药物检测技术药物的杂质检查技术

1、一、药品纯度 、定义：药品纯净程度，又称药用规格(最高杂质限量)，因药品纯度检验主要针对杂质检验，所以杂质检验又称纯度检验。第一节 概述第1页第2页改变原料改变工艺新药研究需检查可能引入而未要求杂质第3页杂 质（forin、impurities）有毒副作用物质无毒副作用影响药品稳定性和疗效无毒副作用不影响药品稳定性和疗效影响药品科学管理物质第4页二、药品中杂质起源第5页 在药品生产过程中引入杂质路径为 A. 原料不纯或部分未反应完全原料造成 B. 合成过程中产生中间体或副产物分离不净造成 C. 需加入各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金属器皿及装置等引入杂质 E. 因为操作不妥

2、，日光曝晒而使产品发生分解引入杂质 例第6页三、杂质分类 普通杂质特殊杂质按起源分第7页普通杂质：自然界是中分布较广，轻易引入物 质。其方法收载在中国药典附录 中。 特殊杂质：指某一个或某一类药品生产或贮藏 过程中引入杂质。杂质检验方法收 载在中国药典正文各药品质量标准 中。第8页水杨酸CH3COOH+水解一步硫酸臭味例阿司匹林 水杨酸第9页信号杂质有害杂质按危害性分Cl-、SO2-、Fe3+、H+、OH-、H2O剧毒重金属、砷盐第10页 中国药典（）中要求普通杂质 检验中不包含项目是 A. 硫酸盐检验 B. 氯化物检验 C. 溶出度检验 D. 重金属检验 E. 砷盐检验 例第11页（一）杂质

3、限量 指药品中允许杂质存在最大量，通惯用百分之几或百万分之几（ppm）来表示四、 药品杂质限量与检验法第12页杂质量 杂质量药品合格药品不合格杂质限量第13页 （二）药品杂质检验法 杂 质检验法灵敏度对照法比较法第14页 1. 对照法 需对照物质 限量检验法 （Limit Test） 特点：不需知道杂质准确含量。第15页选择待检杂质作对照第16页供试品稀释对照第17页 2. 灵敏度法 系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下,不得有正反应出现 不需对照物质50ml H2O + 5滴HNO3 不浑浊纯水中Cl-合格 第18页 3. 比较法 含量测定法：测定杂质绝对含量，如测定吸收度、pH值等

4、。 特点：准确测定杂质量。不需对照物质第19页（三） 杂质限量计算L=C标V标/ms 100%第20页 检验某药品中砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1gAs）制备标准砷斑，砷盐限量为0.00004，应取供试品量为 A. 0.50g B. 5.0g C0.050g D. 2.50g E. 0.250g第21页一、普通杂质检验规则 药品检验操作标准要求：1. 遵照平行操作标准 (1)仪器配对性： 如纳氏比色管应配对,刻度线高低相差不超出2mm，砷盐检验时导气管长度及孔大小要一致 (2)对照品与供试品同时操作第二节 普通杂质检验第22页 2. 正确取样及供试品称量范围 1g不超出2%，1g不

5、超出1% 3. 正确比色、比浊方法 4. 检验结果不符合要求或在程度边缘 时应对供试管和对照管各复查二份 第23页二、氯化物检验法（一）原理 对照法 第24页（二）检验方法 药典附录 1.除另有要求外，取各药品项下要求量供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。第25页 2.另取各药品项下要求量标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照液。第26页 3.于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成

6、50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得第27页（三）测定条件 1. 标准NaCl溶液 10gCl/ml，50ml溶液中含5080gCl所显浑浊梯度显著，相当于标准NaCl溶液58ml。 2. 反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。 第28页 （1）加速AgCl浑浊形成； （2）产生很好乳浊； （3）防止弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀形成。第29页3. 试剂：硝酸银4. 供试液和对照液稀释后，再加硝酸 银溶液，使生成白色浑浊而不是白 色沉淀 5. 避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯 化银见光易分解。6. 比浊方法

