国家大学生创新性实验计划项目申报表项目名称：人甲状旁腺激素

1、国家大学学生创新新性实验验计划项项目申报报表项目名称称：人甲甲状旁腺腺激素（1-334）二二联体与与人血清清 白蛋白融融合蛋白白的制备备 项目负责责（申请）人人姓名： 宋佳欢欢 所在学院院： 医药学学院 项目所属属一级学学科： 药学学 班级： 护护理0701 学号： 1660100701126 联系电话话： 15886144072228 电子信箱箱： soongjjiahhuann52111663.ccom 江南大学学教务处处制项目名称称 人甲甲状旁腺腺激素（1-334）二二联体与与人血清清白蛋白白融合蛋蛋白的制制备项目类型型（）个人人项目 （）团队队项目项目实施施时间起始时间间： 22008

2、8 年 11月 完成成时间： 20009 年 12月申请人或或申请团团队姓名学院专业、班班级手机负责人宋佳欢医药学院院护理0770115866140072228成 员员李文静医药学院院护理0770315866140007661李敏医药学院院护理0770115866145590990叶秀利医药学院院护理0770315866145592668指导教师师姓名邬敏辰年龄46学院医药学院院专业技术术职务教授手机13055720028887E-m主要成果果邬敏辰，男，220011年毕业业于复旦旦大学生生物化学学与分子子生物学学专业，获博士学学位。现主要要从事生生物化学学、基因因工程、蛋白质质工程的的教学和

3、和研究工作作。曾主持持或参与与完成了了国家级级、省级级和企业业委托项项目300余项，通过科科技成果果鉴定77项，获获科技成成果进步步奖8项项，获多媒体体教学成成果奖11项，授权权和申请请专利33项，发发表研究究论文1180余余篇，参参编和主主编著作作5部。其中：参与完完成了国国家“八八五”和和“九五五”重点点科技攻攻关项目目碱性性脂肪酶酶中试和洗洗涤剂配配套酶制制剂 碱性性脂肪酶酶，119966年获中中国轻工工业科学学技术进进步奖三三等奖；主持完完成了木聚糖糖酶基因因的克隆、改造及及产业化化生产等项目目，20006-08年年分别获获珠海市市科学技技术奖二二等奖（排名第第一）、中石化化工业协协会

4、科技技进步奖奖二等奖奖2项（排名第第一）、无锡市市科学技技术奖二二等奖（排名第第一），20007年申申请专利利2项（排名第第一）。现主持持国家自自然科学学基金资资助项目目碱性性脂肪酶酶热稳定定性的生生物信息息学分析析及定点点突变。20002年起，指导导本科生生、硕士士生500余名，协助指指导博士士生5名名。一、项目目简介（研究内内容、目目的意义义、具体体目标等等）目的意意义以骨吸收收和骨形形成失衡衡导致的的骨质疏疏松症是是老年人人常见的的慢性病病，所以以抑制骨骨吸收和和促进骨骨形成可可有效防防治骨质质疏松症症。目前前抑制骨骨吸收的的药物主主要有雌雌激素和和双磷酸酸盐等，它们可可抑制破破骨细胞胞

5、的活性性、减少少骨钙流流失、延延缓骨吸吸收速度度，但不不能使已已遭破坏坏的骨小小梁重建建，无法法改善骨骨的强度度。19996年年全球骨骨质疏松松症会议议认为将将来最好好的骨质质疏松症症治疗药药物应当当是能促促进骨形形成且无无副作用用的药物物，重组人人甲状旁旁腺激素素（rhhPTHH）药物物治疗骨骨质疏松松症的效效果已得得到肯定定。小剂剂量、间间歇给予予PTHH不仅能能刺激成成骨细胞胞活性、促进骨骨形成，还能增增加骨密密度和机机械应力力；PTTH对重重度骨质质疏松症症、已发发生骨折折和高危危骨折患患者的治治疗尤其其有利。据世界卫卫生组织织的统计计，目前前全球骨骨质疏松松症患者者总数已已超过22亿

6、人，其中660%左左右的骨骨质疏松松症患者者分布在在发展中中国家和和亚洲国国家。依依据中国国国家统统计局公公布的人人口抽样样调查数数据以及及60岁岁以上老老年人口口增长数数据，中中国老年年学学会会骨质疏疏松学会会预测国国内骨质质疏松症症患者总总数约为为：20006年年90000万人人；20010年年114400万万人；220500年将激激增至22亿多人人。如果果以每位位骨质疏疏松症患患者需550000元人民民币/年年的药费费计算，目前国国内治疗疗骨质疏疏松症药药物的市市场容量量约为550000亿元人人民币/年，按按其中11%的患患者使用用rhPPTH药药物，其其销售额额将达到到50亿亿元人民民

