艾滋病检测技术及诊断

1、艾滋病检测技术及诊断艾滋病检测技术及诊断第1页检测依据和行业标准艾滋病检测技术及诊断第2页样品采集和处理样品种类及用途血液标本采集抗凝剂选择样品保留样品运输艾滋病检测技术及诊断第3页样品种类及用途 全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液及干血斑（ DBS ）样品可用于HIV抗体检测。全血、血清、血浆、病毒培养上清液可用于HIV抗原检测。抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。血浆、DBS可用于HIV-1病毒载量、基因型和耐药检测。淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（PBMC）及全血可用于HIV核酸定性与定量、基因型检测和HIV-1分离培养。艾滋病检测技术及诊断第4页血液标本采集抗凝全血

2、：消毒局部皮肤，用有抗凝剂真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂试管中，轻轻颠倒混匀68次，备用。血浆：将采集抗凝全血15003000r/min离心15分钟，上层即为血浆，吸出置于适当容器中，备用。血清：依据需要，用不含抗凝剂真空采血管抽取510ml静脉血，或一次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂试管中，室温下自然放置12小时，待血液凝固、血块收缩后再用15003000r/min离心15分钟，吸出血清，置于适当容器中，备用。艾滋病检测技术及诊断第5页抗凝剂选择 CD4+和CD8+T淋巴细胞检测：EDTA、肝素、枸橼酸钠病毒分离、核酸检测： EDTA、枸橼酸钠艾滋

3、病检测技术及诊断第6页样品保留 抗体检测：血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测可存放于28，一周以上应存放于-20 以下。核酸检测：48h内分离血浆，4天内检测可存放于4 ,3个月内存放于-20 以下，3个月以上-70 以下保留。CD4+T淋巴细胞检测：室温保留，时间不超出24h。假如用CD45设门，样品保留不超出72h。艾滋病检测技术及诊断第7页样品保留筛查阳性样品应及时进行补充试验，筛查阴性样品，可依据详细需要决定保留时间，提议最少保留1个月。特殊用途或专题项目标样品依据详细要求确定保留时间。补充试验阳性样品按照国家生物样品管理相关要求执行。艾滋病检测技术及诊断第8页样品运输标本筛查阳性

4、（复检需用三代试剂），送检单位必须联络受检者，在仔细核实受检者身份等信息后重新采集1份全血。将筛查阳性血清与重新采集全血共2份样品一同送至本中心。要求送检血清量不得少于0.5ml，送检单位对重新采集全血不得做任何处理。标本标识须用正楷字标明受检者姓名、性别和采集时间（年/月/日）。筛查阳性血清应装于1.5ml冻存管内，假如没有也可装于真空采血管内，禁止使用除此之外其它容器。艾滋病检测技术及诊断第9页样品运输包装要求：应采取WHO提出三级包装系统 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖试管内，试管上应有显著标识，标明样品编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管周围应垫有缓冲吸水材料，以免

5、碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，能够装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖容器内，容器材料要易于消毒处理。 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。艾滋病检测技术及诊断第10页样品运输用于抗体检测血清和血浆样品应在冻存条件下运输，用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定样品应在室温下（1825 ）运输。用于病毒载量检测样品应在-20 以下运输。DBS和尿液样品应在室温下运输。艾滋病检测技术及诊断第11页样品运输艾滋病检测技术及诊断第12页样品运输带螺帽、垫圈血清冻存管

6、。艾滋病检测技术及诊断第13页样品运输禁止使用EP管艾滋病检测技术及诊断第14页样品运输禁止使用内旋盖冻存管艾滋病检测技术及诊断第15页样品运输在冻存管外套带盖第二层容器艾滋病检测技术及诊断第16页样品运输置于带冰袋第三层容器中艾滋病检测技术及诊断第17页样品运输 HIV抗体筛查检测汇报填写筛查阳性标本应填写HIV抗体筛查检测汇报，加盖公章后送检。汇报单不得有空项 ，必须按规范要求认真完成筛查、复检（第一次）、复检（第二次）三次试验。在检测结果空白处填写送检样品S/CO值或发光值。HIV筛查试验室筛查不能使用快速检测方法。两次复检需使用三代试剂，三代试剂检测结果阳性方可送检。艾滋病检测技术及诊

7、断第18页艾滋病检测技术及诊断第19页HIV抗体检测HIV抗体检测试验室要求HIV抗体检测目标和关键点常规HIV抗体检测方法结果汇报质量控制艾滋病检测技术及诊断第20页HIV抗体检测 HIV抗体检测试验室要求应符合国家对试验室生物安全相关要求试验室质量控制按全国艾滋病检测技术规范（）相关章节要求执行艾滋病检测技术及诊断第21页HIV抗体检测 HIV抗体检测目标和关键点目标：1、HIV抗体检测可用于诊疗、血液筛查、监测等。 2、以诊疗为目标检测是为了确定个体HIV感染状 况，包含临床检测、自愿咨询检测、依据特殊需 要进行体检等。 3、以血液筛查为目标检测是为了预防输血传输 HIV，包含献血员筛查

8、和原料血浆筛查。 4、以监测为目标检测是为了了解不一样人群HIV感 染率及其改变趋势，包含高危人群、重点人群和 普通人群。 艾滋病检测技术及诊断第22页HIV抗体检测关键点：1、依据目标选择检测方法及检测策略。 2、严格恪守试验室SOP。 3、结果判定以试剂盒说明书为标准。 4、筛查试验有反应，须做补充试验。补充试验包 括抗体确证试验（WB、RIBA/LIA）和核酸 试验（定性和定量）。 艾滋病检测技术及诊断第23页HIV抗体检测常规HIV抗体检测方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA） 快速检测法（RT）：金标法、硒标法、明胶颗粒凝集 试验（PA） 蛋白

