原料药清洁验证指南

1、原料药工厂中清洁验证指南May 2014Table of Contents1.0 FOREWORD前言2.0 OBJECTIVE目的3.0 SCOPE范围4.0 ACCEPTANCE CRITERIA可接受标准4.1 Introduction介绍4.2 Methods of Calculating Acceptance Criteria可接受标准的计算方法4.2.1. Acceptance criteria using health-based data使用基于健康数据的可接受标准4.2.2 Acceptance criteria based on Therapeutic Daily Dose

2、基于日治疗剂量的可接受标准4.2.3. Acceptance criteria based on LD50基于半数致死量的可接受标准4.2.4 General Limit as acceptance criteria作为可接受标准的通用限度4.2.5 Swab Limits擦拭限度4.2.6 Rinse Limits淋洗限度4.2.7 Rationale for the use of different limits in pharmaceutical and chemical production在药品和化学生产中使用不同限度的合理性5.0 LEVELS OF CLEANING清洁级别5.1

3、 Introduction介绍5.2 Cleaning Levels清洁级别5.3 Cleaning Verification/Validation清洁验收/验证6.0 CONTROL OF CLEANING PROCESS清洁过程的控制7.0 BRACKETING AND WORST CASE RATING分类法和最差情况分级法7.1 Introduction介绍7.2 Bracketing Procedure分类法程序7.3 Cleaning Procedures清洁程序7.4 Worst Case Rating最差情况分级8.0 DETERMINATION OF THE AMOUNT O

4、F RESIDUE残留量检测8.1 Introduction介绍8.2 Validation Requirements验证要求8.3 Sampling Methods取样方法8.4 Analytical Methods分析方法9.0 CLEANING VALIDATION PROTOCOL清洁验证方案9.1 Background背景9.2 Purpose目的9.3 Scope范围9.4 Responsibility职责9.5 Sampling Procedure取样程序9.6 Testing procedure分析方法9.7 Acceptance criteria可接受标准9.8 Deviat

5、ions偏差9.9 Revalidation再验证10.0 VALIDATION QUESTIONS验证问题11.0 REFERENCES参考文献12.0 GLOSSARY词汇13.0 COPYRIGHT AND DISCLAIMER版本及声明1.0 FOREWORD前言本指南文件的原版本现已由APIC清洁验证工作组代表CEFIC的APIC委员会进行了更新。The Task Force members are:-以下是工作组的成员Annick Bonneure, APIC, BelgiumTom Buggy, DSM Sinochem Pharmaceuticals, The Netherla

6、ndsPaul Clingan, MacFarlan Smith, UKAnke Grootaert, Janssen Pharmaceutica, BelgiumPeter Mungenast, Merck KGaA, Germany.Luisa Paulo, Hovione FarmaCiencia SA, PortugalFilip Quintiens, Genzyme, BelgiumClaude Vandenbossche, Ajinomoto Omnichem, BelgiumJos van der Ven, Aspen Oss B.V., The NetherlandsStefa

7、n Wienken, BASF, Germany.With support and review from:-以下为提供支持和进行审核的人员Pieter van der Hoeven, APIC, BelgiumAnthony Storey, Pfizer, U.K.Rainer Fendt, BASF, Germany.原料药生产工厂的清洁验证一直是法规人员、公司和客户等关注的问题。原料药生产企业应将清洁验证与有效的质量体系相结合，由质量风险管理来支持，了解与清洁验证相关的患者风险，评估其影响，并在必要时降低风险。重要的是，不能将对制剂生产企业的要求直接用于原料药生产商，而不考虑在此阶段所用

8、生产工艺的差异。例如，与制剂生产相比，化学生产可以接受较高的残留限度，因为技术原因，化学生产所带入后续产品的残留风险会低很多。本文件反映了APIC成员公司之间关于如何满足清洁验证的要求及作为日常操作来实施的讨论结果。另外，APIC将本指南与“ISPE基于风险的药品生产指南”保持一致，遵守“ICH Q9质量风险管理”中的“质量风险管理流程”。目前推荐公司使用“可接受日暴露水平”标准来决定是否专用设施需要界定原料药“最大可接受残留MACO”，特别是针对多用途设备。放入了一个新章节，对“清洁工艺的控制”中要考虑的因素进行了定义，以管理与潜在化学和微生物污染有关的风险。也推荐企业将“PDA第29号技术