7、币/年年1。20022年111月，美美国FDDA批准准了Liillyy公司生生产的PPTH类类似物 特特立帕肽肽rhPPTH11-344（Teeripparaatidde, 重组人人PTHH N末末端134个个氨基酸酸）产品品上市，商品名名为Foorteeo，用用于治疗疗绝经后后妇女的的骨质疏疏松症和和原发性性骨质疏疏松症2。20003年年11月月，NPPS PPharrmacceutticaals公公司结束束了rhhPTHH1-884的IIII期临床床研究，20004年底底向美国国FDAA提出新新药申请请的同时时，20005年年在欧洲洲提出新新药申请请；20006年年3月FFDA向向NPSS

8、 Phharmmaceeutiicalls公司司发出该该药物可可以被批批准的意意见书，同年4月月欧盟批批准该药药物上市市，用于于治疗妇妇女绝经经后的骨骨质疏松松症11。在在国内，重庆科科润生物物医药研研发有限限公司开开发的一一种治疗疗用生物物制品II类新药药 rhPPTH11-844冻干粉粉针剂，在完成成了临床床前研究究工作的的基础上上，于220077年5月月获得临临床研究究批件（20007L112199）。华华东理工工大学目目前已完完成了rrhPTTH1-84的的制备、药效学学研究、新药安安全性评评价、质质量标准准、原液液和成品品质检项项目等。在临床研研究和使使用过程程中，rrhPTTH1-

9、34或或rhPPTH11-844均存在在着稳定定性差、溶解度度低、体体内半衰衰期短以以及由于于分子量量小易被被肾小球球滤过而而导致的的药物利利用率低低等问题题。为了了明显提提高骨质质疏松症症患者的的骨密度度，临床床上每天天需要皮皮下注射射20-40 g rhhPTHH1-334或550-1100 g rhhPTHH1-88433。在美美国及欧欧洲，通通常一个个甲状旁旁腺激素治疗疗疗程为为18-24个个月。这这种治疗疗费用高高、毒副副作用严严重以及及患者频频繁注射射的痛苦苦等问题题是限制制治疗的的主要因因素4。因此此，寻找找更稳定定的PTTH类似似物以延延长其有有效作用用时间，从而减减少注射射次

10、数（如改每每日注射射为隔日日或每周周注射）但保留留其促进进骨质合合成的生生物活性性，是当当今PTTH用于于治疗骨骨质疏松松症的发发展方向向5。长效效蛋白药药物的研研发已成成为对第第一代基基因工程程产品进进行二次次开发的的一个重重要方向向，常用用的技术术有：制制备缓释释制剂、构建突突变体、化学修修饰以及及构建融融合蛋白白等，其其中以构构建融合合蛋白技技术最为为突出6。依据据使用目目的不同同，常用用的融合合蛋白载载体有人人血清白白蛋白（HSAA）、抗抗体IggG重链链Fc段段、6 Hiis TTag、-半半乳糖苷苷酶、ttrpEE和谷胱胱甘肽SS-转移移酶（GGST）等，其其中以HHSA作作为载体

11、体构建融融合蛋白白最具明明显的优优点77。本研究究拟以HHSA为为载体，将PTTH1-34基基因串联联后进行行定点突突变，再再与人血血清白蛋蛋白（HHSA）基因融融合，并并在毕赤赤酵母GGS1115中进行高高效表达达。研究内内容1) 人甲状状旁腺激激素（PPTH11-344）和人人血清白白蛋白（HSAA）基因因的克隆隆、测序序和序列列分析等等。2) 人甲状状旁腺激激素（PPTH11-344）二联联体基因因的构建建及定点点突变。3) 人甲状状旁腺激激素（PPTH11-344）二联联体基因因突变体体与人血血清白蛋蛋白（HHSA）基因的的融合；融合基基因在毕毕赤酵母母GS1115中中的表达达。本研究

12、可可提高融融合蛋白白药物的的药效活活性；提提高目的的基因在在毕赤酵酵母中的的稳定性性和表达达量；为为小分子子生物活活性肽的的制备提提供参考考。具体目目标撰写项目目总结报报告，申申请技术术发明专专利1项，在SSCI或或CSCCD期刊刊上发表表论文11-2篇篇，参编编著作11部（邬邬敏辰主主编）。参考文献献1 重组组人甲状状旁腺素素(PTTH1-84)生物制制品类类新药. HYPERLINK wwww.ccnfdda.ccom(20008-33-4发发布)2 张颖颖，彭永永德. 世界临临床药物物, 220044, 225(112) : 7725 -72293 Fiinkeelstteinn J S

