免疫学实验：沉淀反应(Precipitation)

1、沉淀反应(Precipitation)可溶性抗原与相应抗体结合，在有电解质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见不透明的沉淀物。单向免疫扩散试验(Single immuno- diffusion test):在抗原抗体反应时，只有其中的一种成分发生扩散。 双向免疫扩散试验(Double immuno- diffusion test):抗原和抗体在琼脂内各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线。免疫电泳(Immunoelectrophoresis):将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术。火箭免疫电泳(Rocket Immunoelectrophoresis):将单向免疫扩散和电

2、泳相结合的一种定量检测技术。对流免疫电泳试验(Counter Immunoelectrophoresis):将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。 环状沉淀试验单向免疫琼脂扩散试验Radial immunodiffusion. The patients serum is placed in the wells cut out of the agarose gel. The agarose gel contains antibodies to the test antigen (CRP in this case). The antigen diffuses into the aga

3、rose and forms precipitin rings. The diameter of the rings is directly proportional to the amount of antigen in the serum and is quantified by comparing the size of the ring to that of simultaneously tested standards.双向免疫琼脂扩散试验相应的抗原与抗体在琼脂凝胶板中的相应孔内，分别向周围自由扩散。在抗原和抗体孔之间，扩散的抗原与抗体相遇时发生特异性反应，在浓度比例合适处出现可见的

4、白色沉淀线。根据沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体进行定性分析。双向免疫扩散试验火箭免疫电泳电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场作用下促使样品孔中的抗原向阳极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰。峰的高度与检样中的抗原浓度呈正相关。因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待检抗原的含量。 Diluted plasma is electrophoresed into a gel containing antibody to vWF

5、antigen utilizing the Laurell rocket immunoassay technique. A standard curve is prepared by plotting the height of the rockets formed with known quantities of vWF in normal plasma and comparing to this normal curve the height of the rocket formed using the patients plasma. This assay is designed to

6、detect the presence of vWF protein but cannot differentiate between functional and non-functional protein. The assay is used to help diagnose von Willebrand disease. 免疫电泳试验将蛋白质抗原在琼脂糖凝胶上进行电泳，样品中不同的抗原成分因所带电荷、分子量及构型不同，电泳迁移率各异，而被分离成肉眼不可见的若干区带。停止电泳后，在与电泳方向平行的琼脂槽内加入相应抗体进行双向免疫扩散。分离成区带的各种抗原成分与相应抗体在琼脂中扩散后相遇，

7、在二者比例合适处形成肉眼可见的弧形沉淀线。根据沉淀线的数量、位置和形状，即可对样品中所含成分的种类及其性质进行分析、鉴定。 Serum from a normal control was placed in the top well and the patients undiluted serum was placed in wells 2, 3, 5, and 7, reading down. Wells 4, 6, and 8 contained a 1:5 dilution of the patients serum. The top trough contained antibodie

8、s to whole human serum. The third trough contained antibodies to human IgG; the fifth trough, antibodies to human IgA; and the seventh trough, antibodies to human IgM. The varied positions of the precipitin bands indicate the differences in migration of the proteins in an electric field. 对流免疫电泳在pH8.6的缓冲液中，蛋白质抗原带负电荷向正极泳动；而抗体大部分属于Ig，由于分子量大，暴露的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时受电渗作用的影响向负极泳动(电渗是指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动。琼脂是一种酸性物质，在碱性溶液中带负电荷，而与它接触的溶液带正电荷，因此液体向负极泳动，产生电渗)在抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉淀线。 材料 抗原 (Ag): HBsAg抗体 (Ab):抗HBsAg免疫血