免疫组织化学(傅琦博)-免疫组织化学

1、免 疫 组 织 化 学傅 琦 博引言酶工程是生物工程的重要组成部分，近几十年来，随着研究手段的更新和技术水平的提高，产生了一门以研究酶在细胞内的存在及其动态，以阐明组织细胞的结构和功能为主要内容的科学酶组织化学。酶组织化学是利用酶化学反应的产物可在光学显微镜或电子显微镜下被识别的特性，借以从形态学角度判定酶在组织细胞内的存在的部位的一门技术，其基础是组织化学。它具有将形态学、生物化学和生理学联系起来的特点，在生物学、生物化学、医学生物领域内日益发挥着重要的作用。研究组织细胞内特定酶分布的酶组织化学方法大致分为：（1）利用酶的活性反映的方法；（2）利用抗原抗体反应（免疫应答）证实酶的存在部位的方

2、法。后者也被称之为免疫组织化学。免疫组织织化学概概述免疫组织织化学简简称免疫疫组化，是应用用免疫学学及组织织化学原原理，对对组织切切片或细细胞标本本中的某某些化学学成分，进行原原位的定定性、定定位或定定量的研研究。这这种技术术称为免免疫组织织化学技技术。免免疫组化化是利用用抗体与与抗原的的结合具具有高度度特异性性的特点点，采用用一直的的抗体检检测组织织或细胞胞的抗原原物质，以期确确定组织织或细胞胞是否存存在未知知抗原，并进行行定性、定位或或定量的的研究。抗原与与抗体结结合形成成的免疫疫复合物物是无色色的，故故必须借借助组织织化学方方法，将将抗体抗抗原反应应部位显显示出来来。它的的主要研研究方法

3、法是免疫疫组织染染色法（简称免免疫染色色法），食用该该方法检检测细胞胞内物质质，必须须具备两两个条件件：作为检检测对象象的物质质须具有有抗原性性，能制制作出与与之相应应的特异异、高效效价的抗抗体；在免疫疫反应发发生之前前，目标标物质要要保持抗抗原性，同时还还要保持持在组织织细胞内内的稳定定状态。要检测测抗原，就要用用与之相相应的抗抗体进行行免疫反反应，同同时要用用可视的的标记标标出抗原原或抗体体，采用用这种方方法的免免疫染色色法称为为标识抗抗体法或或标识抗抗原法，常用的的表示抗抗体法有有直接法法、间接接法、补补体结合合法以及及多重染染色法等等。直接接法是标标识要检检出的抗抗原的抗抗体，然然后进

4、行行反应的的方法，其特异异性高，但检出出的敏感感度不如如间接法法，标识识抗体的的食用范范围手局局限。间间接法是是以未标标识的第第一抗体体进行反反应，接接着标识识以第一一抗体为为抗原所所制作的的抗体（即第二二抗体）进行重重叠反应应，间接接的证明明抗原，这种方方法的缺缺点是容容易出现现非特异异性反应应，但敏敏感度较较高，标标识抗体体的用途途也广；补体结结合法是是将间接接法中的的第二抗抗体作为为标识抗抗补体抗抗体食用用；多重重染色法法则是在在同一标标本上检检出多种种抗原物物质的方方法，可可以用反反复进行行的重复复标记的的直接法法，也可可以用酶酶标记的的重复进进行的间间接法。此外，还有后后标识抗抗体的

5、免免疫染色色法，此此法先采采用未标标识的抗抗体进行行反应，反应结结束后，通过免免疫化学学反应或或其他化化学反应应，用适适当的标标记物质质来识别别已与组组织细胞胞内抗原原发生结结合的抗抗体。免疫组织织化学技技术的发发展免疫组织织化学技技术是形形态学研研究领域域一门新新兴方法法学。自自它问世世以来发发展迅猛猛,用“日新月月异”一词形形容它毫毫不过分分。酶标标免疫组组织化学学技术是是由Naakanne 等等人于660 年年代末期期创立的的最早的的免疫酶酶组织化化学技术术,之后Stternnberrgerr 等人人于700 年代代初期便便在此基基础上建建立了非非标记抗抗体酶法法(又称间间接法) 和PA

