免疫室SOP作业指导书

1、第 PAGE52 页 共 NUMPAGES52 页免疫室SOP作业指导书1主题内容 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定一、目的：规范 乙型肝炎病毒表面抗原 测定的标准操作程序，确保 乙型肝炎病毒表面抗原 测定的结果准确有效。二、适用范围：在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的 乙型肝炎病毒表面抗原 。三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有 3 亿乙肝病毒携带者。感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。HBsAg 是乙肝病毒颗粒（HBV）的外壳成分，为大小不一的多肽

2、。感染乙型肝炎病毒后，机体会产生各种不同模式的抗原、抗体血清学免疫应答反应。通过检测这些标志物，不仅可以诊断感染，而且还可以判断疾病的进程和预后。HBsAg 是 HBV 感染后第一个标志物，是提示样本是否有潜在传染性的最好的间接指标。四、方法原理本产品采用双抗体夹心法原理进行检测。用抗-HBs 抗体包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记的抗-HBs 抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-抗体-酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与 HBsAg含量成正比。五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 1h；

3、对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 0.5h，离心条件 10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件 10000g/min，10min。抗凝管推荐使用肝素作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂。5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。25.3. 溶血或脂血的样本不能用于测定。5.4.样本收集后在室温放置不可超过 8 小时；如果不在 8 小时内检测需将样本放置在 28的冰箱中；若需 48 小时以上保存或运输，则应冻存于-20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。5.5.避免反复冻融。

4、使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：AutoLumo A2000 化学发光检测仪7.2.试剂：AutoLumo A2000 专用 乙型肝炎病毒表面抗原 试剂7.2.1.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。7.2.2.试剂盒于 28储存，有效期 12 个月。7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用 1 个月。7.2.5.试剂盒可适应 1 周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。7.2.6.1. 试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物）竖直向

5、上存放，在 2 10C 环境下冷藏保存 2 小时后，才可上机使用。首次使用后，机载或在 2 10C 环境下稳定期为 28 天。7.2.6.2. 校准品开瓶后保存于28C，稳定期可维持1个月；若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20冻存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。八、检验方法8.1. 消耗品检查：8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。8.1.2. 参考相应的仪器系统操作说明。38.2. 试剂包装载：8.2.1. 试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成份，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。8.2.2. 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参

6、数。8.2.3. 如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。8.2.4. 参考相应的仪器系统操作说明。8.3. 测试：8.3.1. 将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为 150l。8.3.2. 装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。8.3.3. 选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。8.3.4. 参考相应的仪器系统操作说明。8.4. 定标：8.4.1. 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。8.4.2. 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。8.4.3. 将校准品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。8.4.4. 装载样本架，在仪器软件界面中输入定标

7、信息。8.4.5. 选择“运行”开始测试，生成定标曲线。8.4.6. 定标曲线有效期为 28 天。8.4.7. 参考相应的仪器系统操作说明。8.4.8. 出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成：8.4.8.1. 质控结果经重复测定后仍然超出范围；8.4.8.2. 试剂盒或发光底物液的批号更改；8.4.8.3. 超出定标曲线的有效期限；8.4.8.4. 仪器重要部件更换或维修。8.5. 质控：8.5.1. 使用至少两个分析p 物水平的质控品进行质控。8.5.2. 出现以下情况需要进行质控：8.5.2.1. 测试试剂盒使用超过 24 小时；8.5.2.2. 更换新的试剂盒；48.5.2.3. 重新

8、生成定标曲线；8.5.2.4. 停机。8.5.3. 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。8.5.4. 质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。8.6. 稀释8.6.1. 使用手工稀释或仪器自动稀释功能，仪器自动稀释的最大比例为1:100。8.6.2. 手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释，将得到的检测结果乘以稀释倍数计算最终结果。8.6.3. 选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪器系统操作说明以及帮助系统。8.6.4. 稀释后的样本含量应不低于 0.05IU/ml。8.7.结果计算：选择适当的曲线拟合方式，本试剂盒推荐