7、：同置于黑色背景上，自 上向下观察。 7. 平行操作标准 第30页（四）干扰及排除 1. 若供试品有色，需经处理后方可检验。 （1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中氯化物检验。在对照液中加一定量供试液。 （2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物检验，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检验。 第31页 2. 不溶于水有机药品 （1）加水振摇，过滤，取滤液进行检验。 （2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检验。 （3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检验。 第32页例一. 药品中氯化物杂质检验，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用稀酸是（B）A. 硫酸 B. 硝酸

8、C. 盐酸 D. 醋酸 E. 磷酸 第33页例2. 中国药典 （） 要求，检验氯化物杂质时，普通取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml原因是（D）A. 使检验反应完全B. 药品中含氯化物量均在此范围C. 加速反应D. 所产生浊度梯度显著E. 防止干扰 第34页例3. 采取硝酸银试液检验氯化物时，加入硝酸使溶液酸化目标是（ABCDE）A加速生成氯化银浑浊反应B消除一些弱酸盐干扰C消除碳酸盐干扰D消除磷酸盐干扰E防止氧化银沉淀生成第35页例4. 当采取比浊法检验氯化物杂质时，若药品本身有颜色而干扰检验话，应该选取处理方法为（AB）A内消色法B外消色法C比色法D差示比浊法 E差示可见分光法

9、第36页例5. 以下哪些条件为药品中氯化物检验必要条件（ABC）A. 所用比色管需配套B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C. 避光放置5分钟D. 用硝酸银标准溶液做对照E. 在白色背景下观察 第37页三、硫酸盐检验法（一）原理 对照法第38页（二）测定条件 1. 标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg所显浑浊梯度显著，相当于标准K2SO4溶液15ml。 2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。 第39页 3. 试剂：氯化钡 4. 供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀 5. 比浊方法：同置于黑色背

10、景上自上向下观察。 第40页 若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。 （三）干扰及排除第41页例：药品中硫酸盐检验时，所用标准对照液是（D）A. 标准氯化钡B. 标准醋酸铅溶液C. 标准硝酸银溶液D. 标准硫酸钾溶液 E. 以上都不对 第42页四、铁盐检验法1. 原理 对照法（一）硫氰酸盐法 ChP()、USP(24)第43页 2. 检验方法 药典附录 除另有要求外，取各药品项下要求量供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg,用水稀释使成 35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；第44页如显色，马上与标准铁溶液

11、一定量制成对照溶液（取各药品项下要求量标准铁溶液,置50ml纳氏比色管中,加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得第45页 3. 测定条件 （1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸预防Fe3+水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10g Fe3+/ml，50ml溶液中含1050gFe3+显色梯度显著，普通取标准铁溶液1.05.0ml 第46页 （2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。 （3）试剂：硫氰酸铵。加过

12、量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行 （4）检验Fe2+和Fe3+ 第47页 （5）铁盐检验时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可预防光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+ （6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。 第48页4. 干扰及排除 (1)为了提升灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。 (2)具环状结构有机药品，需经700800炽灼破坏处理后再依法检验。 第49页（二）巯基醋酸法 对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵 第50页例1. 中国药典（）要求铁盐检验方法为（A）A. 硫氰

13、酸盐法B. 巯基醋酸法C. 普鲁士蓝法D 邻二氮菲法E. 水杨酸显色法第51页例2. 中国药典（）要求，硫氰酸铵法检验铁盐时，加入过硫酸按目标是（AB） A. 使药品中铁盐都转变为Fe3+ B. 预防光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生红色产物颜色更深 D预防干扰 E便于观察、比较 第52页例3. 中国药典收载铁盐检验，主要是检验（D）A. FeB. Fe2+C. Fe3+D. Fe2+和Fe3+ E. 以上都不对 第53页五、重金属检验法 以铅为代表中国药典（）共收载四法。 第一法 硫代乙酰胺法第二法 炽灼残渣法第三法 硫化钠法第四法 微孔滤膜法 第54页（一）第一法 硫代乙酰胺法1.

