实验七 抑制剂和pH对酶活性的影响

1、实验七pH对酶活性的影响一、目的要求了解pH对酶活性的影响掌握试验pH对酶活性影响的原理及方法二、原理酶的活力受环境的pH的影响极为显著。通常只在一定的pH范围内才表现 它的活性。一种酶活性表现最高时的pH值为该酶的最适pH，低于或高于最适 pH时，酶的活性渐次降低。不同酶的最适pH不同.本实验以枯草杆菌a 一淀 粉酶来说明pH对酶活性的影响。三、试剂与器材试剂：0.5 %可溶性淀扮溶液，新鲜配制。a 淀粉酶稀释液。0.2 M磷酸氢二钠溶液：称取Na HPO2H O 35.51克，溶于水，定容至2421 00 ml。0.1M柠檬酸溶液：称取CHOH O21.01克，溶于水中，定容至1000 m

2、l。6 8 72碘一碘化钾溶液器材：试管及试管架恒温水浴锅吸管 10ml 2 支，5ml 8 支，2 ml 2 支白瓷调色板l块四、操作0.1柠檬酸溶液，制备pH为4 .47.2的缓冲液。试管号码0.2 M磷酸氢二钠(ml)0.1柠檬酸溶液(ml)pH14.415.594.424.935.074.835.364.645.245.804.205.656.323.686.066.933.076.477.732.276.888.701.307.2取9支试管，编号，将上述8种缓种液分别吸取3 ml，分别加入相应 号的试管中(第18号)。第9号试管加pH 5.6的缓冲液3 ml。然后再向各 试管添加0.

3、5 %可溶性淀粉溶液2 ml。将9支试管放入37 C恒温水浴中预 热510分钟。向第9号试管添加a 一淀粉酶稀释液2ml，摇匀，仍在37 C温水浴 中保温。1分钟后，每隔15秒钟自第9号试管中取出一滴混合液，置白瓷板 空穴中，以碘一碘化钾溶液试之，检验淀粉水解的程度，待结果呈橙黄色时，取 出试管记下酶作用的时间(自加入酶液时开始)。注意：掌握第9号试管的水解 程度是本实验成效的关键。以上l分钟的间隔，依次向第l8号试管加入。a 一淀粉酶稀释液 2ml，摇匀，并仍在37 C恒温水浴中保温。然后，按紧9号管酶作用的时间， 依次将各管取出，并立即加入碘一碘化钾溶液2滴，观察各管呈现的颜色，并 说明之

4、。五、思考题：pH对酶活性影响的机理掌握试验pH对酶活性影响的原理及方法如果要定量测定pH对酶活性影响方案如何设计?实验七酶的激活剂和抑制一、目的要求了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响掌握试验激活剂、抑制剂对酶活性影响的原理与方法二、原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活 剂物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。激活剂和抑制剂影响酶作用的需要 量很少，常有特异性。本实验以唾液淀粉酶为例，说明氯离子对该酶的激活作用以及铜离子对该酶 的抑制作用。三、试剂与器材试剂：0.5 %可溶性淀粉溶液，新鲜配制。1%NaC1 溶液。0.5% CuSO45H2O 溶液。唾液淀粉酶液：实验者先有清水漱口后，取唾液1ml，稀释100倍左右。碘一碘化钾溶液。器材：试管及试管架恒温水浴锅吸管5ml 1支，1ml 4支四、操作取3支试管，编号后各加入3ml 0.5 %可溶性淀粉溶液及1 ml稀释唾 液.1号试管加lml 1%氯化钠溶液。第2号试管加lml 0.5 %硫酸铜溶液，第3号 试管加lml蒸馏水。将上述3支试管，放入37 C恒温水浴中保温1015分钟后取出（保 温时间因唾液淀粉酶活力而异，重做一次，以求明显之结果）。冷却后分别加入 45滴碘一碘化钾溶液。观察比较三支试