9、报告-清洁验证中应考虑的问题”作为有用的指南文件进行参考。以下问题在PDA文件中进行了讨论：清洁工艺（CIP/COP）：设计和确认残留类型、设定可接受标准、取样和分析方法维护验证状态：关键参数测量、工艺警示、变更控制、趋势&监控、培训和周期性评审文件记录2.0 Objective目的本文件的目的是帮助公司制订清洁验证程序，不能作为是一个技术标准，只应该作为内部讨论的出发点。本文包括了成员公司如何处理其特殊领域的例子，以及在实施清洁验证时提出的问题点。3.0 Scope范围本指南文件包括6个方面l可接受标准l清洁水平l清洁工艺的控制l分类法和最差情况分级l残留量的检测l清洁验证方案最后是一些常见

10、问题及回答，对一些与清洁验证有关的特殊情况给予指导。4.0 Acceptance Criteria可接受标准4.1. Introduction概述公司在验证时要证明各设备日常所用的清洁程序能将带入下一产品的潜在残留限制在一个可以接受的水平。所建立的限度必须进行科学合理的计算。本部分提供实用的指南，指导如何计算这些可接受标准。公司对各案进行各案评估是非常重要的。有时还需要考虑产品从哪步开始混入设备中。如果可以获得可接受日暴露（ADE）值，最好依据其计算可接受标准。可接受日暴露限度定义的是患者终身每天暴露于该浓度，但对健康的不良影响仍处于可接受风险水平。原料药和中间体的ADE一般由企业的卫生学家和

11、毒理学家来制订，他们会审核各种可以获得的毒性和临床数据来设定限度。计算的合理性要进行记录。在很多情况下，会由行业卫生学家和毒理学家对原料药、中间体和工业级化学品的职业暴露限度（OEL）值进行界定，这时应使用OEL数据来制订限制措施，例如，操作人员在操作化学物质时需要受到充分保护。OEL数据也可以用于计算设备清洁的ADE值。在特定情况下，如果药性或毒性数据有限，例如，化学物质、原料、中间体或处于早期临床试验的原料药，其清洁限度可以基于临床剂量、半数致死量或一般清洁限度来计算。在这种情形下，需要有毒理学家对其结构的致癌性、基因毒性和效价影响进行评估。设备清洁的可接受标准应依据干燥状态下目视清洁及分

12、析限度。在制剂生产中，设备表面残留会100%被带入下一产品，而在原料药生产中，由于技术和化学生产原因，带入风险要低很多。因此，以下限度计算举例可以采用不同安全因子后用于适当的情形。应有一名具备设备和化学工艺知识，知晓所涉及化学品特性，如溶解度的化学家对特定情形下应使用的安全系统进行评估。4.2. Methods of Calculating Acceptance Criteria计算可接受标准的方法4.2.1 Acceptance criteria using health-based data采用健康基础数据的可接受标准在可以获得可接受日暴露水平（ADE）值时，最大允许残留（MACO）应基于

13、ADE计算。MACO计算的原则是基于ADE值，计算你允许从你的上一个产品带入下一个产品中的残留量。Procedure程序根据以下公式计算ADE值，将结果用于MACO值的计算：MACO =NOAEL BWUFc MF PK根据以下公式从ADE值计算MACO值：MACO =ADE previous MBSnextTDDnextMACO =ADE上一产品 MBS下一产品TDD下一产品MACOMaximum Allowable Carryover: acceptable transferred amount from the previous product into your next produc

14、t (mg)允许最大残留：从上一产品带入下一产品的最大可接受量ADEAcceptable Daily Exposure (mg/day)可接受日暴露水平NOAELNo Observed Adverse Effect Level (mg/kg/day)未观察到副反应的水平BWIs the weight of an average adult (e.g. 70 kg)平均成人体重UFcComposite Uncertainty Factor: combination of factors which reflects the inter- individual variability, inter

15、species differences, sub-chronic-to-chronic extrapolation, LOEL-to-NOEL extrapolation, database completeness.组分不确定因子：反映单个变量之间、不同品种差异、亚急性折算为急性外推、LOEL折算为NOEL外推、数据完整性等补偿因素的综合系数MFModifying Factor: a factor to address uncertainties not covered by the other factors修正因子：用于表达未被其它因子覆盖的不确定因素PKPharmacokinetic

16、Adjustments药动学调整TDDnextStandard Therapeutic Daily Dose for the next product (mg/day)下一产品的标准治疗日服用剂量MBSnextMinimum batch size for the next product(s) (where MACO can end up) (mg)下一产品的最小批量（MACO全部带入其中）EMA/CHMP/CVMP/SWP/19430/2012草案中引用了允许日暴露（PDE）值。PDE采用了无可见影响水平（NOEL）代替无可见不良反应水平（NOAEL）用于ADE的计算。PDE值也可以用于代替

