微生物基础培训(2013年集团)

1、 主讲人:陈会珍 2013.8微生物基础知识培训华北制药金坦公司引言药品生产质量管理规范对微生物控制及微生物基础知识培训的要求第三条:本规范作为质量管理体系的一部分,是药品生产管理和质量控制的基本要求,旨在最大限度地降低药品生产过程中的污染、交叉污染以及混淆、差错的风险第二十九条:所有人员都应当接受卫生要求的培训,企业应建立人员卫生操作规程,最大限度地降低人员对药品生产造成污染的风险. 药品生产质量管理规范附录中明确规定:洁净室内的人员数量应严格控制.其工作人员(包括维修、辅助人员)应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核。 药品生产中的污染的定义:不只是有微生物污染,还包

2、括尘粒和非药品中的其他成分.对于制药企业的污染,微生物比尘粒更难控制。原因有以下： 1、存在范围广。 2、生长速度快。 3、生存能力强。尘粒污染尘粒污染：是指产品因混入不属于它的那些尘粒而变得不纯净。尘埃、污物、棉绒、纤维以及我们的头发都是尘粒污染的潜在原因。临床资料表明：如药品被72m的尘粒污染了，尤其是静脉注射用药，可以导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的会致人死命。 微生物污染： 微生物中也有一部分能使人或动植物得病.这些具有致病性的微生物被称为病原微生物.例如人类的许多传染病(感冒、伤寒、痢疾、结核、病毒性肝炎、脊髓灰质炎等),均有病原微生物引起. 对我们制药企业来说,

3、微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成产品不合格的重要因素.微生物污染可能造成药品污染的后果: 药品染菌程度直接影响其内在质量.如果药品被微生物污染,其有效成分会遭到破坏,从而失去有效性,如各种含糖类制剂经污染菌氧化或发酵而分解,pH值被改变等.药品被污染后还可产生毒素,应用被绿脓杆菌污染的眼科制剂时,有可能使患者再感染,产生溃疡,甚至失明;应用被肠道致病菌污染的药品,将会导致肠道疾病;应用表面创伤的药品,污染金黄色葡萄球菌,可能使患者发生败血症;吸入污染霉菌或细菌的气雾剂将会导致患者肺部感染等. 微生物污染还可能导致产生热原。热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质

4、。这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。 致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。 热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。主要内容微生物概述微生物的形态微生物的结构微生物的特点微生物的分布微生物与人类关系消毒与灭菌微生物概述微生物定义：微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。它们是一些个体微小、构造简单的低等生物。大多为单细胞，少数为多细胞，还包括一些没有细胞结构的生物。微生物的分类根据微生物在形态、结构以及生物学性状等

5、方面的差异、可区分为细菌（包括细菌、支原体、螺旋体、立克次体、衣原体及放线菌）、真菌（包括霉菌与酵母）、原虫、藻类及病毒等。从细胞结构差异来区分： 非细胞型微生物：无典型的细胞结构，仅由核心和蛋白质衣壳组成，是最小的一类微生物。核心中只有RNA或DNA一种核酸，无产生能量的酶系统，只能在活细胞内生长繁殖。病毒为其代表。 原核细胞型微生物：细胞的分化程度低，仅有原始核质，呈环状裸DNA团块结构，无核膜和核仁；胞质内细胞器不完善，只有核糖体。属于原核细胞型的微生物统称为细菌，包括古细菌、真细菌、和蓝细菌。 真核细胞型微生物：细胞核的分化程度较高，有核膜和核仁；胞质内细胞器完整。真菌属于此类微生物。

6、微生物的形态微生物形态酵母菌的形态：球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等霉菌的形态：丝状病毒的形态：球状、卵圆形、砖形、杆状、丝状、蝌蚪状等 粘质沙雷氏菌的菌落特征 沙门氏菌的菌落特征 铜绿假单孢菌的菌落特征 弗氏志贺氏菌的菌落特征 粘质沙雷氏菌的菌落特征 各种细菌的菌落 各种曲霉的菌落 各种病原真菌的菌落 青霉的菌落 青霉的菌落 蘑菇葡萄球菌微生物形态不同形态的球菌不同形态的球菌杆菌（Bacillus）不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。乳酸杆菌不同形态的杆菌不同形态的杆菌炭疽杆菌 炭疽杆菌是人类历史上第一个被证实引起疾病的细菌。1877年Robert Koch首次在培养基上培养成功，并说明