9、采用四参数拟合方式，以校准品浓度值为 x 轴，以校准品发光强度 log 值为 y 轴建立定标曲线。根据待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。仪器自动操作系统可通过存储的定标曲线以及样本测试得到的发光值自动计算样本测试结果。九、参考范围检测 1040 例样本，用 ROC 曲线方法确定正常参考值为0.05IU/ml；建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，供临床医生参考。十、检验结果的解释10.1.用本试剂盒检测结果浓度值为 0.040.06IU/ml 的弱反应性可疑样本，建议复孔重新测定，如果双孔复查浓度值均小于 0.05IU/ml，结果判为阴性，

10、如果单份或双份测定不低于 0.05IU/ml，结果判为有反应性，有条件的实验室建议做中和确证实验，同时动态观察。10.2. 本试剂盒测定范围为 0.05250IU/ml，浓度值大于 250IU/ml 的样本，其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果。如果要获得其更准确的结 5果，需对样本进行稀释后重新测定，推荐稀释比例为 1/500，使用系统通用样品稀释液进行稀释。稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并增大稀释比例。10.3. 由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室

11、在检测报告中注明所用试剂特征。系列监测中，如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。十一、检验方法的局限性11.1. 本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，临床诊断应与临床检查、病史及其他检测相结合。11.2. 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。此类样本不适合用本试剂盒进行检测。11.3. 溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。十二、产品性能特征12.1. 阴性参考品符合率：检测国家阴性参考品 20 份，不出现假阳性。12.2.阳性参考品符合率：检测国家阳性参考品 3 份，不出现假阴性。12.3. 最低检出量：用国家灵敏度参考品

12、进行检测，符合相应参考品要求。12.4. 精密性：10 孔平行检测浓度值为 0.5IU/ml 样本，CV%15.0%；10孔平行检测浓度值为 1.5IU/ml 样本，CV%10.0%。12.5. 线性：在 0.05IU/ml250IU/ml 范围内，线性相关系数（r）不低于0.9900。12.6. 分析p 特异性：与抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗体无交叉反应。2.5mg/ml 血红蛋白、200mg/L 胆红素、20g/L 甘油三酯和500mg/dl 胆固醇对检测结果无显著干扰。十三、【参考文献】：p 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD pract

13、ice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and6 current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2022, 11:97-107.合出版社.4.陶义训, 1997 年第二版,免疫学与免疫学检验.人民卫生出版社.5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝

14、炎防治方案. 中华传染病杂志, 2022, 19:56-62.主题内容 乙型肝炎病毒表面抗体定量测定一、 目的：规范 乙型肝炎病毒表面抗体 测定的标准操作程序，确保 乙型肝炎病毒表面抗体 测定的结果准确有效。二、 适用范围：在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的 乙型肝炎病毒表面抗体 。三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有 3 亿乙肝病毒携带者。感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈

15、的象征；全程（3 针）疫苗接种结束后 1 个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs)的浓度，能够判定免疫效果。关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值100mIU/ml，具有足够的保护作用。肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值100mIU/ml 为宜。四、方法原理7本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正

16、比。五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 0.5h，离心条件 10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件 10000g/min，10min。抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂。5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。5.3. 溶血或脂血的样本不能用于测定。5.4. 样本收集后在室温放置不可超过 8 小时；如果不在 8 小时内检测需将样本放置在 2

17、8的冰箱中；若需 48 小时以上保存或运输，则应冻存于-20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于 AutoLumo A2000 化学发光检测仪。7.2.试剂：AutoLumo A2000 专用 乙型肝炎病毒表面抗体 试剂7.2.1.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。7.2.2.试剂盒于 28储存，有效期 12 个月。7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用 1 个月。7.2.5.试剂盒可适应 1 周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，

18、避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。7.2.6.1. 试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物）竖直向上存放， 8在 2 10C 环境下冷藏保存 2 小时后，才可上机使用。首次使用后，机载或在 2 10C 环境下稳定期为 28 天。7.2.6.2. 校准品开瓶后保存于28C，稳定期可维持1个月；若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20冻存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。八、检验方法8.1. 消耗品检查：8.1.1. 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。8.1.2. 参考相应的仪器系统操作说明。8.2. 试剂包装载：8.2.1. 试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成份，避