17、ADE值来计算MACO值。可以选择最差情况方案来替代对每个可能的产品更换情况下的残留计算。这时，可以选择活性最强的原料药（ADE最低）作为上一产品，选择批量TDD比值（MBS/TDD比值）最小的原料药作为后续产品。If OEL data is available, the ADE can be derived from the OEL.如果可以获得OEL值，则可以从OEL值计算ADE值。4.2.2. Acceptance criteria based on Therapeutic Daily Dose基于日治疗剂量的可接受标准如果可以获得有限毒性数据和日治疗剂量（TDD）值，可以采用本计算方式

18、。它可以用在原料药生产工艺A更换到原料药生产工艺B。Procedure程序根据以下公式建立允许最大残留（MACO）值：MACO =TDD previous MBSnextSF TDDnextMACO =TDD上一产品 MBS下一产品SF TDD下一产品MACOMaximum Allowance Carryover: acceptable transferred amount from the previous product into your next product (mg)允许最大残留：从上一产品中可以接受转入下一产品的数量(mg)TDDpreviousStandard Therapeu

19、tic Daily Dose of the investigated product (in the same dosage from as TDDnext) (mg/day)所讨论的产品的日标准治疗剂量（以下一产品TDD计的同样剂量）(mg/day)TDDnextStandard Therapeutic Daily Dose for the next product (mg/day)下一产品的日标准治疗剂量(mg/day)MBSnextMinimum batch size for the next product(s) (where MACO can end up (mg)下一产品的最小批量

20、（MACO会携入的产品）(mg)SFSafety factor (normally 1000 is used in calculations based on TDD).安全系数（一般基于TDD值采用1000来计算）4.2.3. Acceptance criteria based on LD50基于半致死量的可接受标准如果没办法获得其它数据（例如，ADE、OEL、TDD等值），只能获得半数致死量数据（例如化学物质、中间体、清洁剂），MACO可以基于半数致死量数据来计算。Procedure程序根据以下公式，计算NOEL值（无可见影响水平），用于建立MACO值（参见第53页的【3】部分，供参考）N

21、OEL =LD50 BW2000From the NOEL number a MACO can be calculated according to:从NOEL值，用以下公式计算MACO值：MACO =NOELprevious MBSnextSFnext TDD nextMACO =NOEL上一产品 MBS下一产品SF下一产品TDD下一产品MACOMaximum Allowance Carryover: acceptable transferred amount from the previous product into your next product (mg)允许最大残留：从上一产品中

22、可以接受转入下一产品的数量(mg)NOELpreviousNo Observed Effect Level (mg/day)无可见影响水平(mg/day)LD50Lethal Dose 50 in mg/kg animal. The identification of the animal (mouse, rat etc.) and the way of entry (IV, oral etc.) is important (mg/kg)50%的动物致死量，单位mg/kg。动物种类（大鼠、小鼠等）和摄入途径（注射、口服等）也很重要(mg/kg)BWIs the weight of an ave

23、rage adult (e.g. 70 kg) (kg)成年人平均体重（例如70kg）(kg)20002000 is an empirical constant经验常数TDDnextStandard Therapeutic Daily Dose for the next product (mg/day)下一产品的日标准治疗剂量(mg/day)MBSnextMinimum batch size for the next product (s) (where MACO can end up)下一产品的最小批量（MACO会携入的产品）(mg)SFnextSafety factor安全系数安全系数（S

24、F）根据摄入途径不同而不同（见下）。一般系数200用于口服剂型原料药生产。Safety factors:安全系数Topicals 10 100局部给药Oral products 100 1000口服给药Parenterals 1000 10 000注射给药4.2.4 General Limit as acceptance criteria可接受标准的一般限度如果MACO计算结果太高，不能接受，或者与带入数字不相关，或中间体毒性数据未知，则适用通用限度方法。公司可以选择例如一个最高限度作为原则。通用限度一般设定为一种污染物质在后续批次中最大浓度上限（MAXCONC）。Procedure程序利用以

25、下公式，基于一个通用限度建立MACO限度，ppm为单位。MACOppm=MAXCONCxMBSMACOppmMaximum Allowable Carryover: acceptable transferred amount from the investigated product (“previous”). Calculated from general ppm limit.允许最大残留：所讨论的产品（上一产品）被带入下一产品的可接受值，一般表达为ppm限度MAXCONCGeneral limit for maximum allowed concentration (kg/kg or pp

26、m) of “previous” substance in the next batch.允许上一产品在下一产品中的最大浓度通用限度（kg/kg或ppm）MBSMinimum batch size for the next product(s) (where MACO can end up)下一产品的最小批量例如，对于通用限度为100ppm：MACO =最小批量（MBS）的0.01%，对于通用限度为10ppm：MACO =最小批量（MBS）的0.001%。注：ICH杂质文件（Q3）指出，在被测试的产品中，单个未知杂质可以达0.1%，总未知杂质可以达到0.5%。根据各公司所生产产品的属性不同（例

