细胞形态及大小的观测实验原理及步骤

1、实验一、细胞形态及大小的观测目的：观测细胞形态及大小，了解细胞的分类学习显微测量的方法学习使用油镜测微技术的原理：显微侧微尺分为物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺）。目镜测微尺是一个可以放入目镜内的特制园玻片，玻片中央刻的刻度长5或10mm，将其分成50或100格（也有刻成十字形的）如下图。物微尺为一载片上贴着一圆形玻片中央带有刻度、长度为1mm，等分为100格，每一格长0.01mm（图一）。当测量细胞的大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。因目微尺测量的是细胞经物镜放大后的像，因而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需先用物微尺标定，求出某一

2、放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测量细胞大小。 油镜的原理：油侵系物镜（简称油镜），与干燥系物镜不同，载波片和物镜之间的介质不是空气，而是一层香柏油，其折射率为1.515左右。和玻片折射率相近。光线通过载片后，可直接透过香柏油而进入物镜，折射程度轻，这样物镜的镜口率增大，从而提高物镜的分辨率。显微镜的分辨力与物镜的镜口率成反比，与光线的波长成正比；即：R=0.61/2NA=0.61/2n.sin/2从上式可知提高介质的折射率可以提高显微镜的分辨能力，如果我们用NA为1.30的物镜，可见光平均波长为550nm即黄绿光，则分辨力为0.2。在油镜镜头上一般标有“0i1”，或有一黑色环等

3、做为标志，油镜的放大倍数为90或100倍。实验用品： 显微镜、测微尺、动物及植物的组织切片、香柏油、檫镜纸、二甲苯。实验操作目微尺的标定卸下目镜的上透镜（如为Olympus显微镜，则卸下目镜下方的金属环），将目微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上上透镜（金属环）。将目镜插入镜筒。（2）将物微尺刻度向上放在镜台上夹好，以低倍镜调焦能看到物微尺的刻度，换上你用来测量细胞的物镜（本实验用油镜）。调焦至看清刻度，这时镜中同时看清两尺。小心移动物微尺和转动目镜，使两尺平行，起点线重合，如下图：然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间各尺的刻度数（格数），按下式计算。在该放大系统下目微尺每格

4、所代表的实际长度：目微尺每格所代表的实际长度（）=台微尺格数/目微尺格数*10（）（3） 换上待测标本，既可进行测量。2、油镜的使用：用低倍物镜，调焦观察，将待观察的部分移到视野中央。旋开低倍镜，在玻片上的观察部位滴一滴镜油，将油镜旋入光路，这时油镜透镜应全部被油侵没。调节细调螺旋，使视野清楚，即可观察油镜的擦拭：在油镜使用结束后，用镜纸轻轻擦去镜头上的油，再用干净擦镜纸蘸上少许乙醚：无水乙醇（7：3）混合液擦去镜上残余的镜油，最后用干擦镜纸擦干，擦永久玻片或物微尺，方法类似。3、观察及测量多角形细胞：观察小白鼠肝细胞，细胞呈多角形，分界不太明显，以苏木精-伊红染色，细胞质染成红色，细胞核染成

5、兰色，测量其细胞及细胞核的长短径。柱状细胞：观察河蚌外套膜两侧表皮细胞，细胞是高柱状或低柱状，一苏木精-伊红染色，测量细胞及细胞核的长短径。梭形细胞：河蚌外套膜表皮以内，为结缔组织，其中有横肌和纵肌切面，细胞呈梭形，染色方法同上。树枝状细胞：观察兔脊髓运动神经元，分布在脊髓灰质中，细胞突起呈树枝状。卵园形细胞：观察人血细胞涂片中的红细胞、白细胞。4、洋葱根尖细胞大小测定及有丝分裂各时期的观察。测量洋葱根尖分生区细胞和细胞核的长短径。有丝分裂各时期的观察：前期：（Prophase）主要是染色质转变为染色体的过程，核仁核膜消失。中期：（Metephase），染色体分布在赤道面上。后期：（Anaph

6、ase），含姐妹染色单体的染色体的着丝点分离形成两条染色体，分别向两极移动。末期（Telophase），染色体到达两极后，染色体解螺旋化成染色质，形成两个子核，核仁再次出现，一个细胞分裂成两个细胞。5、细胞器的观察 高尔基体观察脊神经节细胞；高尔基体银染成棕色，形状为网状或块状，分布在核周围的胞质中。观察河蚌外套膜表皮细胞；高尔基体染成棕色，呈网状，分布在柱状上皮的远心端（有极性分布）。 线粒体观察兔肝细胞：线粒体呈兰色线、粒状，均匀地分布细胞质中。观察兔小肠上皮细胞：线粒体呈兰色线、粒状。分布在柱状上皮细胞的细胞质中，分布呈两极状。即主要分布在细胞的顶部和基部。测量结果计算：1、公式为：椭球为：V=4ab2（a为长半径，b为短