19、免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。8.2.2. 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。8.2.3. 如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。8.2.4. 参考相应的仪器系统操作说明。8.3. 测试：8.3.1. 将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为 50l。8.3.2. 装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。8.3.3. 选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。8.3.4. 参考相应的仪器系统操作说明。8.4. 定标：8.4.1. 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。8.4.2. 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。8.4.3. 将校准

20、品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。8.4.4. 装载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。8.4.5. 选择“运行”开始测试，生成定标曲线。8.4.6. 定标曲线有效期为 28 天。8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。98.4.8. 出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成：8.4.8.1. 质控结果经重复测定后仍然超出范围；8.4.8.2. 试剂盒或发光底物液的批号更改；8.4.8.3. 超出定标曲线的有效期限；8.4.8.4. 仪器重要部件更换或维修。8.5. 质控：8.5.1. 使用至少两个分析p 物水平的质控品进行质控。8.5.2. 出现以下情况需要进行质控：8.5.2.1.

21、 测试试剂盒使用超过 24 小时；8.5.2.2. 更换新的试剂盒；8.5.2.3. 重新生成定标曲线；8.5.2.4.停机。8.5.3. 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。8.5.4. 质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。8.6. 稀释8.6.1. 使用手工稀释或仪器自动稀释功能，仪器自动稀释的最大比例为1:100。8.6.2. 手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释，将得到的检测结果乘以稀释倍数计算最终结果。8.6.3. 选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪器系统操作说明以及帮助系统。8.6.4. 稀释后的样本

22、含量应不低于 5mIU /ml。8.7.结果计算：选择适当的曲线拟合方式，本试剂盒推荐采用四参数拟合方式，以校准品浓度值为 x 轴，以校准品发光强度 log 值为 y 轴建立定标曲线。根据待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。仪器自动操作系统可通过存储的定标曲线以及样本测试得到的发光值自动计算样本测试结果。九、参考范围10正常参考值：10mIU/ml建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，供临床医生参考。十、检验结果的解释10.1.用本试剂盒检测结果浓度值为 8.012.0 mIU/ml 的弱反应性可疑样本，建议双份重新测定，如果双份复查浓度值均

23、小于 10 mIU/ml，结果判为阴性，如果单份或双份测定不低于 10 mIU/ml，结果判为阳性，同时建议动态观察。10.2. 本试剂盒测定范围为 51000mIU/ml，浓度值大于 1000mIU/ml 的样本，其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果。如果要获得其更准确的结果，需对样本进行稀释后重新测定，推荐稀释比例为 1/100，使用系统通用样品稀释液进行稀释。稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并增大稀释比例。10.3. 由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实

24、验室在检测报告中注明所用试剂特征。系列监测中，如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。十一、检验方法的局限性11.1.本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，临床诊断应与临床检查、病史及其他检测相结合。11.2. 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。此类样本不适合用本试剂盒进行检测。11.3.溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。十二、产品性能特征12.1.符合率：与 SFDA 批准的试剂平行检测 1024 份临床样本，阴性符合率99.58%，阳性符合率 99.02%，总符合率 99.41%。12.2.最低检出限：10mIU/ml

25、。1112.3.精密性：10 孔平行检测浓度值为 10mIU/ml 样本，CV%15.0%；10 孔平行检测浓度值为 100mIU/ml 样本，CV%10.0%。12.4. 线性：在 51000mIU/ml 范围内，线性相关系数（r）不低于 0.9900。12.5. 分析p 特异性：与抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗体无交叉反应。2.5mg/ml 血红蛋白、200mg/L 胆红素、10g/L 甘油三酯和 500mg/dl胆固醇对检测结果无显著干扰。12.6. HOOK 效应：测定 HBsAb 浓度值为 30000mIU/ml 的样本，未出现 HOOK效应引起的假阴性结果

26、。十三、【参考文献】：p 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, andcurrent and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2022, 11:97-107.合出版社.4.陶义训, 1997 年第二版,免疫学

