弓状核损毁对小鼠ghrelin餐前分泌峰的影响

1、弓状核损毁对小鼠ghrelin餐前分泌峰的影响弓状核损毁对小鼠ghrelin餐前分泌峰的影响【关键词】弓状核;ghrelin;小鼠【摘要】目的观察损毁新生小白鼠弓状核后是否会引起血浆ghrelin程度的变化。方法取第12周正常对照小鼠和谷氨酸单钠(sg)处理的小鼠，内眦取血，酶联免疫分析(eia)法测血浆ghrelin程度;小鼠弓状核冷冻切片，甲酚紫染色观察尼氏体变化;取小鼠胃体黏膜组织，estenblt检测prghrelin蛋白表达的变化。结果sg处理组小鼠下丘脑弓状核尼氏体神经元数量明显少于正常对照组小鼠(t=5.21,p0.01)。两组小鼠血浆ghrelin程度在禁食前后均有明显变化，但

2、两组小鼠之间比拟差异无显著性。与禁食前相比，禁食48h后两组小鼠胃体黏膜组织中prghrelin蛋白表达程度明显升高，但禁食前后两组小鼠之间比拟差异无显著性。结论下丘脑弓状核对sg处理的小白鼠血浆ghrelin程度的调控并不是必需的。【关键词】弓状核;ghrelin;小鼠keyrdsaruatenuleus;ghrelin;ieghrelin是由胃黏膜x/a内分泌细胞释放的一种“生长素促分泌素(ghs)，是ghs受体的内源性配体1。最初观察到ghrelin具有强烈刺激生长素分泌的作用，随后很快发现它可刺激摄食和新陈代谢2。包括人类在内的多种动物给予ghrelin后均增加其摄食量。ghrelin

3、为迄今惟一的由胃肠道分泌的饥饿激素，是启动摄食的饥饿信号。无论是人还是其他动物，血浆ghrelin都有一个餐前分泌峰3，而进食后出现一个餐后抑制。另外，许多文献报道新生鼠给予谷氨酸单钠(sg)处理可选择性地损毁弓状核npy/agrp神经元4，luquet等5报道弓状核npy/agrp神经元为成年鼠所必须，而新生鼠弓状核损毁后摄食正常。本研究旨在观察损毁新生小鼠弓状核后是否会引起血浆ghrelin程度的变化。1材料和方法1.1动物分组及处理新生安康昆明种小白鼠32只，雌雄不限，由青岛市药检局提供。随机分为正常对照组和sg处理组，每组16只。sg处理组小鼠出生后隔日(第1、3、5、7和9天,共5次

4、)于颈部皮下注射sg(4g/g体质量)，而正常对照组只注射同体积的生理盐水。于第4周断乳后，小鼠自由进食、饮水，自然昼夜节律光照。1.2标本采集12周后，两组小鼠经乙醚麻醉后，分别于禁食前、禁食48h、进食1h后内眦各取血0.5l，放入已预先参加edta(2g/l)及抑肽酶(5105u/l)处理的ep管中，4下3000r/in离心15in，取上清液，于-80保存。正常对照组和sg处理组小鼠随机再分为禁食前、禁食48h组，每组各8只，所有小鼠在规定的时间点采用颈椎脱臼法处死，结扎胃上下两端，速取约50g胃体部组织，立即行液氮速冻，24h后转移至-80冰箱，以备ghrelin免疫印迹实验。然后小鼠

5、经主动脉灌注，断头取脑组织并以40g/l多聚甲醛溶液浸泡24h，分别以200、300g/l蔗糖作用24h;液氮速冻，冷冻切片机切片，片厚为20，置于-80储存备用。1.3甲酚紫染色切片浸于体积分数1.00氯仿中约30in，体积分数1.00丙酮中约15in，体积分数1.00乙醇30s，体积分数0.95乙醇30s，体积分数0.70乙醇30s，超纯水清洗3次;10g/l焦油紫染色10in，超纯水清洗3次;体积分数0.70乙醇60s，体积分数0.95乙醇60s，体积分数1.00乙醇60s，体积分数1.00氯仿5s，分化剂约15s;体积分数0.95乙醇30s，体积分数1.00乙醇60s(共2次)，二甲苯

6、5in(共2次)，中性树胶固封。1.4酶联免疫分析(eia)法测定血浆ghrelin浓度1.5esternblt测定小鼠胃黏膜prghrelin蛋白表达1.6统计学处理采用spss16.0及pps1.57软件进展统计学分析。实验数据以s表示，组间比拟采用t检验和方差分析，以p0.05为差异有统计学意义。2结果2.1甲酚紫染色sg处理组小鼠下丘脑弓状核切片平均吸光度值(0.240.09)明显低于正常对照组的(0.830.11)，差异有显著性(t=5.21,p0.01)。2.2各组小鼠血浆ghrelin程度比拟sg处理组小鼠在禁食48h后血浆ghrelin程度也明显高于禁食前，进食后血浆ghrel

7、in程度又明显降低(f=5.031，p0.01);正常对照组小鼠在禁食48h后血浆ghrelin程度明显高于禁食前，进食后血浆ghrelin程度又明显降低(f=2.650，p0.05)。sg处理组与正常对照组小鼠比拟，无论是在禁食前、禁食48h，还是进食后，血浆ghrelin程度差异均无显著性。见表1。2.3各组小鼠胃黏膜prghrelin程度比拟sg处理组及正常对照组小鼠禁食48h后胃黏膜组织prghrelin蛋白表达分别为1.410.12、1.320.14，禁食前分别为0.820.09、0.710.09，两组小鼠在禁食48h后胃黏膜组织prghrelin蛋白表达均明显高于禁食前(t=4.3

8、9、3.54，p0.01)。而两组小鼠之间相比拟，在禁食前、后胃黏膜组织prghrelin蛋白表达程度差异均无显著性。见图1。表1禁食前后两组小鼠血浆ghrelin程度3讨论相比拟而言，进食对血浆ghrelin餐后抑制研究比拟详尽，认为其餐后抑制可能是摄入营养物质后所产生饱感效应的机制之一，此餐后抑制和饱感信号k有协同作用，从而终止进食。三大营养物质，以葡萄糖引起餐后抑制最强，而以脂肪最弱。进一步研究说明，并非营养物质入胃或胃扩张，而是营养物质进入十二指肠或小肠介导此餐后抑制8。本文旨在观察新生小鼠皮下注射sg导致下丘脑弓状核大局部神经元受到破坏后，是否使血浆ghrelin程度发生改变。结果显示，无论是sg处理的小白鼠，还是正常对照小白鼠，禁食48h后，血浆ghrelin程度照旧比根底程度升高明显，餐前分泌峰照旧存在;再进食后血浆ghrelin程度又明显降低。且两组小白鼠胃黏膜ghrelin前体蛋白prghrelin在禁食前后亦有明显变化，