液相色谱-基础课件

1、液相色谱基础知识色谱的发明人俄国科学家：M. S. Tswett正式命名“色谱”的文献一、色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱经典液相色谱色谱法简介色谱法（Chromatography）溯源俄国科学家1903年发现色谱的吸附原理，开创了应用吸附原理分离植物色素的新方法并见诸于俄文的文献1906年正式命名（见诸文献）色谱法；Chromatography50年代开始广泛研究和应用主要是气相色谱及薄层色谱高效液相色谱法的广泛应用始于70年代色谱分离的机理色谱是一种分离技术色谱分离是一个物理过程流动相（Mobile Phase）固定相（Stationary Phase）样品（溶解于流动相中的溶质）液相色

2、谱分离机理 高效液相色谱是一种以液体作流动相和固体微粒作固定相，待测组分在柱内的两相之间进行高速分配和高效分离的柱液体色谱方法。 样品溶液中的各组分，因其物理化学性质的微小差异，当其随流动相进入色谱柱后，便在柱的两相之间产生不同的相互作用力，从而导致柱上迁移速率的微小差异。 随着流动相的连续推移，这种微小的差异被不断扩大，直至柱内出现明显不同的迁移距离，使最终达到组分完全分离。什么是液相色谱气相色谱：流动相是气相液相色谱：流动相是液相HPLC的仪器配置色谱泵（主机）自动进样器色谱柱及柱温箱检测器数据处理系统溶剂 流动相高效液相色谱基本概念 色谱峰或色谱谱带 基线噪音 基线漂移 检测限（敏感度）

3、 色谱峰对称性 色谱定性参数 色谱柱效能参数液相色谱图相关术语色谱峰 Peak色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线峰底 Peak Base峰的起点与终点之间连接的直线峰高 Peak Height峰最大值到峰底的距离峰宽 Peak Width在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离半（高）峰宽 Peak Width at Half Height通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离液相色谱实验所需的基本参数液相色谱实验所需的基本参数流动相：种类及配比，等度或梯度固定相：色谱柱类型及内径、粒径、长短流动相流速检测器参数：紫外检测波长或其他检测器相应参数柱

4、温度进样量以上参数即构成一个具体的HPLC方法， 亦称色谱条件色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。 色谱峰保留时间（分）基线峰高峰宽响应值色谱峰或色谱谱带流出曲线上的突起部分称为色谱峰正常色谱峰为对称形正态分布曲线不对称色谱峰有两种：前延峰和拖尾峰色谱流出曲线图及相关参数 样品进入色谱柱，经流动相冲洗，由检测器测得的信号-洗脱时间曲线，即色谱图。对称因子计算示意图 色谱峰的对称性对称因子： a. 拖尾因子 b. 不对称因子峰对称因子计算公式对称因子(fs)：式中： fs=0.951.05为正常峰 fs0.95为前延峰 fs1.05为拖尾峰色谱柱效能参数计算示意图色谱柱的柱效 N理论塔板数计算公式：Ws 方法Wtan16切线法Wh5.54半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s理论板数(n)计算公式或（通常用）： 若应用调整保留时间 tR计算理论塔板数，所得值称为有效理论塔板数( n有效或 neff )分离度(R）计算方法示意图高效液相谱分离的基本方程式 影响