27、与免疫学检验.人民卫生出版社.5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案.主题内容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗原 定量测定一、 目的：规范 乙型肝炎病毒 e 抗原 测定的标准操作程序，确保 乙型肝炎病毒 e 抗原测定的结果准确有效。二、 适用范围：在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的 乙型肝炎病毒e 抗原 。三、临床意义乙型肝炎病毒 e 抗原（HBeAg），一般通称 e 抗原。它乙型肝炎病毒的核心，是核心抗原的亚成分，或是核心抗原裂解后的产物，是可溶性蛋白 1 。当核心抗原裂解时，可溶性蛋白部分（即 e 抗原）就溶于血清中，存 12在于

28、血液循环中。有研究表明，在 PegIFN2a 治疗过程中，HBeAg 水平对乙肝治疗应答有较好的预测价值 2 。许多专家关注聚乙二醇干扰素治疗过程中HBeAg 或 HBsAg 浓度的动态变化，认为这种量的变化往往是抗原消失或血清转换的前提，具有疗效预测作用。对于乙肝治疗过程中 HBeAg 和 HBsAg浓度明显下降的患者应鼓励继续治疗，以争取获得更好的疗效 3 。四、 方法原理本产品采用双抗体夹心法原理进行检测。用抗-HBe 制备磁微粒，辣根过氧化物酶标记抗-HBe 制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，该复合物催化发光底物液发出光子，发光强度与 HBeAg 的含量成正比。

29、五、标本的采集与处理5.1. 采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 0.5h，离心条件 10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件 10000g/min，10min。抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂。5.2. 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去。5.3. 严重溶血、脂血或浑浊的样本不能用于测定。5.4. 样本收集后在室温放置不可超过 8 小时；如果不在 8 小时内检测需将样本放置在 28的冰箱中；若需

30、 48 小时以上保存或运输，则应采用正确离心条件提取血清或血浆冻存于-20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于 Lucy2、Lumo、AutoLumo A2000 化学发光检测仪。7.2.试剂：AutoLumo A2000 专用 乙型肝炎病毒 e 抗原 试剂7.2.1.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。7.2.2.试剂盒于 28储存，有效期 12 个月。137.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用 1 个月。7.2.5.试剂盒可适应

31、 1 周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。7.2.6.1. 试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物）竖直向上存放，在 210C 环境下冷藏保存 2 小时后，才可上机使用。首次使用后，机载或在 2 10C 环境下稳定期为 28 天。7.2.6.2. 要进行分装，于-20冻存，但应避免反复冻融。八、检验方法8.1. 消耗品检查：8.1.1. 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。8.1.2. 参考相应的仪器系统操作说明。8.2. 试剂包装载：8.2.1. 试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。8.2.2. 仪

32、器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。8.2.3. 如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。8.2.4. 参考相应的仪器系统操作说明。8.3. 测试：8.3.1. 将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为 50l。8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。8.3.3. 选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。8.3.4. 参考相应的仪器系统操作说明。8.4. 定标：8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。8.4.2. 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。8.4.3. 将校准品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。8.4.4. 装

33、载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。148.4.5. 选择“运行”开始测试，生成定标曲线。8.4.6. 定标曲线有效期为 28 天。8.4.7. 参考相应的仪器系统操作说明。8.4.8. 出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成：8.4.8.1. 质控结果经重复测定后仍然超出范围；8.4.8.2. 试剂盒或发光底物液的批号更改；8.4.8.3. 超出定标曲线的有效期限；8.4.8.4. 仪器重要部件更换或维修。8.5. 质控：8.5.1. 使用至少两个分析p 物水平的质控品进行质控。8.5.2.出现以下情况需要进行质控：8.5.2.1. 测试试剂盒使用超过 24 小时；8.5.2.2.更换新

34、的试剂盒；8.5.2.3. 重新生成定标曲线；8.5.2.4. 停机。8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。8.5.4. 质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。8.6. 稀释8.6.1. 使用手工稀释或仪器自动稀释功能，仪器自动稀释的最大比例为1:100。8.6.2. 手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释，将得到的检测结果乘以稀释倍数计算最终结果。8.6.3. 选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪器系统操作说明以及帮助系统。8.7.结果计算：选择适当的曲线拟合方式，本试剂盒推荐采用四参数拟合方式，以校准品浓