7、其可形成内孢子体，注射动物后可导致实验性炭疽，是出现在历史上比较久的一种生物武器，也是战争中常用的一种细菌，曾使无数人丧命。二战时期，日本731部队曾经大量培养炭疽病菌，并用活人标本进行实验。炭疽杆菌是一种很大的革兰氏染色阳性杆菌，可在普通培养基上需氧或厌氧条件下培养。 芽孢杆菌不同形态的杆菌蜡样芽孢杆菌螺形菌（SPIRAL BACTERIUM） 淡水中的螺旋菌酵母菌 青霉是种真菌，属于子囊菌。 有的能产生青霉素，救了无数人的命。 产生无性孢子。根霉（Rhizopus)是种真菌，属于接合菌。能产生无性孢子菌丝体的直径约12 um黑的是孢子囊 支原体扫描电镜图片支原体（mycoplasma）以前

8、被认为是最小的能独立存活的原核生物，以前也被认为是地球上迄今为止被发现的最小的细胞生物。全世界90%的猪体内寄生着支原体。 立克次氏体（rickettsiae），一种微小的寄生的细菌。上图是动物的淋巴细胞，红色的是寄生的立克次氏体。艾滋病病毒SARS病毒是一类新发现的冠状病毒 禽流感病毒噬菌体扫描电镜照片噬菌体模式图污染噬菌体的细菌电镜照片微生物的结构细胞结构细菌的结构： 基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核特殊结构：荚膜、芽孢等细菌的结构：细胞壁：位于细胞表面，是一层较为坚韧、略具弹性的结构。其功能是可以保护细胞免受机械或渗透压的破坏，维持细胞的外形。细胞壁是多孔性的，具有一定的屏障作用

9、，水和某些化学物质可以通过，但对大分子物质有阻拦作用。细胞膜：是外侧紧贴于细胞壁而内侧包围细胞质的一层柔软而富有弹性的半透性薄膜。它是一个重要的代谢活动中心，具有多种新陈代谢所需的酶。细胞质：无色透明，呈粘液状。其内含有某些结构和内含物。细菌的结构：细胞核：细菌的核位于细胞质内，没有核膜、核仁，没有固定形态，结构也很简单，因而称之为原核。荚膜：有些细菌在一定营养条件下，可向细胞壁表面分泌一层松散透明、粘度极大、粘液状或胶质状的物质称为荚膜。芽孢：一部分细菌在营养缺乏时，经过一系列形态学改变，经68小时形成的具有六层膜的坚实致密的结构。对于热力、干燥、辐射、化学消毒等理化因素有强大的抵抗力。真菌

10、的结构单细胞真菌的形态多种多样，大小比细菌大得多，为葡萄球菌的数倍至几十倍，小的肉眼看不见，大的如木耳、蘑菇、灵芝。按细胞的形态结构分为单细胞和多细胞两大类。单细胞真菌：呈圆形或椭圆形，如酵母型和类酵母型真菌。酵母型真菌：不产生菌丝，由细胞以芽生方式繁殖。类酵母型真菌：芽生方式繁殖，延长的芽体伸入培养基内，称假菌丝。真菌的结构多细胞菌丝： 孢子生出嫩芽，称为芽管，芽管逐渐延长呈丝状，称为菌丝。有的菌丝形成横隔，称为隔膜，把菌丝分成一连串的细胞，隔膜有孔可使细胞质从一个细胞流入另一个细胞。菌丝可生长出许多分枝，交织成团，称为菌丝体。菌丝有螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状、梳子状等，可作为识别的依据

11、。伸入培养基的叫营养菌丝，露出培养基表面的叫气生菌丝，部分气生菌丝产生不同形状、大小和颜色的孢子，叫生殖菌丝。孢子：孢子是真菌的生殖结构，是由生殖菌丝产生的。分为叶状孢子、分生孢子、孢子囊孢子病毒 病毒与人类疾病的关系密切，人类的传染病约有75%是由病毒引起的。 病毒是一类体积十分微小，结构简单，含一种类型的核酸（DNA或RNA），必须在生活的细胞内才能生长繁殖的非细胞型微生物。介于生命和非生命之间的一种物质，由一个或多个核酸分子组成的基因组，有一层蛋白或脂蛋白的保护性外壳，因此病毒看被看做是“一包基因”。对抗生素不敏感，对干扰素敏感。 最大的病毒如牛痘苗病毒为30nm230nm100nm，能

