医院新冠核酸检测“假阳性”防范措施

1、XXXX医院新冠核酸检测假阳性”防范措施一、出现“假阳性”的指征二、对“假阳性”的鉴别方法三、实验室污染“假阳性”发生原因及解决方案1、实验室结构的问题2、操作过程带入扩增产物3、生物安全柜可能存在核酸污染4、疫苗引起的“假阳性”新冠防控工作量日渐加大，实验室报告的任何一个阳性的结果，都 会引起巨大的连锁的反应，造成不必要的恐慌。如何避免“假阳性”， 同时也不能漏掉任何一个真阳性，是对专业检测机构的考验。最近发现 很多实验室出现假阳性多为来自于实验室标准品污染。亦有在对接种门 诊环境监测中发现环境被新冠病毒疫苗株污染的情况。如何鉴别及避免 这类假阳性的情况呢。一、出现“假阳性”的指征1、实验中

2、阴性对照、空白对照出现了 “翘尾”现象，甚至是明显 “阳性”扩增曲线。这种情况下实验环境被标准品污染的可能性比较大。2、样本初检阳性，但流行病学及临床资料不支持新冠的诊断，再 次采样呈阴性结果。这种结果有两种可能，一是样本被污染（污染来自 标准品、疫苗、病例标本），二是样本管理出错，张冠李戴。第一种错误来自实验操作环节，第二种错误出在样本流转环节。二、对“假阳性”的鉴别方法实验室出现任何可疑的阳性结果，都需要逐一排查实验流程存在的 问题，进行科学的鉴别：1、通过更换不同的核酸提取试剂，检测试剂，利用不同的扩增仪 进行反复验证。2、样本送不同的实验室进行比对试验。3、复采疑似病例鼻咽拭子、肛拭子

3、进行新冠核酸检测；采集血样 进行新冠抗体检测。4、利用提取的核酸样本直接进行扩增检测，取消反转录步骤，如 阳性说明存在污染。5、对样本进行高通量测序分析：如果样本中含有大量标准品片段或质粒载体片段，则有可能是发生 了标准品污染。若测序结果样本中含有新冠全序列，需要比对是自然毒 株还是疫苗株。若是疫苗株，则有可能是疫苗污染，进一步调查采样检测的全过程， 互相佐证。如果是自然毒株，而流行病学及临床资料又不支持，再次采 样及抗体又为阴性，则要考虑是否样本管理出错，调查同批次同一天的 样本是否有阳性检出，是否存在阳性样本污染的情况，有必要对同批次 甚至同一天的检测样本重新进行采样复核。三、实验室污染“

4、假阳性发生的原因及解决方案1、实验室结构的问题目前新建的PCR实验室多采用临床基因扩增实验室的4区或3区 结构，从试剂准备区到样本制备区，再到扩增区和产物分析区。大部分 实验室各分区设计了净化及压力梯度的递减，这样设计的原理是为了防 止扩增区的PCR产物回流污染上游的操作环节。维持负压梯度的前提 条件是密封性必须良好，但如果工程质量不过关，在各区之间的围护结 构如传递窗、隔断插座、墙体接口等部位存在漏气的缝隙，那么就会存 在核酸污染风险或生物安全风险。一是压力失衡，扩增区压力大于样本制备区，两区之间密封不严， 会导致扩增产物逆向回流至样本制备区而污染标本。二是压力梯度正常，两区之间密封不严，虽

5、不会发生核酸污染，但 样本制备区的潜在生物污染可随压力梯度泄漏至扩增区，引发生物安全 风险。解决方案：那么如何避免这类情况发生呢？首先一定要严把工程质量关，杜绝 分区之间漏气的情况。时常检查实验室传递窗及周围，两分区之间互通 的墙壁插座，墙壁、地面等部位是否存在缝隙，及时妥善封闭。经常观 察各区的压力表、计算各区之间的压差是否在正常范围之内，如发现异 常及时处理。扩增区对完成的PCR反应管密闭丢弃在医疗垃圾桶，严禁 开盖。比较理想的结构是在独立于PCR实验室的二级生物安全实验室进 行核酸提取及加样，然后将加样的反应体系转运至扩增室进行下一步的 实验。这样既可以避免扩增产物对样本制备过程的污染，

6、也可以避免样 本制备区泄漏的生物安全风险。2、操作程序不严谨，将扩增产物带入样本制备及加样区域新冠PCR实验室每天在大量重复同一个试验操作，不可避免的会 在扩增区产生高浓度的标准品核酸污染。PCR实验室各分区的操作器材、 防护用品如果混用，很容易造成对样本的污染。阳性标准品与样本混合 存放，也有可能造成污染。解决方案：严格按照PCR分区操作，各分区的防护服、手套、消毒喷壶、离心 机、加样枪等坚决不能混用，特别要注意一些清洁用品，如拖把、抹布 等更是不能混用。3、生物安全柜可能会存在核酸污染还有一个细节，目前各实验室加样操作均在生物安全柜里进行，在 阳性标准品的加样过程中，吹吸枪头会产生气溶胶，

7、有可能进入生物安 全柜的通气循环，而核酸片段是可以通过生物安全柜的高效过滤器的， 在每天进行大量试验的情况下，日积月累有可能造成生物安全柜的核酸 污染，进而引起假阳性。解决方案：加样操作时待检样本核酸产物和阳性质控品可放在不同区域进行 操作，阳性质控品加样可不在生物安全柜内操作。若生物安全柜发生核 酸污染，则需要更换高效过滤器，或使用可靠的核酸清除降解试剂进行处理。4、疫苗引起的“假阳性”新冠病毒灭活疫苗包含了新冠病毒的全序列。在接种过程中，医务 人员进行疫苗针头排气会产生气溶胶，疫苗液滴进入室内空气，进而逸 散至工作台面、地面等环境，这是一种正常且不可避免的情况。假如从 事新冠疫苗接种的工作

8、人员再去参与采集新冠检测、采样工作，管理不 善就有可能将接种点的器具、防护用品等与采样点混用，都有可能造成 采样的标本污染，此时如果病例恰好有发热、咳嗽等症状，又有中高风 险旅行史，这种情况下就很难判断是真阳性还是假阳性。解决方案：新冠疫苗接种点要远离采样点;新冠疫苗接种人员和采样工作人员 坚决不能兼职操作；在接种工作台面上铺一次性无纺布，定期清理；按 压的棉签不要带走，按医疗废物在接种点统一收集处理；发生安瓿破裂 等现象及时处理，防止污染扩散；医疗机构环境监测避免在接种点采样 检测。新冠病毒核酸检测实验室是整个防控工作中极为重要的一环，实验 结果决定着后续工作的力度与方向。为应对可能的大规模核酸检测，各 级医疗机构、疾控机构、第三方实验室等紧急建设、扩容了