被宽泛用于生物制品查验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水包含水源水等的含菌指数或污染程度的检测。实验器械酿酒酵母菌悬液马铃薯培育基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培育箱等。实验步骤1无菌器械的准备无菌培育皿：取培育皿9套，包扎、灭菌。(2)无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少量（长约11.5cm），以防将菌液吸出，同时也可防止将外面的微生物吹入。棉花要塞得松紧适合吹时能通气但不使棉花滑下为准。

3、而后将移液管尖端放在45cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前转动，以螺旋式包扎起来，上端节余纸条折叠打结后干热灭菌。(3)无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。2样品稀释液的制备编号取无菌平皿9套，分别用记号笔注明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，挨次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。稀1m1无菌吸管汲取1m1己充分混匀的菌液(待品)，精准地放0.5ml至10-1的管中，此即10倍稀。将剩余的菌液放回原菌液中。将10-1管置管振器上振，使菌液

4、充分混匀。另取一支1m1吸管插入10-1管中往返吹吸菌液三次，一步将菌体分别、混匀。吹吸菌液不要太猛太快，吸吸管伸入管底，吹走开液面，免得将吸管中的棉花浸润或使管内液体外溢。用此吸管汲取10-1菌液1ml，精准地放0.5ml至10-2管中，此即100倍稀。其他挨次推，整个程如所示。放菌液吸管尖不要遇到液面，即每一支吸管只好接触一个稀度的菌液，否稀不正确，果差大。3平板接种培育平板接种培育有注平板培育法和涂布平板培育法两种方法。注平板培育法取用三支1ml无菌吸管分汲取10-4、10-5、和10-6的稀菌液各1ml，号放入好号的无菌平皿中，每个平皿放0.2ml。不要用1ml吸管每次只靠吸管尖部吸0

5、.2ml稀菌液放入平皿中，简单加大同一稀度几个重复平板的操作差。2)倒平板赶快向上述盛有不一样稀度菌液的平皿中倒人消融后冷却至45左右的培育基15毫升平皿，置水平地点快速旋平皿，使培育基与菌液混淆均匀，而又不使培育基出平皿或到平皿盖上。待培育基凝结后，将平板倒置于37恒温培育箱中培育。因为菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培育皿后，赶快倒入消融并己冷却至45左右的培育基，立刻匀，否菌将不易分别或成的菌落在一同，影响数。涂布平板计数法：平板菌落计数法的操作除上述倾注倒平板的方式之外，还能够用涂布平板的方式进行。两者操作基真同样，所不一样的是后者先将培育基消融后倒平板，待凝结后编号，并于37左

6、右的温箱中烘烤30min，或在超静工作台上适合吹干，而后用无菌吸管汲取稀释好的菌液对号接种于不一样稀释度编号的平板上，并赶快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上2030min，使菌液渗透培育基表层内，而后倒置于的恒温箱中培育2448h。涂布平板用的菌悬液量一般以0.1ml较为适合，假如过少，菌液不易涂布开；过多则在涂布完后或在培育时菌液仍会在平板表面流动，不易形成单菌落。4计数培育48h后，拿出培育平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落均匀数，并按以下公式进行计算：每毫升中菌落形成单位(cfu)同一稀释度三次重复的均匀菌落数稀释倍数5一般选择每个平板上长有30300个菌落的稀释度

7、计算每毫升的含菌量较为适合。同一稀释度的三个重复比较的菌落数不该相差很大，不然表示试验不精准。实质工作中同一稀释度重复比较平板不可以少于三个，这样便于数据统计，减少偏差。由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不该相差太大。平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的。一般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板培育后所出现的均匀菌落数在50个左右为好，不然要适合增添或减少稀释度加以调整。实验结果及议论1实验结果将培育后菌落计数结果填入下表：10-410-510-6稀释度123均匀123均匀123均匀cfu数/平板每ml中的cfu数2议论针对实验原理、步骤、现象进行议论。实验作业1为何消融后的培育基要冷却至45左右才能倒平板？2要使平板菌落计数正确，需要掌握哪几个重点？为何？3试比