12、在光学显微镜下见到，而小型病毒如脊髓灰质炎病毒，其大小仅为27nm，绝大多数病毒的大小在1050nm左右，只有在电镜下放大几十万倍才能看到。可以通过除菌滤器。病毒的结构 基本结构有核心和衣壳，二者构成核衣壳，有些病毒的核衣壳外有包膜和包膜子粒或刺突。 核心：位于病毒体的中心，为核酸，构成病毒基因组，为病毒的复制、遗传和变异提供遗传信息。 衣壳：包围在核酸外面的蛋白质壳，具有抗原性，保护病毒的核酸免受环境中核酸酶或其它因素的影响破坏，并能介导病毒进入宿主细胞。病毒结构示意图微生物的特点五大特点微生物分布 土壤中的分布 空气中的分布水中的分布 人体中的分布微生物在土壤中的分布 微生物聚集最多的地方

13、是土壤，土壤是各种微生物生长繁殖的大本营，任意取一把土或一粒土，就是一个微生物世界，不论数量或种类均很多。在肥沃的土壤中，每克土含有20亿个微生物，即使是贫瘠的土壤，每克土中也含有35亿个微生物。微生物在空气中的分布 空气里悬浮着无数细小的尘埃和水滴，它们是微生物在空气中的藏身之地。哪里的尘埃多，哪里的微生物就多。一般来说，陆地上空比海洋上空的微生物多，城市上空比农村上空多，杂乱肮脏地方的空气里比整洁卫生地方的空气里的多，人烟稠密、家畜家禽聚居地方的空气里的微生物最多。早在60年前我国有一位年轻人，就曾经乘飞机在160米到5300米的高空采集过微生物，发现都有微生物在活动，不过在160米高空的

14、微生物比5300米处要多100倍。空气中的微生物的数量随人的密度、活动程度(尘土被搅动的情况) 以及温度、湿度、风力等因素而异。空气中因缺乏营养物，微生物在其中不能繁殖与久留，只有抵抗力较强的微生物如芽胞杆菌、八叠球菌、葡萄球菌以及真菌(如青霉菌、曲霉菌、毛霉菌等)存活时间较长。空气携带细菌主要有2种方式；一是细菌可附着在尘土上(细微颗粒)，长时间浮游在空气中；其二，细菌在人咳嗽、喷嚏、唱歌、讲话、呼吸时通过口腔、鼻腔部喷出的飞沫(大多数飞沫为48m)可长时间浮游在空气中，飞沫的水分蒸发后便成飞沫核，直径缩至l2m，附着的微生物随气流悬浮不定。空气中微生物是药品生产中引起污染的重要来源之一。因

15、此必须做好空气的清洁卫生和消毒管理工作。微生物在水中的分布 各种水域中也有无数的微生物。居民区附近的河水和浅井水容易受到各种污染，水中的微生物就比较多。大湖和海水中，微生物较少。正常人体常见的微生物 在人的皮肤和与外界相通的粘膜腔道中，都有微生物的生长繁殖。这些存在于人体各部位的微生物，它们与宿主长期保持着共生与互生的关系，通常称它们为正常菌群或正常人体常居菌。在正常情况下，正常菌群的存在对人体是有益的。如大肠中大肠杆菌，可以合成核黄素、B12，、维生素K及多种氨基酸等人体不可缺少的营养物质，还能干扰和抵抗其它病原微生物对宿主的侵入。但某些正常菌群，在人体抗力下降，或当一 些微生物异位侵入某些

16、组织时，都可以引起人体疾病，这些细菌通常称条件致病菌。现将人体各部位存在的主要菌群分述如下。 微生物在人体中的分布部 位 主 要 微 生 物 的 种 类口腔 葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、梭形杆菌、螺旋体、真菌 胃 一般无菌肠大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、粪链球菌、产气荚膜杆菌、破伤风杆菌、真菌、腺病毒等鼻咽腔 葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、卡答儿球菌、绿浓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、副大肠杆菌、变形杆菌、腺病毒尿道 （男）前尿道：白色葡萄球菌、类白喉杆菌 （女）无菌或少数革兰阳性球菌皮 肤 葡萄球菌 类白喉杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、真菌阴 道 乳酸杆菌、白色念珠菌、类白喉杆菌

17、、大肠杆菌外耳道 葡萄球菌、类白喉杆菌、绿浓杆菌、非病原性抗酸菌眼结膜 白色葡萄球菌、类白喉杆菌、结膜干燥杆菌等正常人体微生物的分布部位 从以上介绍可以知道:人和动植物的表皮到人和动物的内脏，都经常生活着大量的微生物。因此生产人员的健康对于药品质量有着很重要的影响. 这也是为什么GMP中要明确规定:药品生产人员应建立健康档案,直接接触药品的生产人员应至少每年进行一次体检.同时还规定:传染病、皮肤病患者和体表有伤口者不得从事直接接触药品的生产。 微生物与人类的关系微生物是生物中一群重要的分解代谢类群，没有微生物的活动地球上的生命是不可能存在的。与我们人类的生活也是息息相关的.有利的方面:绝大部分