27、如，毒性、药物活性等），从上一产品带入下一产品中的污染物质最大浓度通用上限通常设定为5-500ppm（原料药中100ppm是很常见的）。毒性关注阈值（TTC）概念可以应用于没有临床（例如早期研发阶段）或毒性数据的中间体或原料药。这个概念将数据有限或没有数据的产品分为3个类别l可能致癌的产品l可能具有效价或高毒性的产品l可能致癌、具有效价或高毒性的产品对应此三类所推荐的ADE值分别为1、10和100g/天。在没有临床或毒性数据（例如研发早期）时，计算中间体或API的ADE还有另一个办法，就是基于下一产品的暴露时长。可以将CHMP指南“基因毒性杂质”（参见EMEA/CHMP/SWP/431994/

28、2007）限度值可以用于ADE计算。注：如果你决定采用清洁水平概念（参见第5部分），则对于不同水平可以采用不同的安全系数（ppm限度）。特别是如果被清洁的产品是在同一条合成链中，且其限度包括在原料药的质量标准中，则残留水平较高（确认过的）时也是可以接受的。4.2.5 Swab Limits擦拭限度如果假定所有表面上残留的分布是均匀的，可以给擦拭样品设定一个推荐值。可以根据例如ADE值、NOEL或TDD（见上）设定一批到另一批的最大允许残留值。如果知道直接接触产品的总面积，则可以根据4.2.5-I公式计算单位面积上的污染目标值，该值可以在制订方法验证方案和检测限值时参考。Equation 4.2

29、.5-I Target value g/dm2 =MACOgTotal surface dm2公式4.2.5-I目标值g/dm2 =MACOg总表面积dm2也可以对同一设备和/或设备链不同的表面使用不同的擦拭限度。如果设备被分为几个部分，对可以针对设备链不同部分采用不同的擦拭限度。如果一个部件的结果超出了目标值，整个设备链的残留值仍可能是在MACO的限度以内。这时，可以按公式4.2.5-II（见下）计算残留量。在设备确认和清洁验证中，可以确定哪个部件是难以清洁的。其实可以采用上述的方法来将难以清洁的部件分开来，而不需要采用最难清洁的部件作为最差擦拭情况的限度用于整个设备链。要注意不同材质表面（

30、例如，不锈钢、搪玻璃、聚四氟乙烯）可能有不同的擦拭回收率。在这种情况下，如果把设备链划分为几个部分，将结果在一份表或类别中合并可能会比较好。合计数量应低于MACO值，单个擦拭结果不应超过在清洁验证/设备确认中所设立的最大高期望值。在使用擦拭方法测定残留量时，要进行回收率研究和方法验证。Equation公式4.2.5-IICO g =(Aidm2 mig/dm2)COTrue (measured) total quantity of substance (possible carryover) on the cleaned surface in contact with the product,

31、 calculated from results of swab tests.采用擦拭检测结果计算出的与产品直接接触的已清洁表面实际总残留量AiArea for the tested piece of equipment # i.所测试的i设备的面积miQuantity in g/dm2, for each swab per area of swabbed surface (normally 1 dm2)单位擦拭面积的残留数量4.2.5.1. Setting Acceptance Criteria for Swab Limits对擦拭限度设定可接受标准以下可接受标准适用于各测试项目：单个设备清

32、洁结果应不超过最大可接受残留量。总设备链的MACO不得超过。在制订可接受限度时，要考虑在相关设备中可能生产的所有后续产品。建议画出矩阵图，在其中对所有情况下的限度进行计算，然后针对在该设备中生产的每个产品分别制订可接受标准，也可以对所产品选择最差情况下的可接受标准。4.2.5.2. Evaluation of results结果评估在对所有表面取样后，对样品进行分析，将结果与可接受标准进行比较。公司可以发现采用MACO来评估会比较容易。但是，还是建议对于擦拭限制订一个原则，主要是因为擦拭样品分析方法的验证是在一定的浓度范围内进行的。另一个原因是有一些部件的污染可能会比较严重，没有理由让一些部件