6、PP 法(过氧化化酶抗过过氧化酶酶法) 。80 年代初初期美籍籍华人HHsu 又建立立了卵白白素生物物素复合合物法(ABCC法) ,自此之之后,免疫金金银染色色法、免免疫电镜镜等技术术相继问问世。880 年年代末期期人们又又发现链链霉菌抗抗生物素素蛋白(或译成成链霉菌菌亲合素素,Stt reeptaaviddin) 与生生物素结结合力极极强,遂用它它标记过过氧化酶酶建立起起了SPP 法,或称LSSAB 法(链霉菌菌亲合素素生物素素过氧化化酶法) 。由由于链霉霉菌亲合合素不与与人组织织中的内内源性生生物素起起非特异异性结合合反应,故背景景染色更更加清晰晰,且敏感感性比AABC 法高48 倍,比P

7、APP 法高高816 倍。进进入900 年代代,免疫组组织化学学又向基基因水平平深入发发展,与分子子生物学学技术的的结合日日益紧密密。如原原位杂交交后信号的放大大与显示示便是采采用了免免疫组织织化学显显色技术术,因而又又可称之之为原位位杂交免免疫组织织化学技技术。而而图象分分析、流流式细胞胞仪的运运用，是是免疫细细胞化学学定量分分析技术术提高到到更精确确的水平平。现就就该技术术的发展展及其应应用作一一概述。1利用用免疫荧荧光标记记技术可可以分辨辨出标记记抗原抗抗体所在在的位置置及其性性质, 并可利利用荧光光定量技技术计算算抗原(或抗体体) 的含含量, 以达到到对定性性、定位位、定量量测定的的目

8、的2 。如黄黄祥瑞等等人(119999) 利利用免疫疫荧光细细胞化学学技术研研究西藏藏环状病病毒细胞胞生物学学特性和和敏感细细胞范围围(CPPE) , 成成功地观观察到该该病毒的的细胞病病变效应应特异荧荧光发生生的部位位、细胞胞数量和和病毒的的形态发发生。辛辛德毕斯斯热是由由辛德毕毕斯病毒毒Sinndbiis VV irrus (SiiN ) 引起起的人兽兽共患虫虫媒病毒毒病, 19774 年年南非发发生辛德德毕斯热热大流行行。19991年年梁国栋栋等通过过免疫荧荧光技术术首次从从新疆分分离到SSiN 病毒。19999 年年陈振光光等利用用间接免免疫荧光光试验检检测到福福建宁化化林区人人群、野

9、野兔、狐狐狸、狗狗存在SSiN 感染, 抗体阳阳性率分分别为112. 86%、5. 88%、14. 299%、6. 45%。因而而判定福福建宁化化林区可可能存在在辛德毕毕斯热自自然疫源源地。2抗生生物素生物素素过氧化化酶复合合物技术术(A vvidiin BB ioo t in 2Peeroxxidaase Commp llex tecchniiquee, 简简称ABBC 技技术) 是H ssu 等等于19981 年创立立, 其特特点是利利用抗生生物素分分别连接接生物素素标记的的第二抗抗体和生生物素标标记的酶酶。该方方法简便便、节约约时间, 敏感感性、特特异性高高, 背景景染色淡淡。由于于生物

10、素素与抗生生物素具具有与多多种示踪踪物结合合的能力力, 可用用于双重重或多重重免疫染染色。如如李月白白等采用用ABCC 法研研究发现现绒毛层层滋养细细胞、绒绒毛中轴轴的基质质细胞、毛细血血管的内内皮细胞胞、毛细细血管腔腔内的淋淋巴细胞胞以及血血岛细胞胞均表现现为P 物质(SSP) 受体免免疫反应应阳性, 阳性性物质分分布于胞胞质和胞胞膜上, 胞核核呈阴性性反应。该研究究为其对对胎盘及及胚胎发发育的作作用提供供形态学学依据。张雅萍萍在ABBC 法法基础之之上改进进, 建立立了生物物素- 抗生物物素- 过氧化化物酶复复合物( sAABC) 法, 探讨讨了ILL 288 在甲甲状腺肿肿瘤组织织中的表

