呼吸道九联检病原体检测及其临床意义

1、呼吸道九联检病原体检测及其临床意义呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第1页呼吸道感染呼吸道感染是指病原体感染人体鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统分为上呼吸道感染和下呼吸道感染呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第2页上呼吸道感染常见急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎症概称，是呼吸道最常见一个传染病常见病因为病毒，少数由细菌引发。患者不分年纪、性别、职业和地域。不但含有较强传染性，而且可引发严重并发症呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第3页下呼吸道感染包含急性气管/支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引发，其防治应遵照预防为主、准确诊疗、及

2、时治疗标准，治疗时必须明确引发感染病原体以选择有效抗生素呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第4页呼吸道病原体常见呼吸道病原体主要有病毒、细菌、支原体、衣原体和立克次体等据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引发一个病原体可引发各种临床症状，同一临床表现可由各种病原体引发呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第5页呼吸道病原体感染概况一、经典“致病菌” 细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等 症状：经典，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，普通都伴有发烧，或有脓血痰 病史：悠久，古代“瘟疫”很多细菌性肺炎 重症致死性肺炎很多是细菌性 上世纪50年代以前肺炎90%以上为细菌性肺炎，现在报

3、道约在40%左右 肺炎链球菌大约占在60%呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第6页呼吸道病原体感染概况二、非经典病原体进展、开放概念，始用于20世纪30年代末，60年代首次发觉了非经典病原体肺炎支原体泛指各种能引发肺炎、临床表现与经典肺炎不一样各种病原体（广义）临床症状不经典，差异大在CAP中感染百分比逐年增加，据报道大约占40-60%，逐步引发各国医疗工作者注意呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第7页（一）最常见非经典病原体肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌等（狭义非经典病原体）感染百分比高，超出“非典”50%临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状较常见显著，尤其军团菌感染，表现相对较重，多脏

4、器受累显著。可有高热、耳鸣、相对缓脉、血尿、腹痛、腹泻、肝酶升高、电解质紊乱、精神神经症状等-内酰胺类 （青霉素类、头孢类）、氨基糖苷类（链霉素）等药品无效治疗：呼吸喹诺酮类、大环内酯类呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第8页（二）病毒类流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、禽流感病毒等季节性或区域性流行临床症状：干咳为主，少痰或无痰、呼吸困难，低氧血症治疗：主要依靠对症支持治疗。早期抗病毒治疗可能效果很好。预后取决于病毒类型和宿主对病毒反应呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第9页（三）真菌性肺炎念珠菌，曲菌，新型隐球菌，放线菌，组织胞浆菌，毛霉菌属等除组织胞浆菌为原发吸入性

5、感染外，多数为条件致病多发生在免疫低下患者和长时间接收广谱抗生素治疗患者白色念珠菌肺炎呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第10页 小区取得性肺炎小区取得性肺炎（community-acquired pneumonia, CAP）是指在非医院环境中受感染因子侵袭所发生肺部炎症，以及住院后48小时内或特殊病原菌在潜伏期10天内所患肺炎，又称院外取得性肺炎。这种肺炎之所以被叫做”小区取得性肺炎”是因为它很轻易从小区中一个组员传输到另一个。CAP发病率为4.7%-11.6%，其中22%-51%CAP需住院治疗；住院CAP死亡率7%，重症CAP死亡率29%。（数据来自西班牙）呼吸道九联检病原体检测及其临

6、床意义第11页 小区取得性肺炎 美国：感染率第一位疾病美国：每年560万感染肺炎，感染率5-10人/1000人/年WHO：第二大死因，仅次于心血管疾病中国：第五大死因中国：儿童死亡第一病因 呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第12页各病原体在CAP中感染率各国小区取得性肺炎指南对非经典病原体重视情况肺炎诊疗与治疗研究进展数据起源：重视非经典病原体在CAP致病中作用要重视非经典病原体在小儿呼吸道疾病中致病作用等呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第13页呼吸道病原菌合并感染分析119例小儿肺炎细菌感染97例，细菌感染及肺炎支原体同时感染19例。 -检验医学与临床年12月第6卷第23期在SARS发病

7、前阶段，合并MP感染阳性率为693 (3956) ；发病后阶段，合并MP感染阳性率为l86 (843） -Joumal of Tropical Medicine Vo13 No3 SepMpn和Cpn合并阳性有27例占总阳性数450 -中国优生与遗传杂志年第9卷第3期9例(12)患儿MP-IgM 和CpnIgM 同时阳性； -世界感染杂志年第6卷第4期此次调查同时检测了8种感染呼吸道常见病毒，结果提醒Mp、Cp多混合有病毒感染。 -中国人兽共患病杂志：1002-2694()030269-02呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第14页小区取得性肺炎青霉素问世前：CAP80%以上是由肺炎链球菌所致

