过敏原检测方法方案

1、过敏性疾病与临床检测 河南省人民医院呼吸科 王思勤 9月7日第1页/10/10Name of presentation2临床常见过敏性疾病有过敏性鼻炎、哮喘、荨麻疹、湿疹、食物过敏及过敏性休克等。近年来，过敏性疾病发病率呈上升趋势，国内医学界对这种疾病日益重视，其试验室诊疗也得到充分发展。第2页过敏性疾病研究历史20世纪人们用动物抗血清治疗烈性传染病时发觉 “血清病”19奥地利医生Clemens von Pirquet发表“Allersie”(变态反应)一文，开拓了变态反应临床和试验研究新领域1963年Gell及Coombs依据变态反应病机理和特点，将其分为四型1966年石坂夫妇发觉了速发型变

2、态反应中IgE抗体1967年Johansson从骨髓瘤病人中分离到纯化IgE并进行了其分子结构研究第3页第4页通常过敏性疾病是由IgE介导I 型变态反应所包括疾病也有例外，比如一些药品（如多粘菌素、吗啡、一些造影剂或阿斯匹林）引发过敏性休克。IgE第5页型变态反应特点是反应快速、强烈、消退亦快，通常不遗留组织损伤，也称为速发型超敏反应有显著个体差异及时令性。好发于呼吸、消化、皮肤等系统。特征性病理改变以水肿，分泌物增多，平滑肌痉挛，嗜酸细胞增多为主第6页过敏性疾病触发原因 -过敏原（变应原）第7页过敏性疾病常见过敏原包含：药品（如引发过敏性休克青霉素类、多粘菌素、吗啡、一些造影剂或阿斯匹林）粉

3、尘螨、真菌（如曲霉属和青霉属霉菌、以及交链孢霉和枝孢霉等）花粉（包含蒿属、豚草、树、牧草和杂草花粉）、其它吸入过敏原（如引发哮喘蚕丝、皮毛、羽毛、屋尘）食物（如引发食物过敏牛奶、鸡蛋、花生、豆类、坚果、鱼、虾、肉类、贝类和谷物）化工材料（如造成接触性皮炎油漆、甲醛、乳胶、香料和染料等）第8页过敏性疾病临床诊疗临床症状、病史体检及临床试验试验室检验第9页父母双方都有变态反应病者，或父母一方有变态反应者，子代患变态反应机率较高父母双方均无变态反应病者，子代发病机率少，一旦发病，临床表现较轻，连续时间较短过敏发生与后天环境关系一样非常亲密，变态反应临床表现并不一定符合遗传规律。过敏体质是造成变态反应

4、内因第10页过敏进程食物过敏和特应性皮炎在出生早期发病率较高，而呼吸道过敏性疾病在儿童期发病率较高。伴伴随儿童年纪增加，过敏性疾病表现会发生阶段性改变，各系统次序出现不一样过敏症状，此现象被称为“过敏进程”第11页过敏性疾病临床症状以一个经典次序 出现在儿童期，并连续多年自然进程过敏进程Eugene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME ; 28(2).第12页Progression of the allergic marchEugene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME ; 28(2).第

5、13页明确过敏原，阻止过敏进程 Eugene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME ; 28(2).儿童早期，明确过敏原，进而躲避过敏原，可阻止过敏进程，改进患儿生活质量第14页特应性变应原及可能诱因回避是治疗基本标准怎样明确过敏性疾病过敏原？第15页过敏性疾病诊疗详细病史体检及临床试验第16页家族过敏史既往过敏史既往发生过敏时临床表现季节和室内/外改变疑似过敏原种类、接触频率、接触量、接触时间生活环境、工作环境、精神压力影响其它原因问询病史第17页体内试验贴斑试验（patch test ）点刺试验（prick test ）或挑刺试验（punc

6、ture test ）皮内试验（intradermal test 或 intracutaneous test ）眼结膜试验（conjunctiva test） 鼻粘膜激发试验（nasal mucosa provocation test）或抗原鼻内滴入试验（灌输测试）第18页舌下试验（sublingual test ） G.Pfeiffer 数十年一直用此法进行诊疗食物激发试验（food provocation test ） ，亦称为白细胞降低指数试验第19页其它检验影像学诊疗：包含胸部透视和摄片、支气管造影、鼻窦X线摄影、胃肠造影、B超、CT、核磁共振等。治疗性诊疗：一些病例经各种检验仍无法确