11、表达及意意义。3葡萄萄球菌蛋蛋白A (Sttaphhyloococcal P rro tteinn A , SSPA 或SP) 具有有免疫特特性, 发展成成为免疫疫学上一一种极为为有用的的工具。其优点点是不受受种属特特异性的的限制, 染色色时间短短、灵敏敏性高和和背景染染色淡等等。故在在目前各各种免疫疫细胞化化学技术术中得到到广泛的的应用。如肖华华亮等9 用此法法检测、探讨骨骨肉瘤MMDM 2 和和p 553 蛋蛋白定位位、表达达水平及及相互关关系和其其对骨肉肉瘤转移移及预后后的影响响。应用用SPAA 与胶胶体金或或铁蛋白白相结合合, 可在在电镜水水平检查查抗原抗抗体反应应的定位位。自PPom

12、aano 和Rommanoo (119777) 首首次报告告用蛋白白A -胶体金金技术(P rro tteinn A 2Goo ldd teechnniquue, PGAA 技术术) 标记记细胞表表面抗原原、包括括淋巴细细胞、血血小板、大鼠肾肾脏细胞胞及感染染的病毒毒细胞获获得成功功以来, SPP 法已已得到愈愈来愈广广泛的应应用, 并发展展成为一一种较为为理想的的免疫电电镜技术术。4碱性性磷酸酶酶抗碱性性磷酸酶酶方法(简称A PAAA P 法) 克服服了辣根根过氧化化酶(HHRP) 的不不足。沈沈岩等用用A PPAA P 法法结合单单克隆抗抗体(mmA bb) KKL 221 (广谱抗抗人细

13、胞胞角蛋白白, 德国国) 比较较分析不不同肿瘤瘤细胞间间同种细细胞凝集集力、靶靶器官定定植力、细胞增增殖和细细胞凋亡亡现象、癌基因因及肿瘤瘤相关抗抗原表达达等生物物学特征征。进一一步明确确肿瘤细细胞相关关生物学学特性与与肿瘤细细胞转移移能力间间的关系系。而链链霉素亲亲和素(St repp taaviddin, SAA ) 具有高高度的亲亲和力, 利用用生物素素结合的的二抗与与酶标记记的SAA 亲和和(L SABB 法) 是免免疫组化化中非常常有用的的方法。沈靖南南等采用用该法, 检测测84 例骨肉肉瘤中pp2糖蛋蛋白(pp 2ggp ) 表达达, 半定定量化计计量p22gp 的着色色强度及及阳

14、性率率, 通过过多因素素相关分分析和生生存分析析, 探讨讨骨肉瘤瘤预后的的相关因因素和高高危因素素, 研究究骨肉瘤瘤多药耐耐药性的的表达与与预后, 并证证实p22gp 介导骨骨肉瘤的的MDRR 现象象, 明确确p2ggp 表表达与肺肺转移的的关系。5凝集集素( (Phhytooaggglutt inn, PPHA ) 作作为一种种探针研研究细胞胞膜上特特定的糖糖基, 具有多多价结合合能力。直接将将标记物物标记在在凝集素素上, 再与切切片中的的相应糖糖蛋白或或糖脂相相结合, 该法法简便, 但灵灵敏性不不够高。经研究究发现将将凝集素素直接与与切片中中的相应应糖基结结合, 可提高高敏感性性高5 10

15、0 倍或或更多一一些, 有人认认为若将将凝集素素与特定定的糖基基作成三三明治样样的糖22凝集素素2糖的结结合物, 特异异性、灵灵敏度将将会更高高。而且且能与荧荧光素、生物素素、酶、胶体金金和铁蛋蛋白等示示踪物结结合, 从而在在光镜与与或电镜镜水平显显示其结结合部位位。N ewmman 等(19979)以荧光光素标记记凝集素素PHAA 实验验, 发现现在大鼠鼠乳腺上上皮的不不同分化化时期显显示不同同的荧光光强度。Kivvelaa 和Farrkkaanenn (119877)用凝凝集素作作为细胞胞特殊类类型的标标记实验验发现, 在人人视网膜膜上PHHA 标标记视锥锥细胞而而不标记记视杆细细胞。在在