14、 原理 对照法 适合用于溶于水、稀酸和乙醇药品。 第55页 2. 测定条件 （1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸预防Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅标准溶液10g Pb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020gPb2+。 第56页 （2）本法用2ml pH3.5醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。 （3）显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂 第57页(1)供试品如有色，需经处理后方可检验外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其它无干扰有色溶液。 3. 干扰及排除第58页（2）若供试品中有微量Fe3+存在, 会氧化硫化氢生成单质硫,干扰比色,加入抗

15、坏血酸或盐酸羟胺(0.51.0g)还原Fe3+为Fe2+,可消除干扰第59页（3）若供试品为铁盐，Fe3+在盐酸中生成物用乙醚提取除去，剩下微量铁在氨碱性溶液中，加KCN掩蔽，然后用第三法检验 第60页(4)若药品本身含有与S2-反应物质时可加入掩蔽剂消除干扰。如Sb2+中重金属检验，要在碱性下加KCN掩蔽Sb2+后，依第三法检验第61页 （二）第二法 炽灼残渣法 适合用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱有机药品。 1. 原理 对照法500600炽灼后残渣，加硝酸处理后，依一法检验。 第62页2. 操作方法第63页 含钠及氟有机药品应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，

16、带入大量重金属）第64页 （三）第三法 硫化钠法 适合用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀药品。如磺胺类、巴比妥类。 1. 原理 对照法 2. 测定条件 （1）NaOH碱性条件下（2）显色剂：硫化钠第65页（四）第四法 微孔滤膜法 适合用于含25g重金属杂质及有色供试液检验。 依一法检验，结果微孔滤膜过滤后比较色斑。 P66-67第66页六、砷盐检验法 （一）古蔡法 ChP（）1. 原理 对照法 遇HgBr2试纸生成黄色棕色砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成砷斑比较第67页2. 操作方法 （1）标准砷斑用2ml标准砷溶液制备（2）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作第68页第6

17、9页3. 测定条件 (1)标准砷溶液临用新配，1gAs/ml。 (2)酸为反应物，酸量应足够，所以加 浓盐酸5ml。 第70页（3）酸性氯化亚锡及碘化钾作用是:还原As5+为As3+，加紧反应速度； 碘化钾被氧化生成I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成Zn2+能形成稳定配位离子，有利于生成砷化氢反应不停进行；第71页C.氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生；D. 可抑制微量Sb干扰。 第72页（4）醋酸铅棉花作用: 吸收硫化物，消除锌粒及供试品中少许硫化物干扰，醋酸铅棉花60mg装管高度6080mm。（5）锌粒应无砷（6）砷斑不稳定，应马上观察第73页4. 干

18、扰及排除（1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，加HNO3，使氧化成硫酸盐，以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐检验。 （2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+。如枸橼酸铁铵中砷盐检验。第74页（3）具环状结构有机药品，要先行 有机破坏后再进行检验。 惯用有机破坏方法：碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法酸破坏法：如葡萄糖中砷盐检验（4）供试品中有强氧化剂加H2SO4先 行分解。 （5）本法适合用于不含Sb或含Sb量小于 100g供试品。 第75页（二）Ag-DDC法 （二乙基二硫代氨基甲酸银法）原理：对照法第76页 、操作： 砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原A

19、gDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波优点测定吸收度，进行比较。 用有机碱吸收反应产生HDDC有利于反应进行。USP用吡啶,ChP用三乙胺第77页第78页七、干燥失重测定法 干燥失重是指药品在要求条件下经干燥后所减失重量，主要是水分，也包含其它挥发性物质。测定方法： 、恒温常压干燥法 、恒温减压干燥法 、常温减压干燥法第79页（一）常压恒温干燥法 、定义:适合用于受热较稳定药品。干燥温度普通为105。 干燥失重%失重/供试品重100 、操作:第二次及以后各次称重均应在 要求条件下继续干燥1h后进行 直至MnMn-10.3mg为恒重。第80页、注意(1)供试品厚度：A.普通5mm； B.