18、微生物对人和动物是有益的,微生物也已经在很早之前应用到农业、医药、酿造、化工、制革、石油等行业,发挥了越来越重要的作用. 例如:和我们生活关系密切的酸奶、酒类、抗生素类、疫苗类、食用菌类等 微生物既然和我们的生活息息相关，如何充分利用其有利方面，规避其对人类有害的一方面呢？ 首先我们得了解微生物。营养物质PH 一般细菌的生长最适酸碱度(pH)为7.27.6，少数菌需在较酸或较碱的环境中生长繁殖。温度 温度是细菌生长的重要因素之一，各种细菌的适宜温度范围相差很大，据此而有嗜热(52)、嗜温及嗜冷菌之分。大多为嗜温菌(1540)， 一般细菌的培养采用37。气体 专性需氧菌：具有完善的呼吸酶系统，仅

19、能在有氧环境下生长。 微需氧菌：在低氧压（5%-6%）生长最好。 兼性厌氧菌：兼有有氧呼吸和无氧发酵两种功能，但以有氧时 生长较好。大多数病原菌属于此。 专性厌氧菌：缺乏完善的呼吸酶系统（氧化还原电势高的呼吸 酶、分解有毒氧基团的酶），只能在无氧 环境中进行发酵。渗透压 细菌的生长的环境因素微生物的营养水碳源氮源无机盐生长因子水：水是各种生物细胞必需的。水是良好的溶剂，微生物的新陈代谢过程中的一切生化反应都离不开水的作用。碳源：碳源是合成菌体成分的原料，也是微生物获取能量的主要来源。整体上看来，微生物可以利用的碳源范围极广，从大类上说，可以分为有机碳源和无机碳源两大类，凡必须利用有机碳源的微生

20、物就是异养微生物，凡能利用无机碳源的微生物就是自养微生物。糖类是最广泛利用的碳源。氮源氮源主要是供给合成菌体结构的原料，很少作为能源利用。与碳源相似，微生物作为一个整体来说，能利用的碳源种类十分广泛。某些微生物（如固氮菌）能利用空气中分子态的氮或利用无机氮化物如铵盐、硝酸盐合成有机氮化物。多数致病菌则必须供给蛋白胨、氨基酸等有机氮化物才能生长。无机盐类：无机盐主要可为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素。微生物需要的无机盐类很多，主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等，其主要功能为构成菌体成分；调节渗透压；作为某些酶的成分，并能激活酶的活性等。生长因子：有些微生物虽然供给它适合的碳源氮源和

21、无机盐类，仍不能生长，还要供给一定量的所谓“生长因子”。其种类很多，主要是B族维生素的化合物等。生长因子可以从酵母浸出液、血液或血清中获得。 (.延迟期， .对数期， .稳定期， .衰亡期)细菌生长的典型曲线消毒与灭菌Disinfection杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物消毒：杀灭物体上所有微生物的方法。 灭菌：Sterilization不存在活菌的意思。 无菌：Asepsis防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。防腐：Antisepsis消毒与灭菌 消毒：采用物理或化学的方法，清除或杀灭外环境(传播媒介)中的病原微生物或其它有害微生物。外环境系指无生命的物体

22、及其表面，为叙述的方便，人体体表皮肤的消毒除菌也放入此例。对消毒意义的理解，有2点需要注意，其一是不必清除杀灭所有微生物，主要是针对病原微生物；其二消毒是相对的，不是绝对的，只要将微生物减少到无害化的程度。 消毒剂：用于杀灭微生物的化学药物。如乙醇、新洁尔灭等。灭菌：用物理和化学的方法杀灭一切活的微生物(包括病原微生物和非病原微生物，繁殖型或芽胞型微生物)，其概念是绝对的。然而，由于种种原因及遵照概率函数，一些微生物总是以有限的机会得以生存，因此灭菌的要求只是把微生物的存活概率减少到最低限度。据此，工业化生产的灭菌，允许将灭菌概率标准规定为10-6，即在100万个试验对象中，可有1个以下的有菌

23、生长，就可认为该批产品是无菌的。灭菌剂：能杀灭一切微生物的药物。如过氧乙酸、甲醛等。根据上述定义，消毒与灭菌是两个不同的概念，消毒处理不一定能达到灭菌的程度，而灭菌则一定能达到消毒之目的。灭菌是最彻底的消毒。无菌：是指物体或任一介质中没有活的微生物的存在，即无论用何种方法，检不出活的微生物。无菌操作：指在操作中，采用或控制一定条件，尽量避免产品污染微生物的一种操作方法程序。为此目的，所用的一切物品、环境，均应事先灭菌，操作也应在无菌操作室中进行。无菌观念：指在无菌操作时，避免污染任何微生物。 “无菌”从定义上来说是一个绝对的概念，但遗憾的是，在科学和技术高度发展的今天，药品的绝对无菌即做不到，

