氯霉素ELISA检测试剂盒说明书模板

1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。氯霉素(C hloramphenicol) ELISA检测试剂盒说明书一、概要氯霉素(chloramphenicol, CAP) 是应用广泛的抗菌素，曾对畜禽疾 病控制和治疗起到了重要作用。但 由于氯霉素存在严重的副作用，能 引起人的再生障碍性贫血，粒细胞 缺乏症等疾病，欧美等发达国家已 相继禁止或严格禁止使用。本试剂盒是应用ELISA技术研 发的新一代药物残留检测产品，能 最大限度地减少操作误差和工作强 度。操作时间仅需1.5小时。二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA 方法,在酶标板微孔条上预包被偶 联抗原,样本中残留的氯霉

2、素和微 孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯 霉素抗体，加入酶标二抗后，用 TMB底物显色，样本吸光值与其残 留物氯霉素的含量成负相关，与标 准曲线比较再乘以其对应的稀释倍 数，即可得出样品中氯霉素的含量。三、适用范围可定性、定量检测动物组织(肌肉、肝脏等)、尿液、血清、 肠衣、牛奶、奶粉等样本中氯霉 素的残留量。四、交叉反应率氯霉 素 100%;琥 珀 氯 霉 素92%;氯霉素-葡萄糖苷 酸57%。五、使用单位需自备的设备及试剂 设备：微孔板酶标仪450nm/630nm旋转蒸发仪/氮气吹干装置均质器振荡器涡旋仪离心机刻度移液管:10ml一 “洗耳球容量瓶：100ml、500ml玻璃试管:10ml聚

3、苯乙烯离心管：10ml、15ml、 50ml一微量移液器：单道20ml 一 200ml、100ml1000ml多道250ml试剂：乙酸乙酯（分析纯）乙睛（分析纯）正己烷（分析纯）-二水合亚硝基铁氰化钠（分析 纯）（供奶样用）七水合硫酸锌（分析纯）（供奶 样用） 葡萄糖苷酸酶 （Merck,Art.No.4114）（供尿样本用） 醋酸钠（分析纯）（供尿样本 用）肝素钠（分析纯）（供血样本醋酸（分析纯）（供尿样本用）-去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板X1块（包被有偶联 抗原）2、标准液x6瓶:（2ml/瓶）0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb

4、,2.025ppb3、高浓度标准品：（2ml/瓶）100ppb、酶 标 二 TOC o 1-5 h z 抗7ml、 抗体工作液7 ml、底物液A液7ml、底物液B液7ml、终止液7 ml9、2 0 x浓缩洗涤液40 ml1 0、2 x浓缩复溶液 50ml七、溶液的配制配液1： C液（供奶样专用）0.36M二水合亚硝基铁氰化钠（Na2Fe（CN）.-NO-2H2O）溶液称取10.7g二水合亚硝基 铁氰化钠加去离子水溶解定容 至 100ml。配液2: D液（供奶样专用）1M七水合硫酸锌（ZnSO47H2O）溶液称取28.8g七水合硫酸锌加 去离子水溶解定容至100ml。配液3: pH4.8 100

5、mM醋酸钠溶液（供尿样本用）称取2.4g醋酸钠，加入1.2ml醋酸，再加去离子水溶解定容至500ml配液4:乙睛-水溶液量取84ml无水乙睛加入到16ml去离子水中混匀配液5:复溶工作液用去离子水将2x浓缩复溶液 按1: 1体积比进行稀释（1份2x 浓缩复溶液+1份去离子水）用 于提取样本的复溶，复溶工作 液在4C环境可保存一个月。配液6:洗涤工作液用去离子水将20 x浓缩洗 涤液按1: 19体积比进行稀释 （1份20 x浓缩洗涤液+19份去 离子水）用于酶标板的洗涤， 洗涤工作液在4C环境可保存 一个月。八、样本前处理步骤 样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：（a）实验中必须使用一次性

6、吸头， 在吸取不同的试剂时要更换 吸头。（b）实验之前须检查各种实验器 具是否洁净，必须使用洁净 实验器具，以避免污染干扰 实验结果。处理样本的同时，做空白试剂对照,样本的测定结果减去空白试剂的测定结果为样本中氯霉素的实际残组织样本空白对照试剂的本中氯霉素的实际残制备取4ml乙酸乙酯在氮气流下完全干燥；用1ml正己烷充分溶解；加入1ml复溶液工作液(见配液5),强烈振荡1min,静置分层后去除上 层正己烷相；取100ml水相用于分析。未处理的样本冷冻保存。处理后的样本可在2-8避光保存24h。未加正己烷之 前，吹干的样本保存效果 更好。处理后的样本，如出现乳化现象，可在去除部分上层 有机相,6

7、0C水浴5一 10min消除乳化后，再重复 离心步骤。(-)组织(鸡肉/肝、猪肉/肝、 虾、鱼等)前处理方法用均质器均质组织样本；称取3.00.05g均质物至50ml 聚苯乙烯离心管中，加入6ml 乙酸乙酯,用振荡器振荡 10min, 3000g以上，室温 (20-25 )离心 10min;移取4ml上层有机相(约相当 于2g的样本)至10ml干净的 玻璃试管中，于5060C水浴 氮气流下吹干；-加入1ml正己烷，用涡旋仪涡 动30s,再加1ml复溶工作液 (见配液5),用涡旋仪涡动 1min, 3000g以上，室温 (20-25 C)离心 15min;除去上层有机相，取下层 100ull用于

8、分析。注：在检测动物肝脏样品时,加入资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。1ml正己烷溶解干燥的残留物,动2min溶解干燥的残留物;再加1ml复溶工作液后，只需振 荡10s,离心后取下层即可分析； 在检测高脂肪样本时正己烷用量可加大2ml - 3ml。（二）鸡血前处理方法一用加有肝素钠（ 20-30单位/ml 血）的离心管采集鸡血样本 （建议采血注射器也用肝素钠 润洗），血样本室温静置1h,待析出血浆后,3000g以上, 15 C 离心 10min;一取1ml血浆至10ml聚苯乙烯离 心管中，加2ml乙酸乙酯振荡 1min;室温（20-25 ）下静置待水相 与有机相完全分层或3000g以 上，室温（20-25C）离心5min;移取上层的有机相至15ml干 净的玻璃试管中，于5060C 氮气流下吹干；-干燥的残留物加入1ml复溶工 作液（见配液5）,用涡旋仪涡取100ml用于分析。（三）尿液前处理方法将尿液于3000g以上，室温（20-25 C）离心5min，直至尿 液样本清亮；移取2ml清亮尿液样本至50ml 聚苯乙烯离心管中，加0.5ml pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液 （见配液3）混合；加40ml葡萄糖苷酸酶（Merck,Art.No.4114）至稀释的 尿液样本中，置37C水解至少 2h