13、, et al. N Enggl JJ Meed, 20003, 3499 : 12116-1122664 Giirottra M, et al. Reev EEndoocr Mettab Dissordd. 220066, 77 : 1133-12215 Koosteenuiik PP J, ett all. JJ Boone Minner Meaab. 20007, 22(10) : 15334-1154776 戚南南，马清钧钧. 中国国生物工工程杂志志, 220066, 226(22) : 799-8227 Luucass L H, et al. J AAm CChemm Sooc, 2

14、0004, 1266(433) : 1442588-1442666二、研究究技术路路线及可可行性技术线线路 人PTHH1-334基因因的克隆隆 hPTHH1-334二联联体基因因的构建 hPTHH1-334二联联体基因因的突变 人HSA基因因的克隆隆 hPTHH1-334二联联体-HSA融融合基因因的构建 融合合基因在毕毕氏酵母母中的表表达可行性性分析1) 项目在在立论上上借鉴了了国内外外生命科科学的最最新成果果和进展展，具有有可靠的的理论依依据。在在研究方方法上，从基因因和蛋白白表达两两方面采采用成熟熟的技术术路线和和研究手手段。在在酵母表表达体系系以及蛋蛋白质分分离纯化化技术方方面已有有良

15、好工工作基础础。项目目注重多多学科的的交叉和和互补，并吸收收了许多多在相关关领域有有创新学学术思想想和重要要研究成成果。2) 课题组组的指导导老师近近几年主主要参与与了国家家攻关计计划、国国家自然然科学基基金、部部省级科科研计划划等多项项科技计计划。在在白蛋白白重组共共表达方方面有着着丰富的的经验，这将为为本项目目的实施施提供有有利的保保障。三、项目目特色与与创新性性多年来有有关人甲甲状旁腺腺激素、融合蛋蛋白、毕毕赤酵母母表达系系统、药药效学、药代动力学等的的研究都都取得了了突飞猛猛进的发发展，但但对PTTH长效效药物的的研究还还有很多多工作要要做。本本项目的的实施具具有以下下特色与与创新性性

16、：1) 首次设设计和构构建人甲甲状旁腺腺激素（PTHH1-334）二二联体基基因；2) 首次对对人甲状状旁腺激激素（PPTH11-344）二联联体基因因进行定定点突变变；3) 首次将将人甲状状旁腺激激素（PPTH11-344）二联联体基因因突变体体与人血血清白蛋蛋白（HHSA）基因进进行融合合；4) 首次将将融合基基因在毕毕赤酵母母GS1115中中的表达达。四、项目目进度安安排08.111-09.01：查阅文文献，实实验方案案设计；人甲状状旁腺激激素（PPTH11-344）和人人血清白白蛋白（HSAA）基因因的克隆隆、测序序和序列列分析等等。09.003-09.06：人甲状状旁腺激激素（PPT

17、H11-344）二联体体基因的的构建及及定点突突变。09.007-099.100：人甲甲状旁腺腺激素（PTHH1-334）二联体体基因突突变体与与人血清清白蛋白白（HSSA）基基因的融融合；融融合基因因在毕赤赤酵母GGS1115中的的表达。09.111-009.12：撰写总总结报告告、科研研论文，申请发发明专利利等。五、预期期成果课题组44名本科科学生（22年级）在医药药学院邬邬敏辰教教授（博博士）、吴静副副教授（博士）和徐静静娟讲师师（硕士士）的直直接指导导下进行行本项目目的研究究。通过过项目的的实施，调动学生生学习的的主动性性、积极性性和创造造性；激激发学生生的创新新思维和和创新意意识；培

18、养学生生发现问问题、思思考问题题和解决问问题的能能力。同同时在项项目实践践中逐步步掌握分分子生物物学、基基因工程程、药学等等学科的的基本理理论与技技术，实实现多学学科交叉叉的科研研创新。项目预期期成果为为：申请请技术发发明专利利1-2项，在SCCI或CCSCDD期刊上上发表论论文1-2篇，参编著著作1部部（邬敏敏辰主编编）。六、经费费预算序号支出科目目金额（单单位：元元）1材料试剂剂费1000002测试化验验费300003论文版面面费200004申请专利利费400005差旅费10000合计200000七、导师师推荐意意见宋佳欢等等4名本本科学生生自20007年年9月入入学以来来，一直直在本人人的指导导下学习习生物化化学与分分子生物物学的基基础理论论与实验验方法。一年多多来，已已较熟练练地掌握握了生物物化学与与分子生生物学的的操作流程程与技术术，如PPCR技技术、基基因克隆隆技术、基因和和蛋白质质序列分分析方法法和蛋白白质表达达技术等等，初步步了解了了研究方方案及技技术路线线的设计计。我深深信，通过本项目的的实施，能更好好地调动动学生学学习的主主动性、积极性性和创造造性；激激发学生生对科学