24、也无法加以证实。然而，无菌制剂的安全性要求人们设定无菌的相对标准。FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品“无菌”的相对标准，它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为10-6（即产品的无菌保证值为6），系同一标准的不同表示法。这一标准于1980起收录于USP 中，如今已为世界各国普遍接受和采用。药品生产过程中的消毒与灭菌，与一般微生物学上有所不同。微生物学上的消毒与灭菌，只要求杀灭和清除一切微生物，使其不成为传染源。而药品生产过程中的消毒与灭菌，因灭菌后直接用于人体，故除要灭菌外，尚需要考虑： 1、微生物的污染数量，如大量污染，即使灭菌，其尸体、毒素仍然对人造成危害。 2、所

25、选方法对其内在质量有无影响。3、所用方法灭菌后有无残留毒性，对于关键性的医疗用品，要求更应严格。如环氧乙烷用于PVC一次性输液器灭菌，效果虽好，但它可引起人类畸变和癌症，而PVC又是目前已知的塑料中吸附环氧乙烷最强的一种。据何复光等报道，在环氧乙烷浓度为600mgl，温度55，湿度60%，作用4 h，据气象色潜仪分析，PVC输液器的环氧乙烷残留量达1895ppm。放于室温自然消散120 h残留量还达28ppm。对此，国外对于消毒灭菌后残留量进行了严格的控制，如美国职业安全卫生局(OSHA)将原规定工人接触环氧乙烷的剂量从50ppm降到lppm，从而限制了环氧乙烷的使用。 消毒与灭菌的方法，按其

26、性质可分为物理法和化学法两类。物理消毒灭菌法 利用物理因素作用于微生物，将之杀灭或清除，称为物理消毒法。常用的物理法有：机械消毒法、热力消毒法、光消毒法、电消毒法、声消毒法及辐射消毒法。 此方法不是真正的杀灭微生物，而只是达到机械排除。如刷、冲洗、擦拭、吸附、过滤等。上班前进入洁净室的洗手，也属机械消毒法。由于反复冲洗、擦刷，使细菌机械地被排除。有人证明用8min流水冲洗可除菌80%，15min可除菌99.0%。过滤除菌是用物理阻留的方法除去微生物。如用砂滤法制备生活饮用水，厂房空气净化设施以及戴口罩等，都是利用过滤除菌的有效方法。目前，滤膜器孔径最小可达0.01m，能制取优质的注射用水可将空

27、气处理到100l中只有1颗0.3m尘粒的超净水平。一、机械消毒法 在所有消毒与灭菌的方法中，热力是一种应用最早，效果最可靠使用最广泛的方法。热杀灭微生物的机理是损伤微生物的细胞壁，细胞膜、破坏微生物的蛋白质(凝固或变性)从而导致其死亡。热力消毒与灭菌的方法分为两类：干热和湿热。二、热力消毒法A)干热消毒与灭菌1灼烧：灼烧是直接用火焰灭菌。如微生物实验室接种针、接种环、涂菌捧等不怕热的金属器材的灭菌。在没有其它办法灭菌的情况下，对于器械亦可用灼烧法灭菌。灼烧法来菌温度很高，效果可靠，但对器械有破坏性。2干烤：干烤灭菌是在烤箱中进行。适用于高温下不损坏、不变质物品的灭菌。例如玻璃制品：平板、试管、

28、吸管，注射器等均可用此法灭菌，一般在180下，干烤l2h。(使用烤箱灭菌时，应注意下列事项： (1)玻璃器皿应完全洗净，以免吸附物高温时炭化，洗净后完全干燥，再放入烤箱内。 (2)物品包装不宜过大，放置物品不宜超过烤箱高度的三分之二。物品间应留有空隙，以利于热空气对流。 (3)灭菌过程中不得中途打开烤箱放入新物品，以免突然冷却致使物品爆裂。 (4)在高温下易损坏的物品，如纸、棉织品、塑料制品、橡胶制品不可放入干烤箱内灭菌。 (5)灭菌时间应从烤箱内温度达到所需温度时算起。(B)湿热消毒与灭菌1煮沸法：煮沸法消毒是使用最早的消毒方法之一。由于其方法简单、方便、经济、实用效果好，故今仍是一种常用的