20、疏松10mm；C.大粒结晶粒度2mm。(2)干燥温度：A.普通105； B.含结晶水要提升温度； C.含水量大且熔点低要先低温后105(3)特殊供试品： 膏状物粗砂粒及玻璃棒并均匀搅拌 第81页（二）减压干燥法 （真空干燥） 适合用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除药品。除另有要求外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。第82页、测定方法(1)卡尔费休水分滴定法(费休法)：适合用于加热易破坏，不适于氧化剂/还原剂/水反应物质。(2)甲苯法:适用颜色较深药品/氧化剂 还原剂/皂类/油类等。(3)甲醛法:不适于(1)(2)用(3)法。八、水分测定法第83页、费 休 法(1)原理:非水溶液中氧

21、化还原滴定,标 准滴定液即费休液(I2+SO2+吡啶+甲醇)I2+SO2+H2O SO3+HISO3+HI+无水吡啶氢碘酸吡啶+ 硫酸酐吡啶(不稳定)硫酸酐吡啶+无水甲醇 甲基硫酸氢吡啶(稳定)总反应方程式:I2+SO2+3C2H5N+CH3OH+H2O 2C2H5NHI+C2H5NHSO4CH3 第84页(2)操 作 水分标定费休液： 干燥具塞玻璃瓶中重蒸馏水30mg 无水甲醇25ml费休试液滴至终点 并用空白校正，得：F=W/(A-B) *(F=4.0为宜，F3.0不宜再用)F-滴定度(相当水重量/ml费休液) mg/ml W-重蒸馏水重量(mg) A-滴定消花费休液容积(ml) B-空白

22、消花费休液容积(ml)第85页供试液测定： 将中重蒸馏水换上供试品，使终点由黄色至红棕色/永停滴定法指示终点，得：供试品中水分含量%=(A-B)F/W100%第86页(3)注 意 吡啶和甲醇即是反应物又是溶剂 终点指示法可： .2本身作指示剂 .永停滴定法指示：电流计突然偏转且数分钟不退回 费休试剂：要求纯度高，含水量0.1% 其中I2干燥器中48hr； SO2用浓H2SO4脱水后再配制 供试品取量：以消花费休液15ml为宜 试验条件：不宜在温度高环境中操作第87页 检验不含金属有机药品或挥发性无机药品中混入无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。 1. 原理 样品炭化/分解后+ H2SO4湿润70

23、0800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分）限量普通为0.1%0.2% 九、炽灼残渣检验法第88页2. 操作方法第89页3. 注意事项 （1）供试品取样量应依据炽灼残渣限量和称量误差决定。（2）含氟药品对瓷坩埚有腐蚀，应采取铂坩埚。（3）若残渣需留作重金属检验，则500600炽灼至恒重。（4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定硫酸盐，并帮助有机物炭化 第90页 十、溶液颜色检验法控制药品中有色杂质限量方法。 采取三种方法检验： 第一法 目视比色法 即与标准比色液比较方法，标准比色液配制 第91页第二法 分光光度法 单一波长定量第三法 色差计法 全波长范围定量 本法是经过色差计直接测定溶液透视三刺激值，对其

24、颜色进行定量表述和分析方法。 测色仪器普通为光电积分型色差计第92页十三、澄清度检验法 检验药品中微量不溶性杂质，用作注射剂原料药普通应作此项检验。 1. 检验方法 对照法 第93页 2. 浊度标准液配制 中国药典要求用浊度标准液作为澄清度检验标准。 反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。第94页操作：1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液 浊度标准原液 浊度标准液（5个级号）第95页3. 判断：药典中要求“澄清”，系指供试品溶液澄清度相同于所用溶剂，或未超出0.5号浊度标准液。4. 溶剂：水、酸、碱、有机溶剂*

25、有机酸碱金属盐类药品强调用“新沸过冷水”第96页定义： 药品生产和贮存过程中，据药品本身性质、生产方法、工艺条件可能引入杂质。第三节特殊杂质检验第97页第98页四、分光光度法： 利用杂质与药品对光选择吸收差异，通常选药品无吸收而杂质有吸收波长测要求值 第99页(一)紫外分光光度法、药品无吸收而杂质有吸收：肾上腺素(药品)肾上腺酮（杂质）310nm无吸收有吸收要求在310nm处测0.05第100页第101页、药品与杂质在某一波长有重合碘解磷定分解产物294nmmax无吸收262nmmin有吸收x第102页不含分解产物A294/A262Amax/Amin含分解产物A294/A262(Amax0)/

