血清乙型肝炎病毒e抗原检测ELISA-检验科免疫室作业指导书

1、【实用】检验科SOP文件药海无涯学无止境专注医学领域血清乙型肝炎病毒e抗原检测ELISA.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝 e抗体（HBeAb）,配以酶标记抗原（HBeAb-HRP及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或 血浆）中乙肝e抗原（HBeAg）。.标本采集采集前病人准备：受检者应空腹标本种类：血清或血浆标本要求：采集病人静脉血 3ml （可用EDT砒凝），室温放置 不超过4小时，分离血清备用。.标本储存：2-8 C保存不应超过1周，-20 C不应超过3个月，-70 C 长期保存，应避免反复冻融。.标本运输：密封，室温运输。.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜

2、作 此项检测。.试剂试剂名称：乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。包装规格：96Test/Kit试剂盒组成：HBeAg微孔板，HBeAg酶标记抗原，HBeAg阳性对照血清，HBeAg 阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物 A,底物B,终止液，封口膜，自封袋。试剂储存条件及有效期：2-8C避光保存，有效期9个月。.仪器设备仪器名称：自动酶标仪仪器厂家：Rayto仪器型号：RT-2100C.操作步骤平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25C）,微孔板 开封后，余者及时以自封袋封存。配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀 （如有晶体应充分溶解），浓 缩洗涤液和蒸储水或去

3、离子水按1:19稀释后使用。编号：将微孔条固定于支架，按序编号。加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50 l于相应孔中。力口酶：分别在每孔中加入酶标记抗体 50 1,轻拍混匀。温育：置37c温育60分钟，室温平衡5分钟。洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60 秒的浸泡时间）。显色：每孔加入底物 A、B各50 l,轻拍混匀，置37c暗处15 分钟。终止：每孔加终止液50 l,混匀。测定：用酶标仪单波长 450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并录结果）。.结果判断与分析临界值（C.O.）的计算：临

4、界值=阴性对照孔OD值NX 2.1,阴 性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBeAg阳性样品OD值S/C.O1者为HBeAg阴性.质量控制:每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测，S/CO值 应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度 是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。.参考范围：阴性或阳性.临床意义：HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具 有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。.操作性能：灵敏度高，特异性好。.方法局限性：样品显色深浅与样品中抗原的含

5、量没有一定正相 关。.注意事项每板建议设阴阳性对照血清各两孔， 设空白对照时，不加样品 及酶标记抗体，其余各步相同。洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加 前应弃去12滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。所有样品都应按传染源处理。封口膜使用说明微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可 以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免 影响其透光性。微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验 带来的非预期的影响。不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证 所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判 读者，应留样待系统正常后复查。.参考文献：