33、清洁的非常彻底而让另一些部件很脏。因此，应同时设定MACO限度和擦拭限度。4.2.6. Rinse Limit淋洗限度设备清洁后的残留量也可以采用淋洗样来检测。在设备确认时，应该识别出设备中所有可以被淋洗溶剂淋到的部件。在最后清洁（最后淋洗）结束后，设备状态应评估为“清洁”方可取样。有时，需要对烘干设备以便进行适当的评估。之后，对设备进行淋洗，取样（淋洗样）。应制订书面程序描述淋洗和取样操作，以保证其可重复性和可比较性（重复次数、温度、体积等）。在清洁验证时应对淋洗用溶剂作出选择，选择时应考虑污染物的溶解度，以及淋洗用溶剂与污染物之间的反应活性（皂化反应、水解反应等）。淋洗方法要进行验证。如果

34、采了最差情形方法，可以假定设备中的残留量与对淋洗样品的检测结果相等。这个假设可以通过对一个设备部件上淋洗前后残留物急剧减少来支撑。通常根据上述所列的方法，针对各个产品更换的情况计算MACO。采用以下公式，可以计算出单个可接受标准：目标值= MACO/淋洗溶剂体积对于一定的取样体积（例如1升），采用适当的分析方法测定样品中的残留量，根据以下公式计算整个设备中的残留量：M = V*(C-Cb)MAmount of residue in the cleaned equipment in mg已清洁设备中的残留总量VVolume of the last rinse or wash solvent po

35、rtion in L最后淋洗或冲洗溶剂的体积CConcentration of impurities in the sample in mg/L样品中杂质浓度CbBlank of the cleaning or rinsing solvent in mg/L. If several samples are taken during one run, one and the same blank can be used for all samples provided the same solvent lot was used for the whole run.空白淋洗或冲洗溶剂如果在一个轮次

36、中取了几个样品，则可以采用其中一个空白用于该轮中所有样品的计算要求：M 目标值要求是M 500g2100-500g310-99g41-9g51000mg2100-1000mg310-99mg41-9mg51mg7.5. Worst Case Rating最差情况分级所有物质按设备类别（设备链）和清洁类别（清洁程序）进行科学的矩阵列表。每个类别的组合被作为一个组。在进行分组时，可以开始最差情形分级（WCR）。在一个组中，至少要验证一个最差情形的清洁验证。以下为清洁公司的分级程序举例，实践中可以使用。a) Rating Procedure分级程序在最差情形分级过程中，对每个设备类别中每个物质的研究

37、结果进行总结。如果清洁程序的评估结果显示有些物质需要独特的清洁程序，则这些物质作为一组（每个组员均是最差情形）。如果在一个清洁类别（设备链/单个设备）中的所有物质均需要进行检测，则每个物质适用不同的限度。如果组中只有一些“最差情形”需要检测，则应按以下策略进行检测。如果采用了按优先顺序排列选择最差情形，则一般适用以下方法。通用残留限度选择E评估最低计算限度用于所有用物质是否合理。如果合理，则该限度可以作为特定设备的通用限度。如果发现最低限度太低，不能作为所有物质的通用限度，则需要对第二低限度进行评估，以此类推。清洁工艺验证标准1. 对于具有通用限度的物质，针对每个清洁方法要检测具有最低溶解度的

38、物质（在清洁溶剂/溶液中）。如果不止一个物质满足该标准，则应根据最难清洁经验选择一个物质用于通用标准检测。2. 所有不能落在“括号”中的物质必须单独验证b) Evaluation of Rating分级评估可以根据签发的方案对最差情形进行分级。在方案中，要说明分级的方法和流程。可以使用7.4 a-d中所述的可用调查方法（可以附于方案或报告中，支持分级的合理性）。对于每个设备类别（例如干燥器），可以建立一个矩阵系列。作为案例，清洁公司在下表中选择了设备链A，制订了一个正式的分级矩阵，为设备链A中生产的物质建立了两个清洁类别。所有类别在矩阵表中引入作为一列。Substance物质Cleaning

39、Method Class清洁方法分级a):Hardest to clean*最难清洁b):Solubility溶解度c):ADEd):Ther.dose治疗剂量E substanceIII2.3143F substanceIII2.2124C substanceIII2.1132L substanceIII1.9133O substanceIII2.8223M substanceIII2.5223P substanceI2.2123R substanceI2.6233T substanceI1.8123*各数值是由操作工和主管回答不同问题的主要值。在该设备链中生产的产品使用了两种清洁方法（I类

40、和III类）。因此，需要分为两组来进行验证。III类中最差情形产品（用于验证研究）为O物质（溶解度2和最难清洁2.8）I类中最差情形产品（用于验证研究）为R物质（溶解度2和最难清洁2.6）在两种情形下，均需要计算活性最高物质的限度（ADE4）。如果无法获得ADE值，则根据活性最强的物质计算（治疗剂量4）。如果采用ADE4或治疗剂量4可以计算所有产品的限度，则可将该限度用两组产品。如果采用ADE4或治疗剂量4所计算出的限度太低，有的产品不能达到，则应考虑将E物质和F物质单列为一组，或在专用设备中生产。剩下的组的限度应根据活性最强的物质（ADE 3或治疗剂量3）来计算限度。如果一种物质其优先级为最