26、(Amin+Ax)A294/A2623.1合 格第103页(二 )比色法：供试品试剂对照品试剂 比色 AF710-3目视比色计第104页 (三)红外分光光度法： 常测药品中无效/低效晶型。第105页遵照朗伯比尔定律数学表示式：AkbcA 吸光度；K 百分比常数；B 基态原子层厚度；C 蒸汽中基态原子浓度。基本原理(四)原子吸收分光光度法：第106页 分析方法-标准曲线法 配制一组含有不一样浓度被测元素标准溶液，在与试样测定完全相同条件下，按浓度由低到高次序测定吸光度值。绘制吸光度对浓度校准曲线。 测定试样吸光度，在校准曲线上求出被测元素含量。分析方法第107页 ：供试液+标准限量待测元素 ：供

27、试液 先将液喷入火焰 读数a； 再将液喷入火焰 读数b。 要求b(a-b)为合格， 此法可消除背景对检测影响。基本操作第108页光源原子化器单色器-检测器信号处理系统 由光源发出光，经过原子化器产生被测元素基态原子层，经单色器分光进入检测器，检测器将光强度改变转变为电信号改变，并经信号处理系统计算出测量结果。仪器结构第109页 光源作用：提供待测元素特征波长光。光强应足够大，有良好稳定性，使用寿命长。空心阴极灯是符合上述要求理想光源，应用最广 空心阴极灯：一个阳极：钨棒 一个空心圆柱形阴极：待测元素高纯金属或合金 一个带有石英窗玻璃管，管内充入低压惰性气体仪器结构第110页技术指标第111页T

28、AS-990 原子吸收分光光度计高度自动化可扩展火焰自动进样器，石墨炉自动进样器。先进横向加热石墨炉技术质量流量计控制燃气流量完善安全系统仪器介绍第112页五、色谱法TLCGCHPLC纸色谱吸附、分配、离子交换、排阻差异第113页第114页第115页(一)纸色谱法 通常测极性较大药品杂质/放射性药品中杂质 缺点：扩散时间长、斑点呈扩散状、展开剂受限等，故应用不广泛。第116页(二)薄层色谱法 测有机药品中与主药亲密关系原料、中间体、副产物、分解产物等。此法简便、快捷、灵敏，常定性分析。第117页Rf第118页第119页(三)：含量分析（含杂质检验）第120页色谱图中各字母表示含义：E/mV 进

29、 空 样 气 峰 h/2 h 0 tm t R t R =t R - tm b第121页tm ： 死时间tR ： 保留时间tR： 调整保留时间h ： 峰高Wb ： 峰宽Wh/2 ：半峰宽第122页Agilent1100高效液相色谱仪第123页仪器结构第124页1、 高压输液泵用于输送流动相，因为色谱柱很细、为了取得高柱效而使用粒度很小固定相（10m）、流动液扩散系数远小于气体，故液体流动相高速经过时，液体流动时阻力很大，必须要有很高柱前压力。 压力：150350105 Pa，高压、高速是高效液相色谱特点之一。 流量稳定（影响重现性及分析精度）、流速可调 应含有压力平稳、脉冲小、耐腐蚀等特征第1

30、25页外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不一样极性溶剂按一定百分比送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度: 一台高压泵, 经过百分比调整阀,将两种或各种不一样极性溶剂按一定百分比抽入高压泵中混合。 2、梯度淋洗装置第126页注射器进样装置：微量进样器刺过装有弹性隔膜进样器，针尖直达固定相上端。 缺点：不能承受高压，须停流进样；无法取得准确保留时间高压定量进样阀：流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压六通阀进样装置，其结构如图所表示： 优点：进样准确，重现性好，适于定量分析3、进样装置第127页 柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提升柱效。装柱方法：有干法和湿法两种，按粒度20m划分，湿法装柱又称匀浆法。4、分离装置第128页紫外检测器: 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 作用原理：被分析试