猪链球菌病诊断

1、关于猪链球菌病诊断第一张，PPT共三十五页，创作于2022年6月病原：1 猪链球菌2型（Streptococcus suis 2）2 马链球菌兽疫亚种（ Streptococcus equi subsp zooepidemicus )，旧称兽疫链球菌3 D、E、L、S群链球菌(Lancefield)兰氏血清学分群，链球菌分为20个血清群（A、B、C.V,I、J除外）第二张，PPT共三十五页，创作于2022年6月一、病原分离1 采样活猪：采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体病死猪：扁桃体、肺、肝、血液，有脑炎症状取脑组织，关节炎可取关节囊液第三张，PPT共三十五页，创作于2022年6月2 分离培养（1）培

2、养基：THB培养基、绵羊血或马血平板（2）培养条件：需氧兼性厌氧、37、pH7.2 猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低，后者需加3-5%的犊牛血清第四张，PPT共三十五页，创作于2022年6月二、临床诊断 主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。 但不同链球菌病原引起的症状类似，故该诊断不能用于确诊。第五张，PPT共三十五页，创作于2022年6月关节炎症状第六张，PPT共三十五页，创作于2022年6月败血症第七张，PPT共三十五页，创作于2022年6月1 染色镜检猪链球菌2型： 革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.0m，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳

3、性，菌体表面能形成荚膜。 二、微生物学诊断第八张，PPT共三十五页，创作于2022年6月马链球菌兽疫亚种： 革兰氏阳性球菌，直径0.51um，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。营养要求较高，在5%犊牛血清生长良好。根据类M蛋白抗原性的差异，该菌至少有15个血清型。第九张，PPT共三十五页，创作于2022年6月马链球菌兽疫亚种 猪链球菌2型菌（ 溶血）第十张，PPT共三十五页，创作于2022年6月图2 猪链球菌2型 (ZY05719)第十一张，PPT共三十五页，创作于2022年6月ATCC 35246株第十二张，PPT共三十五页，创作于2022年6月2 培养特性猪链球菌2型： 菌落形态 血

4、平板上呈灰白色小菌落，粘稠，2型在绵 羊血平板上呈溶血，马血平板则呈溶血。第十三张，PPT共三十五页，创作于2022年6月马链球菌兽疫亚种： 在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。 于5绵羊血琼脂（THA）培养基上培养24 h，大部分菌株形成34mm的粘液样大菌落，产生明显的溶血。小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左右。第十四张，PPT共三十五页，创作于2022年6月3 生化鉴定猪链球菌2型： 发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵 棉实糖、菊糖；不发酵甘露醇、山梨醇第十五张，PPT共三十五页，创作于2022年6月马链球菌兽疫亚种： 能水解精氨酸，发酵乳糖、水

5、扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。第十六张，PPT共三十五页，创作于2022年6月三、免疫学诊断1 玻板凝集实验 用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种只能用于定群 2 乳胶凝集实验 敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性第十七张，PPT共三十五页，创作于2022年6月3 免疫荧光猪链球菌2型： 用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察，但需用激光共聚焦显微镜。马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察第十八张，PPT共三十五页，创作于2022年6月MRP单抗介导FITC标

6、记SS2表面MRP的激光共聚焦图像 MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像第十九张，PPT共三十五页，创作于2022年6月 SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像 第二十张，PPT共三十五页，创作于2022年6月ELISA 常用链球菌多克隆抗体包被，以MRP或类M蛋白的单克隆抗体夹心，敏感性高，特异性较强。第二十一张，PPT共三十五页，创作于2022年6月四、分子诊断1多酶电泳法： 原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。用于不同型链球菌的分析第二十二张，PPT共三十五页，创作于2022年6月2 限制性酶切图谱分

7、析 原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。 用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴定第二十三张，PPT共三十五页，创作于2022年6月随机扩增多态DNA分析（RAPD） 用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。 可用于种或型的鉴定或分离株变异分析第二十四张，PPT共三十五页，创作于2022年6月PCR猪链球菌2型： mrp、ef、 cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测 cps2具有型特异性第二十五张，PPT共三十五页，创作于2022年6月bp970744622557 mrp, ef, sly, CPS 2 1

8、 2 3 4 51: HA9801; 2: ZY05719;3: Marker; 4,5: 阴性对照第二十六张，PPT共三十五页，创作于2022年6月250bp 500bp750bpM 1 22000bp1000bpMaker 1.HA 9801(cps2)2. ZY05719 (cps2)cps2第二十七张，PPT共三十五页，创作于2022年6月250bp 500bp750bp2000bpM 1 2 3 4ef， mrp， gdh，orf2Maker1. ef(626 bp) 2. mrp(316 bp)3. gdh(688 bp)4.orf2 (858 bp).第二十八张，PPT共三十五页

9、，创作于2022年6月250bp 500bp750bp1000bp2000bp250bp 500bp750bp1000bp2000bp1099bp1310bpM 1M 1 slyfbpsMaker 1. slyMaker1. fbps第二十九张，PPT共三十五页，创作于2022年6月第三十张，PPT共三十五页，创作于2022年6月1040bp100bp250bp 500bp750bp1000bp2000bpM 1 2 3M: DL-Marker 2000 1: ZY05719(gapdh) 2: HA9801 (gapdh) 3: 空白对照gapdh第三十一张，PPT共三十五页，创作于2022

10、年6月图8 orf 2 PCR检测结果1 marker; 24,713 PCR products of swine Streptococcus, 2 HA9801; 56 negative control第三十二张，PPT共三十五页，创作于2022年6月图11 PCR检测猪链球菌2型cps21. H2O; 2. SH0033; 3. 35246; 4. ZY05722; 5. ZG05464 ; 6. GH05458; 7. HA9802;.8. ZY05719 ; 9. HA9801 ; 10. YJ05465; 11. JDZ05802-1; 12. JR05730; 13. ZY05721; 14. 11611; 15. CHZ05806; 16. 260; M. Marker DL2000.bp387M16151413121110987 654321 1002502000750第三十三张，PPT共三十五页，创作于2022年6月1 2 3 4 5 6200010007505002501001 DL2000 market 2、3 PCR product of ATCC 352464 PCR product of streptococcus sui