临床免疫学检验：第5章 凝集反应和沉淀反应

1、第五章 凝集反应和沉淀反应(Chapter 5 Agglutination And Precipitation Reaction)临床免疫学检验主 要 内 容第一节 凝集反应1第二节 沉淀反应2第三节 凝集反应和沉淀反应的应用3目录(Section 1 Agglutination Reaction) 凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）与相应抗体（或抗原）特异性结合后，一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。第一节 凝集反应第一节 凝集反应一、直接凝集反应 在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象。第一节 凝集反应一

2、、直接凝集反应（一）玻片凝集试验第一节 凝集反应一、直接凝集反应（二）试管凝集试验第一节 凝集反应二、间接凝集反应 将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜的电解质存在条件下，出现特异性凝集现象。第一节 凝集反应二、间接凝集反应（一）正向间接凝集反应 用可溶性抗原致敏载体以检测标本中的待检抗体。第一节 凝集反应二、间接凝集反应（二）反向间接凝集反应 用特异性抗体致敏载体以检测标本中的待检抗原。第一节 凝集反应二、间接凝集反应（三）间接凝集抑制反应 用抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体作为诊断试剂，检测标本

3、中是否存在与致敏抗原相同的抗原。第一节 凝集反应二、间接凝集反应（四）协同凝集反应 以葡萄球菌蛋白A（SPA）做载体的反向间接凝集反应。用于细菌、病毒的直接检测。第一节 凝集反应三、间接血凝试验 以红细胞作为载体的间接凝集试验。第一节 凝集反应三、间接血凝试验自身红细胞凝集试验可用于抗HIV抗体、HBsAg的检测。第一节 凝集反应四、胶乳凝集试验以聚苯乙烯胶乳为载体的间接凝集试验。第一节 凝集反应五、明胶凝集试验 以粉红色明胶吸附病毒抗原或重组抗原，再与待检血清作用，出现肉眼可见的粉红色凝集。常用于抗HIV-1抗体和抗精子抗体检测等。第一节 凝集反应六、抗球蛋白试验 是抗球蛋白参与的间接血凝试

4、验，用于检测抗红细胞不完全抗体。又称为Coombs试验。直接Coombs试验间接Coombs试验第一节 凝集反应六、抗球蛋白试验（一）直接Coombs试验 常用于检测新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血等疾病的患者红细胞上不完全抗体。第一节 凝集反应六、抗球蛋白试验（二）间接Coombs试验 常用于检测母体Rh（D）抗体和因红细胞不相容的输血所产生的血型抗体。第一节 凝集反应特点：1可定性或半定量检测；2方法简便快速，敏感度高。第二节 沉淀反应(Section 2 Precipitation Reaction) 沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体(多克隆抗体)在适当条

5、件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。 反应分两个阶段：特异性结合阶段和可见阶段。后者受抗原抗体比例、分子大小、亲合力、绝对浓度、电解质浓度和反应温度的影响。第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（一）环状沉淀反应 将已知抗血清和待测抗原反应，在液面交界处特异结合形成白色环状沉淀。操作简单定性灵敏度低分辨率低第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（二）絮状沉淀反应 是抗原与相应抗体特异结合，在电解质存在的条件下，形成肉眼可见的絮状沉淀物。 受抗原抗体比例的影响非常明显，常用作测定抗原抗体的最适比例。有抗原稀释法、抗体稀释法和方正滴定法。第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定 是应用抗原

6、抗体结合在液体中形成的IC干扰光线可用仪器检测的特点，将现代光学测量仪器与自动分析检测系统相结合应用于沉淀反应，对各种液体介质中的微量物质进行定量测定。第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定稳定性高精确度高简便快速易于自动化无放射性核素污染第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定1影响因素（1）抗原抗体的比例海德堡曲线理论第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定1影响因素（2）抗体的质量特异性强效价高亲合力强使用R型抗体第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定1影响因素（3）抗原抗体反应的环境最适PH为6.58.5离子强度大，常用磷酸盐缓冲液作

