化妆品生物技术

1、 化 妝 品 生 物 技 術雷公草的萃取物在化妝品的應用 經國管理暨健康學院 進院化四忠 指導老師：賴意繡 博士 徐美玲 9554040012 小組成員： 陳巧如 9554040020 李美蘭 9554040035The Application of Centella Asiatica Extract in Cosmetic 論文來源 國立台灣海洋大學 食品科學系 碩士學位論文 雷公草的萃取物在化妝品的應用 研究生： 葉文騰 撰The Application of Centella Asiatica Extract in Cosmetic 目 錄一、研究摘要二、關於雷公草三、實驗方法四、實驗結

2、果五、研究討論(互動式)一、研究摘要研究目的：探討利用雷公草中五圜三萜類化合物Pentacyclic riterpene 如：積雪草酸苷(asiaticoside)、積雪草酸 (asiatic acid)、羥基積雪草酸苷(madecassoside)、 羥基積雪草酸 (madecassic acid)等應用在抗老化及防 止皮膚皺紋等化妝品的有效性研究。 1. 探討雷公草有效成分之萃取方法。 2.探討雷公草酒精萃取物對纖維母細胞增生及促進膠原蛋白 產生之影響。 3.測試雷公草酒精萃取物對所製備之水凝膠精華露對皮膚彈 性、保溼度、安定性、pH值及美白之影響。 二、關於雷公草 雷公草(Centell

3、a asiatica) 主要化學組成 是屬於-香樹精-熊果酸類化合物，五環三萜類化合物，主要成份 為：積雪草酸苷(asiaticoside)、積雪草酸(asiatic acid)、羥基積雪 草酸苷(madecassoside)、 羥基積雪草酸 (madecassic acid)。檢測方法：HPLC (繖形花科)為多年生的葡萄性草本植物，梵文是brahmi，意為良知或智慧，在印度稱為石榴花；因為能增強記憶、思考敏銳，所以命名為brahmi。它有兩個拉丁學名Centella asiatica及Hydrocotyle asiatica指的都是同一種植物，全草可供藥用。常見俗名：積雪草、老公根、月亮草

4、、銅錢草、蜆殼草、含殼草、 美人扇、止血草、雷公根.(邱和張，1986 ; 鄭等，1966)。雷公草(Centella asiatica)生長環境 主要生長於熱帶、亞熱帶及沼澤溼地。如馬達加斯加、亞洲、歐洲東 部和南部非洲。(Nalini et.,1992) 台灣田園路邊、原野、低海拔山區 也很常見。應用範圍： 醫藥、化妝品、農業。 a. 雷公草首先在印度被使用，他曾記載於印度傳統科學醫書Ayurvedic 中，並廣泛用作神經方面的處方，包括促進放鬆、提升學習、記憶 力以及皮膚傷口治療上皆有顯著效果。 b. 積雪草始載於神農本草經，列為中品，目前已載於中國藥典。 在中國長久以來即以增進腦力及療

5、傷而聞名。它本身帶有苦味、辛 辣及甜味，對身體具有清涼鎮定效果。 雷公草(Centella asiatica) c.在馬來西亞及斯里蘭卡等國家有人以雷公草餵食母牛，發現可 增加牛奶的產量。(Tennekoon and Jeevathayaparan，1992) d. 在歐洲，這種植物利用滴定萃取純化方式製成片狀、粉狀或乳 膏狀，稱為Madecassol。 e. 積雪草酸苷(asiaticoside) 能刺激培養中的纖維母細胞增生，促 進皮膚中膠原蛋白的合成、上皮細胞的再生、總蛋白質的增生 ，使皮膚傷口加快癒合，增強皮膚的伸張彈性。且羥基積雪草 酸苷(madecassoside)、 羥基積雪草酸

6、 (madecassic acid) 具 有抗皮膚發炎的效果。(Boiteau and Batsimamanga，1950 ; Nakajima and Akiyoshi，1972) 雷公草(Centella asiatica) f.台灣民間以雷公草全草入藥，藥性苦及寒，具有解毒、消 暑、治高血壓、腹痛及小兒疾病等效用。新鮮莖葉搗汁或 煮水，調紅糖(黑糖)服用，可治腸胃發炎，新鮮莖葉搗爛 ，可敷治疔瘡紅腫及蛇蟲咬傷。 三、實驗方法 1. 探討雷公草有效成分之萃取方法。取至花蓮秀林國中校園內、花蓮市中草藥房、基隆海洋大學曬乾研磨成粉狀a.20ml甲醇 (v/v:9/1 水)b.甲醇 c.乙醇 d