41、上，但不常生产，可以同时测试该物质和第二高优先级别的物质，以检查清洁是否对该类中其它所有物质均已足够。这样，最高优先级的物质会在第一次生产时进行测试。WCR和风险评估一般会形成一份报告，其中包括对清洁验证程序所涉及的物质界定优先级别、进行分类情况。建议将完整的应用背景调查及其批准情况附入清洁验证方案或报告中。c) Re-rating重新分级对WCR也要实施变更控制。如果分级条件进行了变更，则要进行重新分级。以下列出了需要重新分级的例子：l变更清洁方法l变更工艺l变更/增加新产品l变更/增加新设备在重新分级后，建议签发一份正式的控制文件，其中包括一份最差情况清单或表格，与原始分级所用的型式相同，

42、在其中列出所涉及的物质/设备/方法结果。8.0 Determination of the Amount of Residue残留量的检测8.1 Introduction介绍本部分根据药监当局的要求和现行分析方法验证指南，提供了检测已清洁设备中残留物数量的实用指南。在本部分中给出了清洁验证中所用分析方法和取样方法的验证要求，以及取样方法和适当使用分析方法的例子。允许残留限度（Mper）是一个计算出的数值，代表设备清洁程度的质量标准限度（参见4.0部分，可接受限度），但是，对清洁后设备中残留物（M）实际数量的检测必须使用适当的方法来获得，即，针对取样方法和样品中污染物的定量。由于对设备可接受清洁度

43、的决定会对产品质量有潜在风险，因此用于M检测的方法必须进行验证，必须至少验证方法的专属性、灵敏度和回收率。8.2 Validation Requirements验证要求8.2.1 General通则分析方法验证的要求在ICH Q2(R1)“分析方法验证：检验和方法学，2005年11月”中已给出。其中列出了四种不同类型的分析方法，各适用不同的验证要求，它们分别是：鉴别测试、杂质检验（定量和限度测试）和含量测试。每种类型方法的验证要求在表1中列出。在上述的分析方法中必须考虑该清单，但是，要根据各案处理例外情况。要注意耐用性在表中并未列出，但在方法的研发过程中适当阶段需要进行考虑。在实际应用中，通常

44、可以设计一个试验性工作，使得在方法设计时可以同步考虑方法的验证特性，例如，专属性、线性、范围、准确度和精密度。分析方法验证必须符合预定的可接受限度。可接受限度应记录在书面的通用方针或验证中。但是，对每个验证过的方法必须有一个验证报告，总结验证结果。TABLE 1 Requirement List for Analytical Validation表1方法验证需求清单特性分析方法类型鉴别杂质检测含量定量测试限度测试准确度+精密度重复性+中间精密度+1+专属性2+检测限3+定量限+线性+范围+说明表示该特性一般不需要评估。+表示该特性一般要进行评估。1如果做了重复性测试，则不需要做中间精密度。2如

45、果一个方法缺乏专属性，则可以用另一个支持性分析方法进行补偿。3有时需要。在清洁验证专用分析方法验证中，一般应用“杂质检测”的要求。有时可以应用“杂质定量检测”要求，例如，如果一个方法适用于几个可能的可接受限度，因此可能需要对一定水平范围内的残留物进行定量检测，例如，残留物M的测得量必须与可接受标准5-750g/设备相比较。如果方法要用于几个产品更换情况下的检测，则可以使用上述方法。有时可以应用“杂质限度检测”要求，例如，如果方法需要符合一个特定的可接受限度，例如，对M的测量必须与Mper 105 g/设备进行比较。8.2.2 Analytical Method Validation for C

46、leaning Validation清洁验证所用分析方法验证在以下部分强调了清洁验证专用的分析方法要点。更详细的要求参见ICH Q2(R1)。专属性是所有分析方法（见表1）都适用的基本要求，但是，在清洁验证中，可能并不是所有潜在杂质都能被明确，在这种情况下要重点注意即使是专属的方法，也并不一定能检测出所有杂质。可以研究未知杂质的特性，建立适当的检验方法并验证，但这样做所耗费的时间可能是无法接受的。这时，可能会适当的办法是采用一个能检出所有潜在杂质的方法，即使该方法对有些杂质不具有专属性。例如，如果只有不挥发性杂质产生，只要验证结果符合表1的要求，可以使用非专属性方法蒸发残渣来检测所有不挥发性杂