29、消毒方法。煮沸消毒的能力较强，一般在水沸腾后再煮515min，即可达到消毒目的。l00几乎能立即杀灭细菌繁殖体、真菌、立克次氏体、螺旋体和病毒等。芽胞型菌则抗煮沸能力较强，一般要1h以上，甚至高达8 h之多。 2高压蒸汽灭菌：目前常用下排气式高压灭菌器，使用方法等不做介绍。 注意事项： （1）必须将灭菌器内冷空气抽尽或排尽，空气的排尽程度与温度的关系极为密切。 高压灭菌器内压力和冷空气排放与温度的关系 表 压排出不同程度冷空气时高压锅内温度（）磅/英寸2kg/cm2全排出排出2/3排出1/3未排出100.7011510910090151.05121115109100(2)合理计算时间。其时间的

30、计算，应从灭菌器内达到温度要求时算起，至完成灭菌为止。一般下排气式高压灭菌器为12115min或11530min。(3)包装与容器不宜过大，过紧，也不宜将物品放于铝饭盒内。 (4)合理布放物品。不宜过多，一般为85%，且物品间留有空隙。(5)注意安全操作，每次灭菌前应检查灭菌器是否处于良好的工作状态，尤其是安全阀是否良好，盖是否关紧。加热宜均匀，灭菌后减压不可过猛。压力表退回“O”处才可打开盖。6)为监测灭菌教果，可采用留点温度计或嗜热脂肪芽胞菌生物指示菌片。同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好原因1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固2、湿热的穿透力比干热大3、湿热的蒸汽有潜热杀菌原理与作用紫外线可

31、分为长波段、中波段和短波段3组。以短波段2500-265.0nm的杀菌力最强。一般多以2537nm作为紫外线杀菌波长的代表。 紫外线照射能量较低，不足以引起原子的电离，仅产生激发作用，使电子处于高能状态而不脱开。当微生物被照射，此作用可引起细胞内成分，特别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化，从而使之死亡。 各种微生物对紫外线的耐受力不同，真菌孢子对紫外线的耐受力最强，芽胞菌次之，细菌繁殖体最差。但也有例外，如橙黄八叠球菌的耐受力反比枯草杆菌芽胞高。三、紫外线消毒因紫外线是一种低能量的电磁辐射，故穿透力极差，空气中的湿度、尘粒对其均有影响；在液体中，亦随深度增加而降低。各种杂质(盐、有机物等)均可影

32、响紫外线作用，它不能透过固体物质。普通玻璃中有氧化铁，可阻挡紫外线。因此，它无法透过2mm厚的窗玻璃。但能透过石英，糊窗纸可透过2040；聚氯乙烯薄膜，开始时可透过30%，但6 h后，由于薄脱变质，透过率可以降至3以下。消毒应用 1空气消毒紫外线的空气消毒，主要是利用局部空气先行照射消毒，然后随着空气的对流而使全室空气得到消毒。为获得最大的反射章，充分发挥紫外线的作用，紫外线灯上需装反光性强的铝制反光罩。(1)固定式照射：将紫外灯固定于天花板上，略高于人的头顶，向下照射；或固定于墙壁上，侧向照射。每分神照射产生的效果相当于换气13次。每换气1次约可清除原菌数的632%。因紫外线对人体有害，此类

33、适于无人在的情况。若消毒必须在室内有人情况下进行，则可用向上照射法，即将灯固定于天花板或墙壁上，离地2.5m左右，灯管下按装金属反光罩，使光线反射到天花扳上。一般为防止损害人的健康，每立方米的功率不超过IW。在1015m2的房间按装30w紫外线灯管1支。照射时，每次40120min，间隔lh。用这样的方法，可减少空气中微生物5070%，甚至达90以上。(2)移动式照射：用4支30W紫外线灯管装于0.3m的铝制圆筒内，在一端装以28 m3min流量的风扇即制成了移动式紫外线空气消毒设备。这种装置依靠风扇，使空气流经紫外线通道而将之消毒。可用于生活用房及缓冲间等消毒灭菌。在体积较小的房间，lh照射

34、可相当于换气27次。 2对水的消毒 紫外线消毒清水，装置的设计应使灯管不浸于水中。常用的直流式消毒装置呈管道状，紫外线灯管固定于液面上l cm左右处。水由一端进人，一端流出，流过的水层不宜太厚，一般不超过2 cm。使用注意要点 l灯管表面应经常用酒精棉球轻轻擦拭，除去表面的灰尘与污垢，以减少对紫外线穿透的影响。 2紫外线内眼看不见，灯管放射出的蓝紫色光线并不代表紫外线强度。有条件的可用紫外线强度仪测定其强度，无条件者可逐月记录使用时间。紫外线灯的平均寿命(每3h开启1次)可达2500h以上。 3消毒时，室内应保持清洁、干燥。空气中不应有灰尘或水雾，如空气中含尘粒800900粒m3，则降低灭菌效