7、认时，可使用对变态反应有良效药品（如肾上腺素、2 受体兴奋剂、抗组织胺类药品及肾上腺皮质激素类药品等），进行试探性治疗。第20页特异性IgE测定有时也称为“过敏原测定”特异性IgE检测主要是酶免疫分析依据标识酶指示底物不一样分为：荧光酶免疫分析（如ImmunoCAP）、发光酶免疫分析（如Immulite和Access）酶联免疫吸附剂测定（ELISA）。第21页体内试验和体外试验比较第22页 皮肤试验结果解释假如病史提醒敏感性 还有皮肤试验结果阳性 然后与抗原相关可能性极强假如病史不提醒敏感性 皮肤试验结果阳性 在高强度自然暴露中观察患者病史提醒敏感性 皮肤试验结果阴性 1 回顾患者用药情况，抗

8、组胺、抑郁药 2回顾其它引发假阴性试验原因如： 劣质试验材料和技术不恰当 3在高强度自然暴露中观察患者 4 进行激发试验（极少做） 帕特深 变态反应性疾病 人民卫生出版社 第23页sIgE 体外检测和皮试比较 不受患者皮肤条件影响 不受患者药品治疗影响 不受操作者技术影响 符合WHO标准第24页ImmunoCAP 全自动 、体外过敏原特异性IgE检测、全定量血液测定检测原理：荧光酶联免疫分析法 FEIA荧光酶底物比显色底物灵敏度高10-1000 倍。第25页ImmunoCAP固相载体抗原吸附能力是纸片法3倍；是试管法150倍。第26页ImmunoCAPTM全方面检测项目总IgE 特异性IgE嗜

9、酸性粒细胞阳离子蛋白 ECP（评定气道炎症状态） IgG & IgG4（评价特异性免疫治疗反应）类胰蛋白酶（严重过敏反应标识物）本身免疫性疾病诊疗 过筛试验 单价S-IgE检测 多价S-IgE检测 组分过敏原诊疗第27页总IgE（Total IgE )IgE是介导 I 型变态反应抗体，血清IgE水平升高提醒机体可能患有变态反应性疾病。不过，总IgE不一定是过敏， 过敏者总IgE也不一定高，过敏是否主要取决于sIgE存在。影响总IgE原因 遗传、年纪、性别、种族 吸烟、寄生虫感染测定患者血清中总IgE抗体含量第28页特异性IgE（Specific IgE, SIgE）假如对某种过敏原过敏，血清中

10、便存在针对该过敏原S-IgE 。 单价S-IgE检测 多价S-IgE检测 过筛试验 常见单价S-IgE d1 户尘螨 d2 粉尘螨 i6 蟑 螂 f1 鸡蛋白 f2 牛 奶 常见多价S-IgE mx1（m1,m2,m3,m6） mx2（m1,m2,m3,m5,m6,m8） hx2 （h2,d1,d2,i6） 过筛试验吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop） 食物过敏原过筛试验（Fx5） 儿童吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop Infant）第29页草类花粉： w6（艾蒿） w22（葎草）树木花粉： t11（梧桐）螨类： d1（屋尘螨） d2（粉尘螨）微生物： m6（交链孢霉）动物皮毛：

11、 e1（猫毛皮屑）食物： f1（蛋白） f2（牛奶）屋尘： h1昆虫/毒液：i6（蟑螂）药品： c1（青霉素G）职业性过敏原等：k82（乳胶）超出600种过敏原和80种以上组分过敏原第30页特异性IgE（sIgE）结果判断检测范围：0.35 100 kUA/l高灵敏度：89%高特异性：91% 定量结果分级标准及临床意义：0级 100 尤其严重之过敏第31页全定量检测特异性IgEImmunoCAPL. Soderstrom, G. Lilja, M. P. Borres, and C. Nilsson。Allergy ; 66: 10581064.第32页过筛试验 吸入性过敏原过筛试验（Phad

12、iatop） 食物过敏原过筛试验（Fx5） 儿童吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop Infant）第33页Phadiatop吸入性过敏原过筛试验 含有95%常见吸入性过敏原 筛查是否吸入性变应原过敏 临床准确率 90% 21项研究，超出2700个病例 灵敏度91% 特异度93% 准确率92%Reference: Eriksson NE. Allergy 1990;45:285-292 Crobach M.J. et al. Allergy 1994;49:170-176第34页 包含6种最常见食物变应原 鸡蛋白、牛奶、小麦、花生、大豆、鱼 检测结果直接、客观 高灵敏度：89 高特异度：9