47、质的总和。考虑到要使设备清洁程度可以接受，必须假定蒸发残渣结果中会包括最差情形的杂质（毒性最强、活性最强等）。有时，可以联合使用几个方法来达到必需的专属性要求。在清洁验证完成后，可以使用非专属性方法（例如，蒸发残渣）对按验证过的清洁程序清洁后的设备进行日常检测，只要该方法适合其既定用途。可能的情况下，清洁验证所用检验方法对杂质检测的灵敏度应与取样方法和分析方法一起测试（参见7.2.4部分）。8.2.3 Detection and Quantitation Limits定量限和检测限低于定量限（LOQ）应报告为定量限值（最差情况法）。例如，如果LOQ为10mg/L，测得空白结果为7mg/L，测得

48、残留值为3mg/L，则该样品的残留值应报告为LOQ，即10mg/L。一般可以假定，在杂质定量检测时，LOQ应为质量标准的约0.5倍，即对于清洁验证来说，可接受限度的0.5或更低。LOD不得高于可接受限度。在以下部分，列出了三种确定LOQ/LOD的方法：?Based on Visual Evaluation目视评估目视评估可以用于非仪器方法，但也可用于仪器分析方法。这种方法经常用于TLC。?Based on Signal-to-Noise Approach信噪比方法本方法只能用于产生基线噪声的分析方法（例如，GC、HPLC）。信噪比（S/N）为2-3：1时，一般可以作为估计的检测限（LOD），1

49、0：1可以作为定量限（LOQ）。信噪比值可以根据公式1和图1计算：其中：H为基线平均值的峰高hn是基线在5-20部半峰高时峰宽范围内最大偏差?Based on the Standard Deviation of the Response and the Slope根据响应和斜率的标准偏差T检查限可以采用公式2表示，定量限可以用公式3表示。8.2.4 Determination of Recovery回收率测定可能的话，可以针对取样方法和检验方法同时进行清洁验证中杂质检测的回收率和灵敏度（定量限-LOQ，或检测限-LOD）。例如，可以采用与设备表面材质相同的表面材料（例如，材质、粗糙度），在上面

50、加不同已知数量的杂质，然后采用与清洁验证研究相同的方法取样并分析。再将使用该方法所得的总体结果与ICH Q2(R1)中定义的检测限或定量限标准进行比较。可对接近限度的已知样品进行分析来验证分析方法的检测限和定量限。将检测结果与实际数量进行比较，用于表面残留计算。回收率一般是在准确性测试中确定，应报告为已知杂质数量的百分比。例如在杂质定量测试中，回收率 90 %时一般认为是可以接受的。在清洁验证中，如果回收率 90 %，在M残留量真值计算中可以不需要考虑回收率；如果回收率 90 %，则需要在M计算时加以考虑（参见公式4），如果回收率50%，则该方法不适用。公式4：其中M：清洁后设备上残留物的数量

51、真值Mres：测得残留量（取样后分析测量）R：回收率除以100（例如，对于75%即为75/100=0.75）8.2.5 Validation Requirements for Quantitative Testing of Impurities杂质定量测试的验证要求根据ICH Q2(R1)，杂质定量检测方法的验证要求在表2中列出，包括制订的可接受标准（只是举例）。可以根据科学合理的原则制订适当的可接受标准。重点要注意的是，在清洁验证研究中，定量检测方法验证应满足所有要求。如果分析方法将用于设备中残留量有不同的几个质量标准，则一般采用杂质定量方法验证要求。最低预期可接受限度，在表2中称为Mper

52、Min，和最高限度，称为MperMax。对于只有一个特定的可接受限度，一般可以使用杂质限度测试方法，对方法只要做相应的验证即可。如果要将杂质定量方法的验证用于单一可接受限度，则MperMin = MperMax = Mper。表2中试验里，可以采用杂质（如果可以获得标准品的话）加入样品中至适当的浓度水平，或与另一个经过确认的检验方法进行对比（如果不能得到标准品的话），以得到被分析物的真实浓度值。TABLE 2Validation Requirements表2验证要求测试项目可能的可接受标准准确度在指定的浓度范围内对3个浓度进行至少9次检测（例如，3个浓度各按完整的分析方法检测3次）。测试残留物

53、在样品中的总量（例如重量/重量）。报告：精密度，表达为回收率百分比或90.00-110.00%平均值与所接受的真值之间的差异.10.00% (P=95%)置信区间精密度:使用均匀的具有标准值的样品或（如果没有标准样品的话）人为制备的样品，在指定范围内采用指定方法（例如，3个浓度各3次重复检测）检测至少9次，或在检测浓度100%水平测试至少6次。重复性（含量精密度）建立相同操作条件下较短时间内的精密度报告：:标准偏差（与S相互依存）参见S整个方法浓度范围内的总体相对标准偏差10.00%一个浓度水平的相对标准偏差20.00%置信区间中间精密度（可以包括耐用性）在不同天、不同化验员采用不同设备对方法