8、。1928年英国科学家弗莱明发觉青霉素： 拯救了千百万肺炎患者生命，肺炎链球菌虽仍是CAP最常见病原体，但百分比已显著下降。 非经典病原体：如：肺炎支原体、肺炎衣原体、病毒、嗜肺军团菌等，显著上升! 在非经典病原体感染中， 支原体肺炎 病毒性肺炎 尤其最为常见。呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第15页非经典呼吸道病原体这些病原体变异快，传输广，因为不易形成长久免疫力而难以预防和控制 流感病毒 副流感病毒病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒 呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第16页呼吸道病原体检测现有主要方法：病毒分离培养抗原检测抗体检测分子生物学方法等呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第17页检测

9、方法比较检测方法优点缺点病毒分离培养特异性高，金标准培养条件要求高、灵敏度低，标本中病原体量少时，易致假阴性。抗原检测直接免疫荧光法简便、快速、灵敏度和特异性均较高且可用于疾病早期诊疗需要特异性抗体、荧光显微镜，易受采样限制抗体检测 间接免疫荧光法灵敏度、特异性较高对疾病早期诊疗没有太大帮助酶联免疫吸附法较快速，批量筛查特异性不高，假阳性多分子生物学方法灵敏度和特异性均很高操作繁琐，价格昂贵呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第18页采样抗原检测拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度二分之一，普通针对两周岁以下儿童，伸入距离约为拭子绒毛头长度两倍拭子伸入后要

10、轻轻捻动拭子转3圈。取样后在一小时之内洗脱到生理盐水中，12小时内送检呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第19页抗原检测采样呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第20页采样对结果影响较大非经典感染多为干咳，无痰/少痰阳性率低（标本问题，病毒颗粒小）抗原在体内存在时间短抗原检测劣势呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第21页采样抗体检测呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第22页 检测样本要求 本试剂盒仅适合用于检测人血清。其血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集。提议使用消毒或无菌技术，以保持样本完整性。血清样本采集后如不在8小时内检测应28 C冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20C）保留。不要重复

11、冻融以预防免疫球蛋白滴度降低，尤其是IgM。不要使用高血脂或污染血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。 呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第23页九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第24页九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第25页常见检测九种非经典病原体嗜肺军团菌肺炎支原体Q热立克次体肺炎衣原体腺病毒呼吸道合胞病毒流感病毒(甲型、乙型)副流感病毒呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第26页嗜肺军团菌广泛分布于天然淡水或人工水域，革兰氏阴性短杆菌易感人群：通常为老年人、儿童、吸烟者、等免疫功效低下者。流行：夏秋季节。尤其是在装有中

12、央空调封闭空间内易暴发。军团菌肺炎潜伏期为2-10天，症状：发冷、不适、肌痛、头晕、头痛，并有烦躁、呼吸困难、胸痛。IgM抗体在感染后1周左右出现，并可连续存在3-6个月。我国各省市每年都有病例汇报。阳性率2%-5%呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第27页肺炎支原体 肺炎支原体，是介于病毒与细菌之间一个没有细胞壁病原体经14-21天潜伏期开始发病，患者有头痛、乏力、无力干咳等症状IgM抗体普通在感染后1周出现，3-4周到达高峰，可连续存在3-6个月学龄儿童、婴幼儿、青少年患病较多，儿童中最经典综合症是气管支气管炎，许多成年感染者是无临床症状小区取得性肺炎患者中由肺炎支原体引发达40%冬季较多

13、，地域性流行呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第28页Q热立克次体Q热立克次体，是介于最小细菌和病毒之间一类独特严格在活细胞内寄生原核细胞型微生物 病原体储存于动物中，传染源主要是受染牛，羊等家畜，在动物间以蜱传输。动物感染后多无症状，但乳汁，尿，粪中可长久带有病原体。对人感染力尤其强，是立克次体中唯一可不借助于媒介节肢动物而经过感染动物排泄物污染环境后，经过接触气溶胶感染呼吸道。消化道等路径感染。大个别病例发于春天或是初夏。其流行行分布全世界，我国吉林、四川、云南、新疆、西藏、广西、福建、贵州等十几个省市、自治区都有本病流行。其潜伏期1239天，平均18天。IgM抗体普通在感染后2周左右出现

14、，4-8周达高峰，可连续存在3-4个月。症状主要是高热，猛烈头痛，寒颤，严重乏力，肌痛，且常有胸痛， 体温升高。阳性率1%-2%呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第29页肺炎衣原体肺炎衣原体是一个比细菌小但比病毒大生物，专性细胞内寄生感染方式：人与人可经过呼吸道分泌物传输8岁以上儿童易被感染，尤其是人群聚集处。肺炎衣原体肺炎占小区取得性肺炎百分比10%左右多数起病迟缓，潜伏期30天左右，IgM抗体在发病2-3周出现，普通来说可连续存在2-6个月。临床开始出现流感样症状如咽痛、头痛、发烧。阳性率普通在1-5%左右呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第30页腺病毒腺病毒是一个无外壳双链DNA病毒，其

