荧光定量PCR仪标准操作规程

1、荧光定量PCF标准操作指导书1、适用范围：AGS AGS480M实时荧光定量PCRZ。1、双击桌面” AGS4800快捷方式，运行程序。打开 AGS480羽序进入用 户选择界面。选择用户后，进入软件操作界面。2、新建一个检测程序文件单击新建按钮，新建一个检测程序文件。设置热盖温度调节热盖温度(30-105 C)，默认105Co设置试管加液量根据实际试管加液量调节加液量参数(5-100川)，默认25仙l。设置扩增程序单击“添加”创建一个程序段添加程序名称，设置各程序段循环数。温度设置功能按钮添加 在当前温度节结尾，新建一个温度节插入 在当前温度节前添加一个温度节删除 将当前温度节删除样本信息录入

2、打开样本参数设置界面在当前程序染料设置里，选择试剂所对应的染料3样本信息设置选择扩增的染料，选中要设置孔位依次输入“样本序号、样本名称、样本ID”，在荧光信息选择框中选择样 本类型，若为标准品可以输入样本浓度信息。样本浓度信息可以手工输入数值或者使用下拉选择框选取标准样品浓度信 息。最大样本浓度输入值1.00e+10。孔位选择单孔选择 通过鼠标单击选中单个孔位。相邻孔位选择 通过单击鼠标并拖动选择矩形框内相邻孔位或者先选中一个孔位，按住“ Shift ”功能键单击另一孔位进行选择。不连续孔位选择 通过按住“Ctrl ”功能键进行依次追加选择孔位。A (B)行全选 在A (B)行开始位置单击鼠标

3、则选中 A(B)行所有孔位。孔位全选 在图示位置单击鼠标左键则全选所有孔位。选择孔位增减 按住“Ctrl ”键，使用鼠标单击需增加或减少的孔位。样本类型设置孔位选择后，可以直接点选右侧样本类型快速设置按钮，进行样本类型设 置，也可以选择样本参数项目中的样本类型设置下拉选择框进行选择设置。样本类型若选择标准品，需输入样本浓度。程序运行参数保存点选“文件-保存”或“文件- 另存为”，输入文件名称，点选确认按钮 进行保存操作。文件进行首次保存。、程序运行参数的导入点选“文件-文件操作-导入参数”，根据提示导入程序参数和/或样 本参数。2、文件运行准备试剂-AGS4800检测系统使用0.2ml透明离心

4、试管根据试剂要求 选用5-100膜 合适的加液量。离心操作-配置完成试剂样本的试管在放入仪器之前，要用离心机进 行离心操作，确保试剂液体处于试管底部，且液体内部不含有气泡。放置试管-如果样本数量少于模块的孔位数，那么在放置试管时应尽 量将样本试管均匀地分布于模块的孔中，以确保运行时热盖能平稳地压在试管 的顶部。样本参数录入及分组设置在相应栏目分别输入样本序号、样本名称、样本ID、样本类型信息。程序运行选择“运行-运行操作-开始运行，执行程序。如果扩增程序中未选中荧光检测温度点，将会有如下提示，请确认程序是 否设置正确。退出运行 在运行过程中，选择“运行-运行操作 -退出运行”退出程序运行。3、

5、检测结果的保存及分析程序运行结束，如果有荧光采集数据并且荧光数据读取次数大于5次，将自动跳转到结果分析界面，并弹出保存荧光数据对话框。如果扩增程序没有保存，则程序运行结束后，软件默认按当前时间对程序运行结果进行默认命名进行提示保存。 软件默认保存到当前操作用户名目录下。如果误选取消，请在“文件 一文件操作一保存”或者”文件 一文件 操作一另存为“，进行检测结果的保存。检测结果的分析打开检测结果文件选择分析通道与要分析的组别设置，可以按自动 分析设置自动进行定量分析。如果需要手动进行分析设置，请将该分组“自动分析”复选框取消选择，然后调节“基线设置”和“阈值”设置。标准浓度设置通过点选“样本类型

6、”标准按钮进样本类型设置时,通道1 ( FAM 与通道2 (HEX样本类型同时被设置为“标准”，如果只设置其中 一个通道的样本浓度，另外一个通道样本浓度不进行设置，则进 行分析时，软件只针对设置标准浓度的通道进行样本浓度分析计 算。同一分组可以分别设置FAM?口 HEXM组标准浓度样本。首先设置待分析分组的至少2个已知同一通道的标准样本浓度值。自动分析进入“定量分析界面”-选择待分析荧光通道进行分析计算当前通道各样本浓度值。标准浓度计算需确认标准曲线的相关系数是否满足分析结果。若不满足要 求，请确认标准样本浓度设置是否正确。选择自动计算，则自动计算各孔位的样本浓度值与Ct值。通常标准品的标准曲

7、线相关系数绝对值应达到 0.98-1之间, 此实验结果才能认为实验结果有效。实际应用，请根据试剂操作说明书规定条件进行试剂状态的判定。手动分析当前通道手动分析，使“自动分析”复选框处于未选中状态。调节基线设置“开始”与“结束”循环数。观察样本曲线状态，选择线性 校准或取消线性校准。基线设置完成后，勾选“阈值设置”复选框，调节阈值数值或拖动阈值调 节线。阈值数值调整应高于噪声与阴性样本荧光最大值。调节后，软件自动计 算当前分组各孔浓度与Ct值。分析结果的保存分析数据的保存选择“文件一文件操作一保存”或者“文件一文件操作一另保为 对当前分析的数据结果进行保存。若需要对原始数据进行分析，可以将分析数

8、 据及原始数据导出到“ Excel ”进行处理。4、分析曲线的保存使用打印屏幕命令按键“PrtSc”对软件进行抓屏，在系统绘图板内粘帖保 存抓屏文件。5、析结果的打印、输出样本类型修改“样本参数”界面对样本类型进行修改，选中要修改样本类型孔位，点选 “样本类型”修改按钮。样本资料修改选择“报告一检验报告一样本资料”对样本资料信息进行添加修改。对需要打印的样本，打印复选框进行勾选。设置打印模板选择“报告-检验报告-报告模板”进行模板设置。如果不使用电脑缺省打印机设置，请指定打印输出的打印机。可以根据需要选择打印或不打印扩增曲线，默认为打印扩增曲线。打印扩增曲线时，包含分析选中的标准品扩增曲线。选择待打印样本资料如果样本资料未输入完整，请补充填入。在报告-通道选择中对需要打印 的样本进行勾选设置，完成后选择确定按钮进行设置信息保存。打印报表选择打印预览，确认打印选择是否正确。打印预览，如果有多页，请翻页查看各待打印样本信息。默认选中打印扩增曲线时的预览效果图。打印方法一在打印预览界面选择打印按钮。打印方法二选择“报告 打印”按钮。4、仪器维护保养每星期维护任务?归档或备份反应板文件?使用不脱毛的布块擦拭仪器表面每月维护任务：?执行计算机硬盘碎片整理程序其它维护任务：需要时执行以下维护任务，以解决遇到的问题：?去除样本块中的污染物5