16、乳腺、乳腺上上皮细胞胞呈PHHA 阳阳性反应应, 而肌肌上皮细细胞和间间质细胞胞呈PHHA 阴阴性反应应。他以以多种凝凝集素对对小鼠、大鼠和和兔的肾肾组织切切片进行行染色结结果表明明, 刀豆豆素A 和蓖麻麻素存在在于肾脏脏的各部部, PPHA 和双花花扁豆凝凝集素(DBAA ) 主要分分布于远远曲小管管和集合合小管上上皮细胞胞, 荆豆豆凝集素素(U EA ) 主主要分布布在血管管内皮细细胞, 而麦芽芽素分布布在肾小小球。SSt rreitt 和Kreeutzzberrg (19887)发发现Grrifffoniia SSimpp liiciffo llia 凝集素素能特异异性标记记面神经经节内

17、的的小胶质质细胞, 而其其它类型型的胶质质细胞如如星状胶胶质细胞胞(A st ro22cytte) 等都显显示阴性性反应。如果在在切断面面神经后后, 增殖殖的小胶胶质细胞胞对Grrifffoniia SSimpp liiciffo llia 凝集素素的反应应加强。大量研研究发现现, 凝集集素可作作为肿瘤瘤组织源源性的标标记、肿肿瘤特异异性诊断断的标志志、肿瘤瘤恶性的的标记和和不同肿肿瘤的分分化标记记。如张张华忠等等(19987)报道1115 例例胃癌标标记PHHA 阳阳性率高高达900. 443% , 而而正常胃胃粘膜基基本是阴阴性, 故认为为PHAA 是胃胃癌的诊诊断性标标志。BBSA对对乳

18、腺恶恶性肿瘤瘤阳性率率达799% , 而对对良性病病变均呈呈阴性反反应,提示BSSA 可可能为乳乳腺恶性性肿瘤的的相关标标志。HHRP 本身虽虽含有甘甘露糖, 能与与刀豆凝凝集素AA、扁豆豆凝集素素和豌豆豆凝集素素结合。但对其其它的凝凝集素, 需要要将糖基基化(GGlycco ssylaat iion) 过氧氧化物酶酶结合到到该凝集集素上, 且糖糖基化过过氧化物物酶品种种尚有限限, 故目目前本法法在应用用还有一一定困难难。免疫细胞胞化学技技术尚在在继续改改进和完完善中, 除目目前国内内外已广广泛应用用的免疫疫金技术术和免疫疫金银技技术外, 新的的免疫细细胞化学学技术不不断出现现。19984 年

19、国外外学者首首次将CCRNAA 探针针应用于于原位杂杂交, 核酸探探针为单单链的RRNA 分子, 产生自自具有质质粒逆转转录系统统的cDDNA 克隆。在19987 年Wo lf 等建议议插入确确定长度度的寡核核苷酸至至载体内内产生ccRNAA 分子子, 这种种cRNNA 分分子称为为“寡核苷苷酸核酸酸探针”(o liggo rriboop rrobees) , 现现在已被被广泛的的用于原原位杂交交实验。国内的的杨春花花等采用用免疫组组化和ccDNAA 2mmRNAA 原位位分子杂杂交技术术分别检检测了224 例例RA , 118 例例骨关节节炎(OOA ) 和6 例正正常滑膜膜组织中中uPAA

20、 , uPAAR 蛋蛋白和mmRNAA 的分分布及表表达情况况。科研研工作者者根据免免疫组织织化学中中材料的的特性把把同位素素、生物物素、光光敏生物物素、酶酶促生物物素、地地高辛标标记cRRNA上上成功的的制成探探针。尤尤其地高高辛与放放射性标标记相比比, 标记记探针具具有非放放射性探探针的优优点, 对人体体无害, 不受受半衰期期限制, 探针针可长期期保存; 与生生物素标标记探针针相比, 不受受组织、细胞中中内源性性生物素素的干扰扰, 敏感感性、分分辨率较较高, 反应产产物颜色色鲜艳, 反差差好, 背景染染色低, 制备备探针可可较长期期保存, 对人人体无害害等优点点,已日益益显示出出它的优优越

