PCR培训-终结版本-v1-0

1、PCR仪器的使用及注意事项HLA服务部 陈璐1PCR技术的原理1 2 39472高温变性 低温退火 适温延伸重复13步温度2535循环形成（）目的DNA片段5522条 变单 性链子链延伸扩增100万倍以上DNA加倍DNA单链与引物复性DNA双螺旋12345时间（min）PCR技术的操作以Bio-Rad S1000和ABI9700为例说明PCR仪的操作步骤主要仪器：普通PCR仪，微量移液器，高速冷冻离心机，电泳槽，凝胶成像系统，生物安全柜等。3Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程仪器使用记录本要放在仪器旁边4Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程仪器使用前记录仪器使用后记录Bio-

2、Rad S1000 PCR仪操作规程一、 Bio-Rad S1000 控制面板（键盘不显示）Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程二、新建KS文件夹，在其设置程序B011实验程序：B-01196 396 2571 4572 172 512 for ever-0.2/cycle 30 cycles 7Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程开机自检后进入主页面8Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程建立新文件夹:KS9Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程10Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程设置程序B011顶盖技术Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程Bi

3、o-Rad S1000 PCR仪操作规程13Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程使用之前需浏览程序Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程程序运行后需检查程序关闭前需检查17Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程四个头 PCR仪操作规程Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程三、设置程序A01实验程序：1） 95 595 303072 372 512 for ever57 35cycles 2） 95 595 303072 372 512 for ever60 35cycles 3）

4、95 595 303072 372 512 for ever63 35cycles Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程顶盖自己Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程23Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程旋转方向24Bio-Rad S1000 PCR仪操作规程五、小结：1.误关别人的程序。2.程序没运行。3.顶盖设置温度低，导致样品蒸収。4.程序被修改却没核对，导致程序跑错。5.需定期做期间核查，外借或返修回来的仪器要做仪器验证。6. 机器码放需有一定的距离。由于本机采用半导体双向控温技术，由机器内风机散热，故丌得堵塞仪器两侧

5、及底部的通风口，并应远离热源，避免将液体渗入仪器内部。正确的使用环境温度432，相对湿度20%80%，尽量避免使用4过夜，以免影响仪器的寿命。25ABI9700 PCR仪操作规程开机操作：打开PCR仪电源开关；向后平推PCR仪顶盖，放入PCR薄壁管。向前平推PCR仪顶盖，并均匀用力将反扣部分压下。26ABI9700 PCR仪操作规程一、 ABI9700 控制面板（键盘不显示）ABI9700 PCR仪操作规程二、新建DRB文件夹，在其设置程序ABC实验程序：ABC:96 3 96 2566 5072 130 962564 5072 13072512 forever10cycles24cycles

6、ABI9700 PCR仪操作规程开机自检后进入主页面ABI9700 PCR仪操作规程建立新文件夹:DRBABI9700 PCR仪操作规程设置程序ABCABI9700 PCR仪操作规程ABI9700 PCR仪操作规程ABI9700 PCR仪操作规程ABI9700 PCR仪操作规程关机操作：实验结束后点击Exit至出现主界面，关闭PCR仪电源开关；均匀用力将反扣部分抬起，向后平推PCR仪顶盖，叏出PCR薄壁管。向前平推PCR仪顶盖。三、操作出现的问题PCR扩增产物检测凝胶电泳缓冲液配方10TBE缓冲液(每升) ：Tris107.8g Boric Acid55.0gEDTA(Na2)8.2g10TAE缓冲液(每升) ：Tris48.4g 冰乙酸 11.42g 0.5mol/L E DTA20ml用电泳缓冲液制备1.5%琼脂糖凝胶，按每孔8ulPCR产物上样至胶中。100伏电泳30min