β-溶血性链球菌的测定方法验证报告

1、方 法 验 证 报 告公共场所集卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统-溶血性链球菌GB/T 18204.5-2013(8)1.目的验证培养法测定集中空调通风系统送风中的-溶血性链球菌指标，来判断在本实验室此方法的适用性。2.原理集中空调通风系统送风中采集的样品，经3537、24 h48 h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落为-溶血性链球菌。2.1仪器和设备2.1.1六级筛孔撞击式微生物采样器。2.1.2高压蒸汽灭菌器。2.1.3恒温培养箱。2.1.4平皿：90 mm。2.2培养基2.2.1血琼脂平板成分：蛋白胨 10g氯化钠 5g琼脂 20g脱纤维羊血 5mL10 mL 2.2.2制法：将蛋

2、白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中，校正pH为7.47.6，加入琼脂，121 20min灭菌。待冷却至50C左右，以无菌操作加人脱纤维羊血，摇匀倾皿。2.3采样2.3.1采样点：每套空调系统选择3 个5个送风口进行检测，每个风口设置1个测点，一般设在送风口下方15 cm20 cm、水平方向向外50 cm 100 cm处。2.3.2采样环境条件：采样时集中空调通风系统应在正常运转条件下，并关闭门窗15 min 30 min以上.尽量减少人员活动幅度与频率，记录室内人员数量、温湿度与天气状况等。2.3.3采样方法：以无菌操作，使用撞击式微生物采样器以28.3 L/min流量采集5 min 15

3、min。2.3检验步骤2.3.1培养方法：采样后的血琼脂平板在3537下培养24 h48 h。2.3.2结果观察：培养后，在血琼脂平板上形成呈灰白色、表而突起、直径0.5 mm0.7 mm的细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；镜检为革兰氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列，受培养与操作条件影响链的长度在4个8个细胞至几十个细胞之间；菌落周围有明显的2 mm4 mm界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的菌落为溶血性链球菌。2.4结果报告2.4.1送风口溶血性链球菌测定结果：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3 (每立方米空气中菌落形成单位)。2.4.2空

4、调系统送风中溶血性链球菌测定结果:一个空调系统送风中溶血性链球菌的测定结果按该系统全部检测的送风口-溶血性链球菌测定值中的最大值给出。3.方法验证结果3.1空白实验对灭菌蒸馏水7次做-溶血性链球菌的测定，所得结果如下表：表1 空白试验结果序号样品分析编号平皿菌落数结果（CFU/m3）1灭菌蒸馏水-10未检出2灭菌蒸馏水-20未检出3灭菌蒸馏水-30未检出4灭菌蒸馏水-40未检出5灭菌蒸馏水-50未检出6灭菌蒸馏水-60未检出7灭菌蒸馏水-70未检出3.2样品测试对1个样分别做7次-溶血性链球菌的测定，所得结果如下表：表2 样品测试结果序号样品分析编号结果（CFU/ m3）平均结果（CFU/ m3）1201102W010101-1010101-6 NDND2201102W010201-1010201-6 ND3201102W010301-1010301-6 ND4201102W010401-1010401-6 ND5201102W010501-1010501-6 ND6201102W010601-1010601-6 ND7201102W010701-1010701-6 ND根据以上测试结果得知，空白测得结果均未检出，样品测的结果均值为NDCFU/ m3，因此本实验室的环境和仪器、试剂均符合标准的要求。4.结论经验证，本实验室已具备开展该方法测试所