影响沉淀琼脂扩散的因素

1、Word文档 影响沉淀琼脂扩散的因素 琼脂集中试验包括琼脂双向单集中试验和琼脂双向双集中试验，后者是最/常用的琼脂集中试验，一般用于抗体或抗原的定性检测，其原理是可溶性抗原与相应的抗体（抗血清）在琼脂凝胶中向四周自由集中，假如抗原和抗体相对应，则在二者比例适当处形成肉眼可见的白色沉淀线，反之则不会消失沉淀线。常用已知抗原检测未知的血清样本，也可用已知抗血清检测未知抗原样本。 1 琼脂集中试验的影响因素1.1 琼脂板的制备琼脂板的质量、浓度、黏度、厚度、湿度等都会影响琼脂集中试验的结果，琼脂浓度越低，则孔径越大，集中速度也会越快；假如琼脂浓度越大，那么琼脂的黏度也会随之增大，集中速度会相对减慢，

2、建议使用较好的琼脂（琼脂糖），最适浓度为1%，厚度约2.5毫米，留意倒热溶化琼脂液时不要产生气泡，而且空气中的湿度很低，琼脂中的水分简单蒸发，待琼脂冷凝后加盖，把平皿倒置，放在装有湿纱布的搪瓷盘中，防止水分蒸发，保证湿度。1.2 打孔打孔是琼脂集中试验中的关键，反应孔应现用现打，放在4冰箱中过夜后再使用。试验室常用梅花打孔器，然后用针头挑出内容物。用此种方法在打孔的过程中，留意挑出空内容物时避开将凝胶划破，否则可造成孔与孔之间产生裂痕，产生错误的试验结果。假如试验检测的样品数量不是许多，还可以将若干梅花打孔器先放在空平皿中，孔口朝下，向平皿中倒入稍冷却的热溶化琼脂液，之后快速并平稳地放入4冰箱

3、中，冷却后取出平皿，逐个轻轻拔出打孔器，依据试验需要重复此操作。打孔后用酒精灯轻烤平皿底部进行封底时，在酒精灯上来回几次，以平皿不烫手（微热即可）为宜，若是塑料平皿要留意烤的时间不要过长，以免变形，待琼脂刚刚溶化为止，防止琼脂板与平皿底部脱离导致阳性血清、被检血清及抗原相互串通，避开消失模糊的沉淀环，影响试验结果。1.3 加样在加样之前，首先在琼脂板上标记好试验日期及样品编号，加样过程中当心谨慎，每个样品加完后都要换枪头，避开产生小气泡，需要留意的是每孔会因受人工操作的影响在封底时各孔的容积不同，在加样时留意不要让样品溢出导致液体混合。假如大批量检测样品，必需将被检血清、阳性血清和抗原先后加入

4、一个梅花孔后再加入下一个梅花孔，防止加入的时间间隔太长而集中的时间不同进而影响抗原抗体结合及沉淀线的产生。1.4 判定结果当标准阳性血清和抗原孔之间只有一条明显致密线时，被检血清与抗原孔形成沉淀线，或阳性血清的沉淀线向相邻的被检血清的抗原侧偏弯，则被检血清为阳性。假如被检血清没有消失任何沉淀带，或消失的沉淀带与阳性对比沉淀带完全交叉者判为阴性。观看时需借助强光源，调整角度、方位直到阳性血清和抗原孔之间消失清楚白色沉淀线则试验成立，否则应重做。2 留意事项2.1 温度温度对整个试验也会有影响，制备琼脂板时溶化琼脂时需在水浴中进行，留意防止在加热过程中由于水分的蒸发而影响溶液的浓度，在琼脂中加入0.01%的硫柳汞防止细菌污染，避开fu败。在肯定条件下，温度越高集中越快，通常反应在037下进行，在试验中为保证沉淀线清楚度防止沉淀线变形，可在37下形成沉淀线，然后置于4条件下。2.2 时间集中时留意时间，时间过短不能消失沉淀线，时间太长会导致沉淀线解离或散开消失假阴性而影响试验结果，沉淀线的形成一般在24小时、48小时、72小时观看并记录，过久会消失沉淀线消逝。2.3 其他因素不规章的沉淀线可能是