DB13-T1384-2-2011饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定

1、ICS 65.120B 46DB13河北省地方标准DB13/T 1384.22011饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定Determination of strain/tetracycline/ aureomycin in feed2011 - 05 - 10 发布2011 - 05 - 20 实施河北省质量技术监督局发 布DB13/T 1384.22011I前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北医科大学、北京出入境检验检疫技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主

2、要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、沈磊、米振杰、贾茜、李志平、马春玲、张敬轩、高振同、武英利。 PAGE 4饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定范围本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定。本标准的方法检出限：50 g/kg。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 66821992，neq IS0 3696：19

3、87）原理试样提取液经离心后，上清液用 Oasis HLB 固相萃取柱和阴离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。甲醇：色谱纯。乙腈：色谱纯。盐酸。0.4 mol/L 盐酸溶液：准确量取 32.8 mL 盐酸于 1 000 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀。草酸。0.01 mol/L 草酸甲醇溶液：准确称取草酸 1.26 g，用甲醇溶解并定容于 1 000 mL 容量瓶中。甲酸。甲酸溶液：准确量取 4 mL 甲酸于 1 000 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀即可。土霉素、四环素、金霉素标准物质：

4、纯度95。土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液：0.1 mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、标准物质，分别用甲醇配成 0.1 mg/mL 的标准储备液。储备液贮存在-18冰柜中。土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液：根据需要吸取适量土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液，基质混合标准工作溶液在 4保存，可使用三天。Oasis HLB 固相萃取柱或相当者：500 mg，6 mL。使用前分别用 5 mL 甲醇和 10 mL 水预处理，保持柱体湿润。仪器液相色谱-串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源。分析天平：感量 0.l mg 和l

5、 mg 各一台。旋涡混匀器。固相萃取仪。高速离心机。具塞锥形瓶：50 mL。离心管：50 mL，5 mL。氮吹仪。旋转蒸发器。试样的制备提取准确称取3.0 g样品（准确至0.01 g），置于50 mL具塞锥形瓶中，加入甲醇10 mL，旋涡混匀1 min，加入盐酸溶液（4.4）30 mL，旋涡混匀1 min，超声20 min，移至50 mL离心管中，5 000 r /min离心10 min，取上清液，待净化。净化取10 mL上清液与40 mL水稀释混匀，再移入下接Oasis HLB柱的贮液器中。溶液以小于1.0 mL /min 的流速过柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，减压抽干20 mi

6、n。用草酸甲醇溶液（4.6）5 mL洗脱，收集洗脱液于40减压旋转蒸发至干,用1.0 mL 流动相溶解残渣，12 000 r /min离心10 min，经0.45 m有机滤膜过滤后，待测。测定步骤测定液相色谱条件色谱柱： Inertsil C8，3.5 m，150 mm2.1 mm（i.d）或相当者； 流动相：乙腈甲醇0.4甲酸溶液（18478）；流速：0.2 mL/mim； 柱温：25；进样量：20 L。质谱条件离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测；电喷雾电压、碰撞电压等条件优化至最佳值； 定性离子对、定量离子对见表 1。表1三种四环素族抗生素定性离子对、定量

7、离子对土霉素四环素金霉素461/426445/410479/444定性离子对/（m/z）461/443445/154479/154461/381445/428479/462定量离子对/ m/z）461/426445/410479/444液相色谱-串联质谱测定用土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液溶度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。土霉素、四环素、金霉素标准总离子流图见附录 A。平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。结果计算结果按式（1）计算：X c V 1000 (1)m 1000式中：X试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； V样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； M样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。注