考试技术简答流式细胞免疫学的质量控制

1、简答：流式细胞免疫学技术的质量控制1.单细胞悬液的质控适当的方式；处理红细胞；实体组织来源标本用机械法；温度 25377.07.22.免疫荧光染色的质控温度；浓度；固定剂3.分选后细胞的培养培养基及的选择；温度；离心速度；无菌操作问答：举例做流式时设置的细胞各管的名称及其所加的抗体（三、对照管的设置： 高老师）。同型对照（对照）：去除抗体非特异性吸附的影响。单色补偿（单阳管）：去除相邻荧光光谱的例：部分。CD34-PE CD34+ CD38-1/ PE- Isotype;CD38-FITC细胞FITC-Isotype: 设置对照门, 去除抗体非特异性吸附的影响2/ CD34-PE ; FITC

2、-Isotype3/CD38-FITC ; PE- Isotype: 单阳管对照, 设置补偿: 单阳管对照, 设置补偿问答题：参与肿瘤细胞药物抗性 microRNA 的发现及其实验验证技术比较肿瘤耐药细胞及其敏感细胞株 MicroRNA 的表达差异，从而筛选出参与利用肿瘤细胞药物抗性的 MicroRNA。可以利用Northern blot 及 RT-PCR 比较耐药细胞株及敏感细胞株的MicroRNA 的表达量来验证。3.干系胞的分选方法并举例：（1） MACS 细胞分选技术2流式细胞仪分选技术：该方法的特点是精度高（99%以上）；多标志分选，正选负选可以同时进行；无菌分选能满足后续试验要求荧

3、光标记小鼠的应用及工艺（大概是这个意思）荧光发光是通过激发光激发荧光基团到达高能量状态，而后产生发射光。常用的有红色荧 光 蛋 白 （ RFP ） 和 绿 色 荧 光 蛋 白 （ GFP ）。 RFP包 括DsRed,DsRed-Express,mRFPmars,DsRed-Timer 等；GFP 包括 S65T-GFP,EGFP,BFP,RSGFP4等。荧光成像具有操作简单、所得结果直观、灵敏度高等特点，在动物体内成像中到广泛应用，如示踪表达、标记转动物、研究肿瘤生物学行为、追踪干细胞的分化与定位等。荧光蛋白转小鼠作为一种工具小鼠，广泛的应用于生物学的各个领域，为干细胞的分化与定位、肿瘤、免

4、疫与肿瘤细胞相互作用和形成等研究提供有力的工具动物和分子影像学技术。制作工艺：1、荧光蛋白表达载体的构建及转：萤光蛋白的可以被为载体并转到生小鼠，物体中或转染到细胞中，例如以携带绿色荧光蛋白（GFP）的慢将慢表达载体 FUGW 与 ViraerTMLentiviral PackagingMix 按 12 比例混合,用LipofectamineTM2000 转染 293FT 细胞,包装出的经浓缩后以 293T 细胞测定滴度。采用卵卵周隙显微注射的方式转小鼠。2、PCR 鉴定荧光蛋白转组 DNA 进行小鼠：小鼠生后剪脚趾提取表型检测。3、荧光影像系统分析荧光蛋白转小鼠4、荧光蛋白转敲除（名解）小鼠

5、全身重要组织荧光蛋白表达分析通过同源重组将外源定点整合入靶细胞组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造上某一基本步骤:的目的的一种技术。ES 细胞的获得；将载体的构建；打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入同源的胚胎干细胞(EScell)中，使外源 DNA 与胚胎干细胞组中相应部分发生同源重组，将打靶载体中的 DNA 序列整合到内源组中从而得以表达；用选择性培养基筛选已的细胞；通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的变化前后对小鼠的生物学形状的改变，达到研究目的敲除的应用领域主要有：的目的。1、2、3、4、建立人类疾病的转动物模型，为医学研究提供材料；改造动物型，鉴定新和/或其新功能

6、，研究发育生物学；治疗遗传病；改造生物、培育新的生物品种。现代技术名解：CT 值Ct 值的定义是 PCR 扩增过程中，扩增产物(荧光信号）到达阈值时所经过的扩增循环次数。简答：RT-PCR 中，什么情况下需要采用绝对定量方法，什么情况下相对定量即可？如果需要知道拷贝数，就必须用绝对定量的方法，否则只需要给出表达相对量就足够了。相对定量可能比绝对定量要更容易一些，因为它不需要作标准曲线。3.问答：判断扩增曲线是否良好有哪些指标？曲线拐点清楚，特别是低浓度样本指数期明显，扩增曲线整体平行性好。曲线指数期斜率与扩增效率成正比，斜率越大扩增效率越高。标准的基线平直或略微下降，无明显的上扬趋势。管的扩增曲线平行性好，表明各反应管的扩增效率相近。2. 简答题：简述实验中如何去除 RNase（1）（2）（3）操作者在整个实验过程中必须戴手套和，并经常更换玻璃器皿冲洗干净后，需要 180250干烤 4 小时以上尽可能使用制品（Ep 管、吸头等），用 0.1%DPEC 溶液浸泡过夜，80烤干后高压灭菌电泳槽冲洗干净后，于 30%H2O2 中浸泡 30 分钟以上，然后用 0.1%DPEC溶液或高压灭菌水彻底冲洗除 Tris 类试剂外，所有溶液用 0.1%DPEC 处理 12