7、为反应液第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定1影响因素（4）增浊剂使用聚乙二醇（PEG）、吐温-20促进IC形成第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定2分类（1）根据抗原抗体反应的时间和反应结合的动力学：速率比浊法终点比浊法第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定2分类（2）根据检测仪器的位置及光信号性质：透射免疫比浊法散射免疫比浊法第二节 沉淀反应一、液体内沉淀试验（三）免疫浊度测定2分类（3）免疫胶乳比浊法：以胶乳作为载体对小分子复合物进行微量测定，提高了免疫浊度测定的灵敏度。第二节 沉淀反应二、凝胶内沉淀试验（三）免疫浊度测定 是利用可溶性抗原和

8、相应抗体在凝胶内扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。常用凝胶包括：琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。第二节 沉淀反应二、凝胶内沉淀试验（一）单向免疫扩散试验先将一定量的抗体混于琼脂凝胶中，使待测的抗原溶液在琼脂内由局部向周围自由扩散，在一定区域内形成可见的沉淀环。第二节 沉淀反应二、凝胶内沉淀试验（一）单向免疫扩散试验第二节 沉淀反应二、凝胶内沉淀试验（一）单向免疫扩散试验常用于IgG、IgA、IgM、C3、C4等血浆蛋白的测定。定量测定（每次测定须制作标准曲线）重复性好灵敏度稍差（不能测定ug/ml以下含量）第二节 沉淀反应二、凝胶内沉淀试验（

9、二）双向免疫扩散试验 将抗原和抗体加在同一琼脂板对应孔中，各自向对方扩散，在浓度比例适当处形成沉淀线。第二节 沉淀反应二、凝胶内沉淀试验（二）双向免疫扩散试验判断抗原或抗体的存在以及评估相对含量分析抗原或抗体相对分子量分析抗原的性质抗体效价的滴定鉴定抗原或抗体纯度第二节 沉淀反应二、凝胶内沉淀试验（二）双向免疫扩散试验定性测定灵敏度低出现结果慢第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术 是直流电场作用下的凝胶扩散试验，是将抗原抗体反应的高度特异性与电泳技术的高分辨率及快速、微量等特性相结合的免疫化学技术。加快沉淀反应的速度；抗原抗体移动方向固定集中，提高了灵敏度。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（一）对

10、流免疫电泳 是将双向免疫扩散与电泳相结合在直流电场中的定向加速的免疫扩散技术。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（一）对流免疫电泳第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（一）对流免疫电泳简便、快速；灵敏度比双扩高816倍；定性检测；常用于抗原或抗体的性质、效价和纯度测定。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（二）火箭免疫电泳 是单向免疫扩散与电泳相结合的一项定向加速的单向扩散试验。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（二）火箭免疫电泳简便、快速；可通过绘制标准曲线，定性检测；灵敏度不高（ug/ml）；可利用免疫自显影技术，提高灵敏度（ng/ml）；常用于IgG、IgA等蛋白定量。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技

11、术（三）免疫电泳 是先将蛋白质抗原在凝胶中作区带电泳，根据其所带电荷、分子量和构型不同分成不可见的若干区带，然后沿电泳方向挖一与之平行的抗体槽，加入相应抗血清，进行双向扩散，两者比例适合处形成弧形沉淀线。通过对沉淀线的数量、位置和形态与已知标准抗原抗体生成的沉淀线比较，可对待测样品中所含成分的种类和性质进行分析。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（三）免疫电泳第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（四）免疫固定电泳 先将血清蛋白质在琼脂糖凝胶介质上经区带电泳分离，再将固定剂和各型Ig及轻链抗血清加于凝胶表面的泳道上，经孵育，固定剂和抗血清在凝胶内渗透并扩散，抗原抗体直接发生沉淀反应，洗脱游离的抗体，形成IC则保留在凝胶中。经氨基黑，参考泳道和抗原抗体沉淀区带被染色，根据电泳移动距离分离单克隆组分，可对各类Ig及其轻链进行分型。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（四）免疫固定电泳第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（四）免疫固定电泳分辨率高，敏感度高；操作周期短；结果易分析；常用于鉴定迁移率相近的蛋白和M蛋白、Ig轻链，尿液、脑脊液等微量蛋白，游离轻链，补体裂解产物等。第二节 沉淀反应三、免疫电泳技术（五）交叉免疫电泳 是区带电泳与火箭免疫电泳结合的一项