54、参数进行变动（=耐用性，例如，溶液稳定性、pH值变化、流动相比例、流速、温度、柱子等）检测方法精密度。不需要单独研究各因素的影响，可以使用试验设计（矩阵）。报告：标准偏差（依赖于相对标准偏差）参见S相对标准偏差重复性中的S值乘3或10%，取大者置信区间专属性证明被分析物与其它杂质的分离度检验含有被测试物和杂质的样品，得到被分析物的符合的正确结果。指定可接受偏差检测不含被分析物的样品。测试结果不含被分析物对于色谱方法，采用代表性图谱记录专属性。对各化合物进行恰当标识。指定各峰间的可接受分离度线性检验方法范围内最少5个浓度检测（稀释标准贮备液或制备的合成混合物）。画出浓度-信号点，评估：目视线性统

55、计数据（例如，最小平方法回归线）相关系数0.99000Y轴截距置信区间(P = 95%)contains 0回归线斜率残差平方和范围：确认检验方法的线性可以接受，精密度和准确度在指定的范围内或在范围极值。最小指定范围：报告限至最大样品浓度的120%。合理的清洁验证的报告水平应在定量限，但是报告水平必须低于最小样品浓度，低于或等于最小样品浓度的80%。从定量限或最小浓度的80%到最大浓度的120%。8.3 Sampling Methods取样方法为了证明工厂设备是清洁的，且符合预定的可接受标准，应采用以下部分所述的方法进行取样和分析。应各案论述对选择技术的恰当性。一般最好采用同时采用两种取样方法

56、。对所取样方法，取样点应以一定方式固定，以反映设备中的真实污染情况。8.3.1 Swab sampling (Direct Surface Sampling)擦拭取样（表面直接取样）对设备表面进行直接擦拭取样设计用于检测设备上小面积上残留物。样品应从所有主要设备上取样，由于擦拭取样并不覆盖整个设备表面，因此要对于取样部位的选择做出论述。一般来说，对已清洁设备的一个较小面积采用预定的方法，例如擦拭材料、溶剂和方法，进行擦拭取样。对擦拭样品进行提取，采用适当的分析方法进行检测。将样品测试所得的残留量值外推至整个设备（参见公式6）。It is important:以下内容应重视l擦拭取样方法验证应采

57、用相同表面（材质、光洁度、面积以dm2为单位），以及设备常规取样时相同的取样棒l选择擦拭材料时，要考虑可萃出物料可能对预期的残留物产生影响l要保证取样点代表设备的最差面积该取样方法的缺点是有些原料药设备比较复杂，有些部分难以取到擦拭样品（例如，密封处、冷凝器、转移用管道），而这些面积可能对于设备残留量的测定比较关键。MAmount of residue in the cleaned equipment in mg.已清洁设备中残留量mgWFRecovery rate for the whole chain swab/analytical method (e.g. 0.8 for 80%).整个

58、设备链的擦拭/分析方法回收率（例如0.8代表80%）FtotThe entire inner surface of the equipment in dm2设备整个内表面积，平方分米MiAmount of residue (e.g. previous product) in the sample i in mg.样品中的残留量（例如，上一产品）mgCiGross amount of residue in the sample i in mg.样品i中残留总量mgCBiBlank of the sample i in mg. To establish the blank, a swab (or

59、several swabs) can be treated in the similar way as a sampling swab except swabbing of the contaminated surface. Usually one and the same blank can be used for all N sampling swabs.空白样品i重量mg为建立空白，可以将一个（或几个）取样用空白棉签采用与样品同等方法处理。一般一个相同的空白可以用于所有N个取样棉签。FiArea swabbed by the swab i in dm2.擦拭取样的面积，平方分米NNumb

60、er of swab samples.样品数量iSample identifier (current number from 1 to N).样品识别号（现在编号为1至N）由于现在普遍使用色谱分析方法（例如HPLC、GC、TLC），可以对下一产品的第一个生产批号取样，分析其中（上一产品）杂质。8.3.2 Rinse or Wash Solvent Sampling淋洗或冲洗取样如果没办法进行擦拭取样，例如不能入口受限，可以对最终淋洗液进行检测来替代擦拭样品。淋洗样品可以用于确定一个很大表面积上的残留量，并覆盖所有主要工艺设备，包括物料管道。如果擦拭取样不实际，可以接受只对淋洗样品进行检测，但应