35、度值为 x 轴，以校准品发光强度值的 log 值为 y 轴建立定标曲线。根据待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。仪器自动操作系统可通过 15存储的定标曲线以及样本测试得到的信号值自动计算样本测试结果。九、参考范围检测 500 例乙肝患者样本和 500 例正常人样本，用 ROC 曲线方法确定正常参考值为lt;0.1PEI U/ml；建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，供临床医生参考。十、检验结果的解释10.1. 用本试剂盒检测结果为参考值附近等可疑样本，建议重新测定，动态观察。10.2. 由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同

36、一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在发给临床医生的检测报告中注明所用试剂特征。系列监测中，如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。10.3. 根据 WHO 文献报道 4 ，1PEI U/ ml1.05IU/ml。十一、检验方法的局限性11.1. 本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。11.2. 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果，必须结合患者病史

37、，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。11.3. 严重溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。十二、产品性能特征12.1. 阴性参考品符合率：符合中国食品药品检定研究院阴性参考品的要求；12.2. 阳性参考品符合率：符合中国食品药品检定研究院阳性参考品的要求；12.3. 最低检出量：符合中国食品药品检定研究院最低检出量参考品的要求；12.4. 空白限：不大于 0.05PEI U/ml；12.5. 线性：在 0.1200PEI U/ml 范围内，线性相关系数 r0.9900；12.6. 准确性：测定结果在规定范围内；1612.7. 分析p 特异性：与 HIV 抗体、HCV-IgG

38、 抗体、HAV-IgM 抗体无交叉反应。12.8. 精密度：变异系数不高于 15.0%；12.9. 干扰物质：40mg/dl 胆红素、2.5mg/ml 血红蛋白、500mg/dl 甘油三酯对检测结果无显著影响；12.10. 抗凝剂的影响：使用肝素抗凝的血浆对检测结果无显著影响；12.11. HOOK 效应：测定含量为 1600PEI U/ml 的样本，不会出现 HOOK 效应；12.12. 方法学对比：与 SFDA 批准上市的试剂盒对比检测 1119 份临床样本，阴性符合率 100%，阳性符合率 99.23%，总体符合率为 99.73%。十三、【参考文献】：p 1.Lok ASE, McMah

39、on BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Moucari R, Mackiewicz V, Lada O, et al. Early serum HBsAg drop: a strongpredictor of sustained virological response to pegylated interferon alfa-2a inHBeAg-negative patients.Hepatology,2022,49:1151-1157.3.干扰素治疗慢性乙

40、型肝炎专家讨论组. 干扰素治疗慢性乙型肝炎专家建议J.中华传染病杂志, 2022, 25(10): 577-583.4.Ante, Reissinger, Peter, et al. Collaborative Study to Establish a WorldHealthOrganization International Standard for Hepatitis B e Antigen (HBeAg)J.Expert Committee on Biological Standardization, 2022, (2228):1-37主题内容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗体 定量测定17

41、一、 目的：规范 乙型肝炎病毒 e 抗体 测定的标准操作程序，确保 乙型肝炎病毒 e 抗体测定的结果准确有效。二、 适用范围：在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的 乙型肝炎病毒e 抗体 。三、临床意义乙型肝炎病毒（HBV）属嗜肝 DNA 病毒科, 具有明显的种属及嗜肝特性（尽管其亦可感染肝以外的组织、器官或细胞，如脾、睾丸、人外周血单个核细胞等），可致持续性病毒感染。HBV 的感染导致血浆中出现特异性的乙肝病毒 e 抗体及其它一系列特异性的血清学标志物。e 抗体是乙型肝炎病毒e 抗体的简称（抗-HBe），它是由 e 抗原刺激人体免疫系统产生出来的特异性抗体，这种

42、特异的 e 抗体能够和 e 抗原结合。四、方法原理本产品采用竞争法原理进行检测。用 e 抗体和 e 抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记 e 抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与 e 抗体的含量成反比。五、标本的采集与处理5.1. 采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应 37孵育至少 0.5h，离心条件 10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件 10000g/min，10min。抗凝管推荐使用肝素钠作为

43、抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂。5.2. 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。5.4.样本收集后在室温放置不可超过 8 小时；如果不在 8 小时内检测需将样本放置在 28的冰箱中；若需 48 小时以上保存或运输，则应冻存于-20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。六、标本拒收标准181）严重溶血、脂血2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于 AutoLumo A2000 化学发光检测仪。7.2.试剂：AutoLumo A2000 专用 乙型肝炎病毒 e 抗体 试剂7.2.1