21、性和和广泛的的应用前前景。并并且进一一步研究究发现它它能根据据需要人人工用DDNA 合成仪仪合成, 其长长度及分分子大小比较一一致, 可控地地高辛同同位素寡寡核苷酸酸探针。另外, 放射射性同位位素、荧荧光素、生物素素也能成成功标记记寡核苷苷酸作为为探针, 成功功地运用用于培养养细胞、组织切切片和染染色体铺铺片等的的原位杂杂交中。虽然有有些人认认为其敏敏感度不不如来自自质粒扩扩增的ccRNAA 或DNAA探针, 但由于于探针制制备简便便再加之之于近年年非放射射性标记记的成功功, 寡核核苷酸探探针在生生物基础础医学及及临床学学科领域域中得到到较为广广泛的应应用。免疫细胞胞化学技技术与流流式细胞胞术

22、(FFCM ) 结结合进行行多参数数FCMM 分析析血液淋淋巴细胞胞免疫表表型(亚群) 方法学学因素对对实验结结果的影影响。当当血液采采集后11h 和和6h 测定淋淋巴细胞胞免疫表表型结果果差异无无显著。如黄勇勇华等采采用单标标或双标标直接免免疫荧光光标记法法标记220 种种细胞表表面分化化抗原, 经流流式细胞胞仪测定定。后进进行分析析1855 例白白血病患患者骨髓髓或外周周血白血血病细胞胞的免疫疫分型及及CD1117 的表达达细胞表表面分化化抗原(CD) 1117 在在各型白白血病中中的表达达及其意意义。免疫细胞胞化学技技术先进进仪器和和方法结结合已呈呈现新的的趋势，如用荧荧光显微微分光光光

23、度计和和图像分分析仪等等定量检检测, 将结果果客观打打印、报报告, 这更适适合于临临床诊断断和科学学研究。如杨希希谦等采用非非放射碘碘标记人人直肠癌癌相关抗抗原单克克隆抗体体(M cA b)技技术与生生物导向向CT 显像进进行肿瘤瘤的免疫疫组化鉴鉴定与免免疫显像像研究。免疫组织织化学技技术在临临床病理理诊断中中的重要要作用1000 年前前发明的的用光学学显微镜镜观察HHE 染染色切片片法仍然然是当前前各级医医院病理理科中的的基本方方法。该该方法的的局限性性在于仅仅能从细细胞水平平反映疾疾病性质质,诊断中中观察者者的主观观推测成成份高,常常是是同一疾疾病出现现分歧颇颇大的数数个不同同诊断,多年来

24、来成为临临床病理理诊断中中的突出出问题。而免疫疫组织化化学方法法是通过过抗原抗抗体反应应客观地地反映疾疾病性质质,在观察察HE 切片基基础上,再结合合免疫组组织化学学染色结结果可对对某一疾疾病做出出较为客客观公正正的评价价,从而可可避免主主观因素素的影响响。自免免疫组织织化学技技术应用用于临床床病理诊诊断以来来,在以下下几类疾疾病的鉴鉴别诊断断中发挥挥着重要要作用。1 高高度未分分化肿瘤瘤细胞起起源的鉴鉴别:发生在在胃肠道道的这类类肿瘤应应首选CCEA 与Vimmenttin 两种抗抗体鉴别别是上皮皮源性抑抑或是间间叶源性性肿瘤。因为CCEA 在消化化道上皮皮源性肿肿瘤的阳阳性率高高,但在鳞鳞

25、癌时阳阳性率低低;而消化化道以外外部位发发生者,上皮性性标记物物宜选用用EMAA ,该该抗体在在90 %以上上上皮源源性肿瘤瘤呈阳性性表达。2 小小圆细胞胞肿瘤的的鉴别:小圆细细胞肿瘤瘤包括小小细胞未未分化癌癌、恶性性淋巴瘤瘤、小细细胞软组组织肉瘤瘤、神经经内分泌泌肿瘤以以及小细细胞黑色色素瘤。这类肿肿瘤鉴别别诊断时时应使用用EMAA 或CEAA , LCAA , Vimmenttin , NNSE ,S1100 和HMBB45抗抗体。3 大大细胞型型肿瘤鉴鉴别:这类肿肿瘤可以以是大细细胞未分分化癌、低分化化肉瘤、大细胞胞性黑色色素瘤和和大细胞胞性恶性性淋巴瘤瘤。在鉴鉴别诊断断时应该该选用EE