7、.氰化烷取1g重，溶於四種溶劑中，室溫下攪拌5小時過濾將濾液用抽器減壓濃縮乾燥約得0.15g 取萃取物100mg、 溶於10ml溶劑中， 再以0.45m濾紙過濾，HPLC 檢測2-1. 探討雷公草酒精萃取物對纖維母細胞增生及促進 膠原蛋白產生之影響。 老鼠胚胎纖維母細胞NIH3T3加入6mlDMEM完全培養液5%-CO2，37C，培養34天取出10ul的培養液加入5個5cc含MDEM完全培養液瓶中再分別加入雷公草之酒精萃取物(0.0、12.5、25.0、 50.0及100.0ug)經過24、48、72小時培養後.觀察各瓶中纖維母細胞增生情形下一頁將培養瓶中的上層液去除，加入1.5ml的胰蛋白酵

8、素後，搖晃培養瓶，使附著在瓶底細胞都被浸潤。放入5%-CO2之37C培養箱中，35分鐘取出培養瓶離心5min，去除上層胰蛋白酵素，拍散沉澱的細胞，加入1ml的完全培養液於離心瓶中取出5uL之懸浮液及5uL Trypan blue細胞染色劑，將之滴在計數器的光滑面計算中央正方形內未被染色的活細胞數目2-2. 探討雷公草酒精萃取物對纖維母細胞增生及促進 膠原蛋白產生之影響。從5瓶纖維母細胞培養液中分別取出0.0、12.5、25.0、50.0 ul加至1.5ml微量離心試管中以0.5M醋酸稀釋至100ul，並分別加入1ml反應試劑A，(Sircol dye reagent)，30分鐘後離心10分鐘，

9、去除上層液再分別加入1ml反應試劑B(Alkali reagent)震盪混合均勻以540nm測其吸光值，與標準濃度膠原蛋白樣品在540nm之(吸光值/含量)檢量線比較，求出各檢品的膠原蛋白濃度。3. 測試雷公草酒精萃取物對所製備之水凝膠精華露 對皮膚彈性、保溼度、安定性、pH值及美白之影響。依標準配方及標準製程，製造水凝膠精華露基本Base分別製成含有0.0、0.3、0.5%雷公草萃取物的水凝膠精華露安定性測試皮膚測試50C3個月4C3個月50C- 4C3個月超音波震盪5分鐘or離心測試30分鐘觀察有無相分離1.樣品塗抹量：0.2g2.塗抹點：手臂3.檢測時室溫條件： 23C; RH60-65

10、%4.測試者樣品數：2組共12人，各取六點檢測皮膚彈性吸允法Cutomer SEM575四星期保溼度皮膚電容量Skin Analyzer SHP880120分鐘pH值皮膚刺激度皮膚分析儀0120分鐘美白皮膚黑色素值Mexamter MX16四星期 四、實驗結果一、不同產地的雷公草，皆含有四種常用成分，其相對含量會因 產地不同而有差異，也可能與採摘時葉與莖的多寡及成長時 日曬時間有關。(圖十一)二、溶劑的極性會影響四種常用成分的萃取，以甲醇/水(v/v： 9/1)為萃取溶劑的效果最好，氰甲烷則無法有效萃取出四種 常用成分。(圖十二)三、從質譜圖顯示：羥基積雪草酸苷(madecassoside)及積雪草 酸苷(asiaticoside)會因為水解而分別轉化為羥基積雪草酸 (madecassic acid) 及積雪草酸(asiatic acid) 。四、雷公草酒精萃取物能夠刺激纖維母細胞之增生與膠原蛋白 的合成。(圖十三、十四、十六)五、所製備雷公草酒精萃取物之水凝膠精華露之安定性佳。 (表三)六、雷公草酒精萃取物能夠使自製之水凝膠精華露對於皮膚的 保濕效果、彈躍性及美白度有增強的效果。(圖十七、十