35、率2030%；湿度4565%，紫外线照射3h，空气中细菌减少8090，若相对湿度增到8090时，则降低灭菌效率3040%，一般相对湿度不宜超过4060%；。 4不透紫外线的表面，只有直接照射才能达到消毒目的，因此要按时翻动，以及室内不能放置过多不必要的物品。 5紫外线对人体有一定的危害，直接照射(1m远)12min，可使皮肤产生红斑，对眼睛直射30s可产生刺激症状，剂量再增大引起紫外线眼炎。因此，应避免直接照射或眼睛直视。 6 温度对紫外线有一定影响，一般1535，若室温一40，紫外线即失去作用。 紫外线的灭菌效能与投射角度也有关系，在等距离内，每相差30。，则照射强度下降很多。如90.直射强

36、度为48mWcm2；倾斜30.时强度减至2.7 mWcm2；若再倾斜30。，则强度减少到0.56mWcm2。 化学消毒灭菌法一、气体灭菌法 此法系指用化学思剂的气体或蒸汽对物品进行的灭菌。常用者为环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸、丙二醇、乳酸、戊二醛等。 二、表面消毒 大多数的化学消毒剂，仅能杀灭微生物的繁殖体，而不能杀灭芽胞，故一般用于表面消毒，即在控制的环境中减少细菌，维持无菌状态。选择的消毒剂必须是抗菌谱广的或有针对性的。 (一)理想的化学消毒剂应具备的性质 使用情况下的高效；有效浓度低；作用速度快；性质稳定；无腐蚀性，低毒；易溶于水；可在低温下使用；不易受外界理化因素影响；无色、无味、无臭；无

37、残留毒性；使用无危险性；价廉。二)常用的消毒剂1醇类：醇类消毒作用较快，性质稳定，无腐蚀性，无毒性，能去污，起清洁作用，价廉易得。 目前使用最为普遍的是乙醇。它属中效消毒剂，可杀死各种微生物，但不能杀灭细菌芽胞。杀菌机理是使菌体蛋白质变性。使用浓度75%。常用于皮肤及手的消毒。采取常用浓度，仅l0s就能杀灭绿脓杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、伤寒杆菌等。2. 表面活性剂：带阳电荷的季胺盐类化合物能被牢固地吸附于带有负电荷的细菌表面，破坏细菌质膜，使菌体成分漏出。这类化合物列细菌繁殖体有广谱杀灭作用，且作用快而强，毒性亦较小，属于低效消毒剂(可杀灭细菌繁殖体、真菌和亲脂病毒。但不能杀灭芽胞、结核杆菌和

38、亲水病毒)。类别作用机制常用种类用途酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸地面、器具表面、皮肤消毒醇类蛋白变性乙醇皮肤、体温计消毒氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸钾皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞皮肤、粘膜、小创伤消毒氧化剂氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮肤消毒表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭手术洗手、浸泡手术器械常用消毒剂的种类和用途影响消毒剂作用的因素消毒剂细菌 环境种类浓度作用时间菌龄种类有机物温度酸碱度选择适当的消毒剂低毒价廉低破坏易贮藏方便有效传播污染的五大媒介空气水表面人物料不同环境中微生物量环境土壤水空气人体皮肤地板微生物量104-101010

39、-10410-1051-10410-103单位：个/g传播污染的五大媒介空气 空气：空气并不是产生污染的介质，但它是污染的危险携带者。充满微生物的尘埃和水滴就是通过空气作为侵袭我们产品的媒介而成为重要的污染源的。当我们谈话、咳嗽和打喷嚏时，被污了的水滴正是不断地从我们的呼吸道中放入我们的工作场所。尘埃微粒正是通过空气流不间断地在我们整个药厂范围循环运行着。 空气中存在的尘埃微粒是含有微生物(细菌等)的。因此，空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。这就是为什么要尽量保持空气洁净是极为重要的。在药品生产中，减少空气中微生物数量的方法有多种，常用的有以下3种方法： 空气洁净技术采用的过滤方法 过滤是