26、MA 或CEAA ,VVimeentiin ,S1000 和和LCAA 抗体体。4 梭梭形或多多形性软软组织肉肉瘤的鉴鉴别:此类肿肿瘤包括括平滑肌肌肉瘤、滑膜肉肉瘤、梭梭形细胞胞血管肉肉瘤、梭梭形细胞胞黑色素素瘤、多多形性横横纹肌肉肉瘤、多多形性恶恶性纤维维组织细细胞瘤以以及多形形性脂肪肪肉瘤。以下抗抗体可用用于鉴别别诊断: Acctinn , EMAA , F Ag , SS1000 , MB445 ,Myoogloobinn ,DDesmmin ,12AAT 以以及12AACT。5 恶恶性淋巴巴瘤分型型:在免疫疫组织化化学研究究领域，当前对对恶性淋淋巴瘤的的免疫组组织化学学研究最最为活跃跃

27、与细致致。截止止目前为为止,已有下下列亚型型可以通通过免疫疫组织化化学染色色确立。它们是是:B 细胞淋淋巴瘤,L266 阳性性,LNN2 阳阳性; T 细细胞淋巴巴瘤,MMT1 阳性,UUCHLL1 阳阳性;NN K细细胞淋巴巴瘤C1233C 阳性;树突网网织细胞胞淋巴瘤瘤,Beer2MMAC22DRCC 阳性性; 指状状突网织织细胞淋淋巴瘤,S1000 阳阳性; 真性组组织细胞胞淋巴瘤瘤, MMac3387 阳性,LLysoozymme 阳阳性,12AACT 阳性; 何杰金金病R22S 细细胞,LLeuMM1 阳阳性,BBer22H2 阳性;大细胞胞间变型型淋巴瘤瘤Berr2H22 (或或称

28、Kii21) 阳性性。6 神神经内分分泌肿瘤瘤的确立立:900 %以以上的神神经内分分泌肿瘤瘤NSEE 阳性性。由于于NSEE 与其其它肿瘤瘤有交叉叉反应, 故必必要时可可加染CChroomoggrannin A 或或Synnapttophhysiin 抗抗体。当当需要弄弄清神经经内分泌泌肿瘤有有否内分分泌功能能时,再加染染多肽类类激素抗抗体。7 肿肿瘤预后后的推测测:最早用用于推测测肿瘤预预后的抗抗体有抗抗雌激素素受体EER 及及抗孕激激素受体体PR ,二者者阳性时时预后较较好。新新近又发发现, 转移抑抑制基因因产物nnm233 呈高高表达时时预后较较好。而而下列几几种抗体体呈高表表达时均均

29、提示预预后差：C2eerbBB22 , C2mmyc , P533 , EGFFR , PCNNA , Ki2267 , BrddU , P1220 , P1005。8 感感染性疾疾病病原原体的检检测: 其中HBBsAgg 及HBccAg 抗体常常用于肝肝病研究究与诊断断。而尖尖锐湿疣疣及宫颈颈癌时常常常可以以检测到到乳头状状瘤病毒毒HPVV。鼻咽咽癌、何何杰金病病时EBB 病毒毒抗体多多呈阳性性。免疫组织织化学技技术由于于它自身身独有的的特点, 使得得广大科科研作者者在组织织细胞定定位、定定性、定定量研究究中经常常选取的的技术, 因此此随着科科研工具具的更新新, 科研研工作者者对免疫疫组织化