44、.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。7.2.2.试剂盒于 28储存，有效期 12 个月。7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用 1 个月。7.2.5.试剂盒可适应 1 周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物）竖直向上存放，在 2 10C 环境下冷藏保存 2 小时后，才可上机使用。首次使用后，机载或在 2 10C 环境下稳定期为 28 天。7.2.6.2. 阴阳性对照开瓶后保存于28C，稳定期可维持1个月；若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20冻

45、存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。7.2.6.3. 试剂在 2 8C 保存可稳定至标签上所标示的有效期。7.3.质控液：推荐使用安图配套质控品或第三方质控品 BioRAD QC 八、检验方法8.1. 消耗品检查：8.1.1. 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。8.1.2. 参考相应的仪器系统操作说明。8.2. 试剂包装载：8.2.1. 试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成份，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。8.2.2. 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。198.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。8.2.4. 参考相应的仪器

46、系统操作说明。8.3. 测试：8.3.1. 将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为 50l。8.3.2. 装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。8.3.3. 选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。8.3.4. 参考相应的仪器系统操作说明。8.4. 定 Cutoff 值8.4.1. 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。8.4.2. 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。8.4.3. 将阴阳性对照转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。8.4.4. 装载样本架，在仪器软件界面中输入 Cutoff 值信息。8.4.5.选择“运行”开始测试，生成 Cutoff 值

47、。8.4.6. Cutoff 值有效期为 28 天。8.4.7. 参考相应的仪器系统操作说明。8.4.8. 出现以下情况需要重新生成 Cutoff 值：8.4.8.1. 质控结果经重复测定后仍然超出范围；8.4.8.2. 试剂盒或发光底物液的批号更改；8.4.8.3.超出 Cutoff 值有效期限；8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。8.5. 质控：8.5.1. 使用至少两个分析p 物水平的质控品进行质控。8.5.2.出现以下情况需要进行质控：8.5.2.1. 测试试剂盒使用超过 24 小时；8.5.2.2. 更换新的试剂盒；8.5.2.3. 重新生成 Cutoff 值；8.5.2.4 停

48、机。8.5.3. 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。208.5.4. 质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。8.6.结果计算：有效性判断：8.6.1.阴性对照孔平均发光值/阳性对照孔平均发光值大于 3；8.6.2. 阴性对照各孔相对发光强度 CV%不超过 10%（如 CV%超过10%，则删除不平行点直到 CV%小于 10%或重新实验）。九、参考范围S/CO=待测样本发光值/ Cutoff 值；当 S/COgt;1.00 时，结果判为阴性；S/CO1.00 时，结果判为阳性。十、 检验结果的解释10.1. 用本试剂盒检测结果 COI 为 0

49、.801.20 的弱反应性可疑样本，建议复孔重新测定，如果双孔复查 COI 均大于 1.00，结果判为阴性，如果单孔或复孔测定不大于 1.00，结果判为阳性，同时建议动态观察。10.2. 由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在检测报告中注明所用试剂特征。系列监测中，如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。十一、检验方法的局限性11.1. 本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，临床诊断应与临床检查、病史及其他检测相结合

50、。11.2. 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。此类样本不适合用本试剂盒进行检测。11.3. 溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。十二、产品性能特征12.1.符合率：与 SFDA 批准的试剂平行检测 1024 份临床样本，阴性符合率98.98%，阳性符合率 98.8%，总符合率 98.93%。12.2.最低检出限：检定系列国家最低检出限参考品或经国家参考品标化的企 21业最低检出限参考品，结果符合相应参考品的要求。12.3.精密性：10 孔平行检测 0.5 PEI U/ml 样本，CV%10.0%；10 孔平行检测 5 PEI U/ml 样本，CV%20.0%。12.

51、4. 分析p 特异性：与抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗体无交叉反应。1.25mg/ml 血红蛋白、200mg/L 胆红素、20g/L 甘油三酯和500mg/dl 胆固醇对检测结果无干扰。十三、【参考文献】：p 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and