13、6Fx5食物过敏原过筛试验第35页怎样过筛过敏性疾病 推荐检测组合 TPF： T-IgE + Phadiatop + Fx5第36页过敏原检测流程临床病史Phadiatop阳性螨、宠物、真菌系列三个花粉系列IgE检测T-IgE+Phadiatop+fx5第37页过敏原检测流程临床病史fx5阳性分别测定单价特异性IgE食谱分析T-IgE+Phadiatop+fx5第38页ImmunoCAPTM系统 体外过敏原诊疗金标准 检测结果真实、可靠，重复性好；为临床提供客观试验室指标 灵敏度高，特异性好；降低漏诊、误诊 全自动化，降低试验工作量，提升检测效率 检测结果全定量，指导临床脱敏治疗和儿童早期诊疗

14、 完善检测项目，600各种过敏原和80各种组分过敏原，充分满足临床和科研需要 第39页Diagnosis and Identification of Causative AllergensConfirmation of allergy and identification of causative allergens are crucial to correctly manage allergic diseasesPrecise diagnosis allows the implementation of therapies oriented to the etiologic factors

15、of allergic diseases, such as environmental measures and immunotherapy WAO White Book on Allergy-: Executive Summary第40页Diagnosis begins with a detailed medical history and physical examination.The identification of a temporal association between symptoms and allergen exposure constitutes the basis

16、for further testing第41页Clinical suspicion is confirmed by means of investigation of IgE antibodies in vivo (skin tests) or in vitro.Skin tests should include relevant llergens and the use of standardized allergen extracts.In vitro testing is especially useful when skin test results do not correlate

17、with the history or cannot be performed.第42页In vitro tests can be applied to “probability of disease” prediction in food allergy.There is a need for increased accessibility to allergy diagnosis and therapies and improved diagnostic methodologies that can substitute in vivo provocation tests for drug

18、 and food allergy.第43页The use of unproven tests increases the unnecessary costs of allergy diagnosis.使用未经证实测试增加了无须要成本过敏原诊疗第44页IgE与过敏性疾病IgE是血清中含量最少一类免疫球蛋白，占血清总量0001%。致敏阶断，过敏原作用于机体，机体产生过敏原特异性IgE；当机体再次接触到过敏原时，过敏原特异性IgE抗体与过敏原结合，而且与肥大细胞、嗜碱性粒细胞等结合，使其释放组胺等生物活性物质，进而产生过敏症状。第45页所以，特异性IgE介导了过敏反应发生只有特异性IgE检测才能认

19、为是过敏原体外诊疗IgE检验含有高度抗原特异性，如出现阳性反应，表示对该物质过敏第46页 体外过敏原测定方法及检测系统非IgE检测 生物共振（百康，摩拉）过敏原特异性IgE检测 荧光酶联免疫法（ImmunoCAP） 液相酶联免疫法ELISA（ Adaltis） 酶联免疫印迹法（Allergyscreen） 酶联免疫捕捉法（Dr. Fooke）第47页非IgE检测生物共振 百康生物共振技术，经过红外扫描检测过敏原不是直接检测体内IgE抗体检测结果为定性据称可检测上百种过敏原检测结果未经过WHO标准案不受学术支持过敏原检测产品第48页四种检测仪器性能比较 -检测原理与参数ImmunoCAPAdal

20、tis敏筛Dr.Fooke备注检测原理荧光酶联免疫法液相酶联免疫法酶联免疫印迹法酶联免疫捕捉法？检测底物荧光底物显色底物显色底物显色底物荧光法灵敏度是显色法101000倍抗原载体ImmunoCAP专利载体微孔板（试管法）硝酸纤维素膜（纸片法）微孔板（试管法）ImmunoCAP抗原吸附能力是纸片法3倍，试管法150倍检测项目6大项，包含T-IgE、s-IgE 、ECP 、IgG4等T-IgE、s-IgET-IgE、s-IgET-IgE、s-IgE 、IgGImmunoCAP拥有完善过敏原相关检测项目过筛试验Phadiatop 、FX5 、Phadiatopinfant等无无无过筛试验极大方便临床实际使用抗原种类近6