9、免疫印迹试验（WB）、条带/线性免疫试验（RIBA /LIA）筛查方法抗体确证试验艾滋病检测技术及诊断第24页HIV抗体检测 结果汇报筛查汇报：筛查试验无反应汇报为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应汇报为“HIV抗体阴性”，复检检测都有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”（本中心只提供WB试验），汇报为“HIV感染待确定”，不能出具阳性汇报。确证汇报：符合HIV-1阳性判断标准，汇报“HIV-1抗体阳性”，符合HIV-2抗体阳性判断标准，汇报“HIV-2抗体阳性”；符合阴性判断标准，汇报“HIV抗体阴性”；符合不确定判定标准，汇报“HIV抗体不确定”，备注中注

10、明“24周后复检”。艾滋病检测技术及诊断第25页质量控制酶免或发光法抗体检测室内质量控制快速法抗体检测质控艾滋病检测技术及诊断第26页质量控制 酶免或发光法抗体检测室内质量控制试剂盒内部对照：试剂盒内提供阴阳性对照血清，用于判断每次试验有效性，但不能作为室内质控品用。室内质控品（外部对照）： 1、为试剂盒组分外部质控品，是为监控检测重复性而设置，质控品定值必须为弱阳性。 2、可判断该批样品检测有效性，所以，每次试验必须含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。艾滋病检测技术及诊断第27页质量控制Levey-Jennings质控图质控图参数：算术平均值（X）、标准差（S）、变异系数（CV）及控制限

11、。控制规则：告警（12S）、失控（13S）艾滋病检测技术及诊断第28页质量控制1、告警（12S）：当外部对照S/CO值超出2S范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否能够继续检测需要深入观察。警告:12S规则违反艾滋病检测技术及诊断第29页质量控制2、失控（13S）：当外部对照S/CO值超出3S范围时，系统处于失控状态，此次结果不能被接收。失控:13S规则违反艾滋病检测技术及诊断第30页质量控制质控图分析及失控处理 试验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当出现失控时，必须找出发生问题原因，找出处理问题方法，并消除原因。艾滋病检测技术及诊断第31页质量控制 快速检测质控试剂内对照 在质控窗口

12、内出现质控带，该质控带是试剂自带内部过程质控，说明试验操作全部完成而且试验所用材料处于工作状态。清洁检测区背景是内部阴性过程质控。如试验完成后未展现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品必须重检。艾滋病检测技术及诊断第32页试验室质量控制室内质控品对照1、可采取商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性 样品和阴性样品。不能使用酶联试验外部质控品。 更换试剂批号 更换检测人员2、以下情况需做质量控制 更换包装 更换厂家 3、提议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；假如日检测量大于50份样品，最少应做2次质控。艾滋病检测技术及诊断第33页试验室检测策略窗口期：从HIV感染人体

13、到感染者血清中抗体、抗原或核酸等感染标志物能被检测出之前时期。（在窗口期内血液已经有感染性。现有诊疗技术检测HIV抗体、抗原和核酸窗口期分别为感染后3周、2周和1周左右。）HIV抗体筛查试验：初步了解机体血液或体液中有没有HIV 抗体检测方法，也包含同时检测抗体和抗原方法。HIV补充试验：在取得筛查试验结果后，为了准确判断，继续检测机体血液或体液中有没有HIV抗体或核酸方法，包含抗体确证试验和核酸试验。艾滋病检测技术及诊断第34页试验室检测策略艾滋病检测技术及诊断第35页试验室检测策略使用抗体检测试剂筛查检测流程（三代试剂）试剂1有反应无反应两种试剂都有反应一有，一无均无反应补充试验汇报HIV

14、抗体阴性艾滋病检测技术及诊断第36页试验室检测策略使用抗原抗体检测试剂筛查流程（四代试剂）抗原抗体检测试剂有反应抗体检测都有反应一有，一无补充试验均无反应HIV-1核酸试验或P24抗原试验或24周后随访无反应汇报HIV抗体阴性，P24抗原阴性艾滋病检测技术及诊断第37页HIV感染/AIDS诊疗诊疗标准 以试验室检测为依据，结合临床表现和参考流行病学资料综合进行。HIV抗体和病原学检测是确诊HIV感染依据；流行病学史是诊疗急性期和婴幼儿HIV感染主要参考；CD4+T淋巴细胞检测和临床表现是HIV感染分期诊疗主要依据；AIDS指征性疾病是AIDS诊疗主要依据。艾滋病检测技术及诊断第38页HIV感染

15、/AIDS诊疗HIV感染诊疗成人、青少年及18个月以上儿童符合以下一项即可诊疗：HIV抗体筛查试验有反应和HIV抗体确证试验阳性；HIV抗体筛查试验有反应和核酸定性试验阳性；HIV抗体筛查试验有反应和核酸定量试验5000cps/ml；有流行病学史或艾滋病相关临床表现，两次HIV核酸检测均为阳性；HIV分离试验阳性。艾滋病检测技术及诊断第39页HIV感染/AIDS诊疗18个月龄及以下儿童符合以下一项即可诊疗：为HIV感染母亲所生和两次HIV核酸检测均为阳性（第二次检测需在出生4周后采样进行）；有医源性暴露史，HIV分离试验结果阳性或两次HIV核酸检测均为阳性；为HIV感染母亲所生和HIV分离试验阳性。艾滋病检测技术及诊断第40页HIV感染/AIDS诊疗AIDS诊疗成人及1