30、化学更广广泛深入入的理解解、并与与其他研研究手段段深入结结合, 优化技技术路线线地设计计,而推动动免疫组组织化学学技术的的进一步步发展。如范少少地等运运用GAA P2243ccDNAA 探针针(生长相相关蛋白白2433 (GGroww thh asssocciatted p rro2tteinn 433, GGA PP2433) 原原位杂交交技术来来观察这这一变化化过程中中GA P2443mRRNA 表达水水平, 阳性细细胞定位位及分布布的变化化。李月月白等应应用免疫疫组化LL SAAB 法法和原位位杂交方方法, 观察了了骨肉瘤瘤患者pp 211w aaf1c iip 11 表达达水平与与临床

31、预预后之间间的关系系。而倪倪灿荣等等应用他他们实验验室制备备的催化化信号放放大(CCataalyzzed siggnall ammp llifii2caat iion, CSSA ) 试剂剂应用于于IHCC 检测测50 例10 种不同同类型的的肿瘤切切片中440 种种不同的的抗原和和ISHH 检测测6 种不不同的RRNA 成分, 并与常常规方法法进行敏敏感性比比较: CSAA 2IIHC 法较传传统的PPA PP 法、ABCC 法和和L SSAB 法敏感感5000 1 0000 倍, 较EnVV issionn 法敏敏感200 1000 倍倍。参考文献献1巴德年年 当代代免疫学学技术与与应用

32、北京京医科大大学中国国协和医医科大学学联合出出版社, 19999. 1- 111.2沈关心心, 周汝汝麟 现代免免疫学实实验技术术 湖北科科学出版版社, 19998. 1- 50.3黄翔瑞瑞, 陈娟娟, 李晓晓萸等 西藏环环状病毒毒细胞生生物学特特性研究究 军事医医学科学学院院刊刊, 220000, 224 (3) : 1173- 1776.4P rritccharrd LL I, Goouldd ARR. PPhyllogeenett icc coompaarisson of theeserro ttypee2sppeciificc V P2 p rro tteinn off bllue t

33、onnguee annd rrelaateddo rrbivviruusessJ . V iiruss Rees, 19995, 39 (2- 3) : 2077- 2210.5梁国栋栋, 李其其平, 何英等等 我国首首次分离离到辛德德毕斯病病毒 病毒学学报19993, 5 (1) : 55- 5776陈振光光, 陈娟娟, 黄翔翔瑞等 福建宁宁化辛德德毕斯热热血清学学调查 中国国媒介生生物学及及控制杂杂志, 20000, 11 (2) : 1377-1339.7李月白白, 秦国国斌, 王义生生等 人骨肉肉瘤中pp 211w aaf1/cipp 1 基因的的表达 中华骨骨科杂志志, 220000

34、, 220 (1) : 330- 33.8张雅萍萍, 姬秋秋和, 张南雁雁等 甲状腺腺肿瘤组组织中IIL 228 的的表达及及意义 第四军军医大学学学报, 20000, 211 (66) : 1225-1128.9肖华亮亮, 陈俐俐, 王东东 MDDM 22 蛋白白和P553 蛋蛋白在骨骨肉瘤组组织中的的表达及及意义 第三三军医大大学学报报, 220000, 222 (4) :3557- 3599.10沈岩岩, VVogeel IIKallthooff H, 于吉人人, 等. 不同同转移能能力肿瘤瘤细胞间间转移相相关特征征的比较较研究J . 中中华肿瘤瘤杂志,20000, 22 (3) : 2

35、011- 2204.11沈靖靖南, 王晋, 韩士英英等 骨肉瘤瘤p2糖蛋蛋白表达达水平与与肺转移移 中华华骨科杂杂志, 20000, 20 (1) : 21- 233.12蔡文文琴, 王伯倪倪 实用免免疫细胞胞化学与与核酸分分子杂交交技术 成都都: 四川川科学技技术出版版社, 19994. 1- 20.13N eewmaan RRA. B iindiing of peaanutt leect in to breeastt epp itthe22liuum , huumann caarciinomma aand cullturred ratt maammaary steemceellss:U se of thee leect in as a mmarbber ofmmammmaryy diiffeerenn2t iatt ioonJJ . J N aat ll Caanceer IInstt, 119799, 663: 13339- 13442.14Kivverlla TT annd TTarkkaneen AA. AA leect in cyttochhem icaal sstuddyoff gllycooconnjuggatees iin tthe humman rett inna J . CC