40、最常用的方法。过滤介质种类很多，例如：纤维素、玻璃棉或人造纤维等。空气净化装置可用于整个房间如无菌操作室，也可只限于操作区域局部如超净工作台。 化学消毒方法 采用消毒剂作用于室内空气和物体表面。 紫外线照射方法 采用紫外线对室内空气进行照射。传播污染的五大媒介水 水：从理论上来讲，微生物在纯水中是不能生长的。但是，所有的各类水，不管怎样仔细地蒸溜或过滤，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。在生产过程中，水是应用最广泛的原料之一。这就是为什么我们药厂的卫生规程不仅必须仔细 地控制用于生产过程的水，而且要控制好如 何正确地用水来清洗我们的设

41、备。 常用的对水消毒的方法，与空气消毒的方法一样，也是化学消毒剂、过滤与紫外线照射3种。 化学消毒剂方法 对水的消毒以化学消毒剂方法较常用，效果也最好。常使用次氯酸钠或通氯气。在使用中，应注意到水系统中不能留有消毒不到的“死角”。 膜过滤法 适用于水系统的连续循环处理。 紫外线照射法 在水系统中应用紫外线照射消毒，适用于需要特殊处理的水（如光学透明度要求高），一般在末端之前。这种方法因处理过的水无臭无味，而优于化学消毒剂方法；因不产生微生物移居滤器的现象，而优于膜滤器。在水系统中，这3种方法综合应用，设计安装在适当的位置。传播污染的五大媒介表面 表面包括：天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或

42、桌子；由于空气中的湿度，所有表面都包上一层含水的薄膜。这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒，有很多时候，表面还覆盖一层油状物质，此层油膜易受到尘粒污染。表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。 一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。 制药企业生产车间的厂房，库房及实验室都必须清洁整齐。建筑物表面不透水，光滑平整、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒。设备、管道应易于拆卸、结构简单，便于清洁消毒。特别是药品生产过程中使用的容器，包括内包装容器，都应进行清洗和消毒。传播污染的五大媒介人 人是最常见的传染源。事实上，人们常说，人是

43、药厂中最不清洁的成份，最大的污染源。为什么呢?一个原因，人体是一个永不休止的污染媒介。当您每天来药厂上班时，您也许随身将几百万细菌带入工厂。 也许这些细菌对我们自身不是有害微生物，但对于我们的产品可能就是导致质量不合格的罪魁祸首。人体不同部位所带细菌数量部 位细菌数量手部前额头皮腋窝鼻腔分泌物唾液粪便1001000/ cm21000100000/ cm2约100万/ cm2约1000万/ g约1000万/ g约10亿/ g710亿/ g人员的发菌量洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/(min人)，躯体一般活动时的发菌量为1501000个(min人)，快步行走时的发菌量为

44、9002500个(min人)；穿平常衣服时发菌量为330062000个(min人)；有口罩发菌量：无口罩发菌量为(1:7)(1:14)；咳嗽一次的发菌量为70700个，喷嚏一次的发菌量为400060000个。人员污染的途径和方式人的头发和皮肤水滴衣着化妆品和珠宝手饰生产过程中人们所引起的混杂和误差物料系指原料、辅料和包装材料等。原辅料可能将大量的微生物带入到药物制剂中。因此，选用符合标准的原辅料，将有利于控制药品和环境的污染水平。来源于动物的原料药或辅料（如明胶），有可能被动物病原体所污染；来源于植物的原料药或辅料（如淀粉）则可能被多种细菌、霉菌、酵母菌所污染。传播污染的五大媒介物料 原辅料的

45、处理方法因药物类型而异，许多原辅料需进行消毒或灭菌处理。植物药材可用晾晒、烘烤方法使之充分干燥，以减少微生物繁殖。原辅料在储藏过程中必须注意环境条件。包装材料，特别是内包装材料，一方面包装药品，另一方面防止外界微生物进入药中。若处理不当，在药品储藏和运输过程中，极易引起污染，造成严重后果。总之，包装材料应考虑不同需要加以清洁或消毒处理进行合理封装。原则是尽量减少微生物数量，预防发生污染。 药品的生产、储存、使用的全过程，都有因微生物污染而导致药物变质的因素。而药物变质，一般需要很高的微生物污染程度。也就是说，微生物面广、量大的繁殖才出现显著的易被觉察的损坏现象。微生物污染导致药物变质的因素1. 了解污染源对药品生产全过程可能造成污染的来源，进行深入的了解研究，从而设计一个完好的生产工艺，制定规章制度和标准操作规程，从各个环节采取消毒和卫生措施来防止微生物污染，使产品达到所要求的卫生学质量，包括稳定性及各种微生物参数。2. 进行微生物监测在药品生产过程中，应按GMP要求不断进行各项微生物卫生学监测。例如：对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测；对无菌设备清洁