15、很多与人类上、下呼吸道感染亲密相关。 腺病毒肺炎多发生于724月婴幼儿。起病时潜伏期2-14天，IgM抗体在发病1周左右出现，可连续存在2-3个月。冬春两季常见，腺病毒肺炎约占病毒性肺炎20%30%。阳性率：15%-25%，居病毒性肺炎第二位；呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第31页呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是RNA病毒； 呼吸道合胞病毒（RSV）是婴幼儿下呼吸道感染(包含毛细支气管炎和肺炎)最主要病因之一，可能是致命性；在年长儿和成年人中也非经常见。在冬季暴发流行。呼吸道合胞病毒感染潜伏期为3-7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可连续存在23个月；占病毒性肺炎25%-35%左右；位居儿

16、童病毒性肺炎第一位；呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第32页流感病毒流行性感冒病毒是一个造成人类及动物患流行性感冒RNA病毒，呈球形；依据其核蛋白抗原性能够分为三类:甲型、乙型、丙型该病毒呈季节性周期性流行暴发（12月-4月） 甲型流感流行每年都会发生 乙型流感流行只在每3-6年暴发一次，感染人数超出总人口25%流感病毒潜伏期为1-7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可连续存在2-3个月呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第33页副流感病毒经常引发儿童下呼吸道感染一个病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒，它是单链RNA病毒副流感病毒潜伏期为2-7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可连续存在2-3

17、个月 副流感病毒感染整年均可发生，第1和第2型副流感病毒感染常见于幼儿，局部流行发生于托儿所，儿科病房，小学及其它儿童场所。第3型为地方性流行，传染性强阳性率：10%-20%临床无法做出副流感诊疗，只能经过试验室检测来诊疗呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第34页病原体潜伏期 IgM抗体产生时间病原体潜伏期IgM产生时间Igm存在时间嗜肺军团菌2-10天1周左右3-6个月肺炎支原体14-21天1周左右3-6个月Q热立克次体12-19天2周左右3-4个月肺炎衣原体30天左右2-3周2-6个月腺病毒2-14天1周左右2-3个月呼吸道合胞3-7天1周左右2-3个月流感病毒1-7天1周左右2-3个月副

18、流感2-7天1周左右2-3个月呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第35页抗原抗体检测IgMIgG呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第36页检测原理间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中抗体与吸附在载玻片上抗原发生反应。样本中存在特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标识抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第37页试验步骤1样本稀释：血清标本与PBS按1:1百分比稀释稀释后血清加入吸附剂中，彻底混匀。处理后血清要离心10-15分钟除去沉淀，以防干扰检测呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第38页试

19、验步骤2呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第39页 4.显微镜观察病原体形态或荧光模式嗜肺军团菌杆状肺炎支原体细胞外围荧光模式立克次体球杆状肺炎衣原体球状腺病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）呼吸道合胞病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）甲型流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）乙型流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）副流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第40页 5.结果判读 1）阳性结果：能够观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清1-15%细胞细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时

20、观察到着色合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中全部细菌展现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围展现苹果绿色荧光。呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第41页 2）阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒细胞展现红色。呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第42页嗜肺军团菌阴性：荧光弱、少、不规则呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第43页嗜肺军团菌阳性：荧光密集，且亮度很好，杆状形态呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第44页肺炎支原体阴性：红色细胞周围无或少许荧光，亮度弱呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第45页肺炎支原体

21、阳性：荧光占视野50%以上，亮度好，形态为显著细胞膜或胞浆呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第46页Q热立克次体阴性：荧光弱、少、不规则呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第47页Q热立克次体阳性：荧光亮度强且数量多，形态经典呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第48页肺炎衣原体阴性：荧光弱、少呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第49页肺炎衣原体阳性：荧光密集，且亮度很好呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第50页腺病毒阴性：荧光弱、少呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第51页腺病毒阳性：荧光亮度强且数量多，平均每个视野阳性细胞3-5个呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第52页呼吸道合胞病毒阴性：荧

22、光弱、少呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第53页呼吸道合胞病毒阳性：荧光亮度强且数量多，平均每个视野阳性细胞3-5个呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第54页甲型流感病毒阴性：荧光弱、少呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第55页甲型流感病毒阳性：荧光亮度强且数量多，平均每个视野阳性细胞3-5个呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第56页乙型流感病毒阴性：荧光弱、少呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第57页乙型流感病毒阳性：荧光亮度强且数量多，平均每个视野阳性细胞3-5个呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第58页副流感病毒阴性：荧光弱、少呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第59页副流感病毒阳性：

23、荧光亮度强且数量多，平均每个视野阳性细胞3-5个呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第60页总结1 、 一卡九项，范围更广，不但能够检测五项病毒，而且能够检测肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、Q热立克次体2、检测IgM抗体，利于早期发觉，采取间接免疫荧光法，操作简便，结果快速3、标本为血清标本，轻易采集、轻易保留4、镜下荧光形态清楚，轻易判定5、观察荧光，准确性好6、准确检测出哪种病原体感染，能为临床诊疗、治疗提供强有力帮助呼吸道九联检病原体检测及其临床意义第61页临床问题总结1、查到病毒阳性临床意义大不大？病毒性呼吸道感染虽属于自限性疾病，主要引发上呼吸道疾病，但含有较强传染性，而且可引发严重并发症病毒性呼吸道感染疾病预后取决于病毒类型和宿主对病毒反应临床主要依靠对症支持治疗，早期抗