分子遗传学复制

1、关于分子遗传学复制第一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 滚环复制的电镜照片第三张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 哪些DNA进行滚环复制?真核rDNA的扩增,F因子DNA的转移,裂解途经的复制, X174,M13.G4等单链环状DNA噬 菌体 第二阶段复制都是进 行滚环复制的.第四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第五张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第六张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第七张，PPT共三十九页，创作于2022年6月二.DNA末端起始复制线性双链DNA的复制有的是从一端开始的: 腺病毒（A

2、denovirus） 29 DNAs 脊髓灰质病毒（poliovirus)腺病毒DNA全长35937 bp,线性双链，两端各有反向重复顺序103162 bp，两末端各有50 bp为复制起点。其复制是以单链置换（strand displacement）形成一个大的茎环或叫平锅形结构来进行的。第八张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第九张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十张，PPT共三十九页，创作于2022年6月三.复制的终止1.E.coli的复制终止现已发现有两个终止区域（terE,D,A和ter C,B），位于相遇点的另一侧100Kb处。每一终止顺序对某一方向移动的复制叉来说是

3、特异的。ter顺序有一个23bp的区域，在体外可导致复制的终止，但其功能显示了一定的方向性。终止需要tus(terminus utilization substance)基因的产物Tus(36kD)， Tus能识别ter保守顺序，并阻止复制叉继续前进。ter-Tus复合物可能通过抑制螺旋酶来实行终止第十一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十三张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第六节 复制的过程一.半不连续复制第十四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月E.colidUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为

4、DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。尿嘧啶N-糖苷酶（uracil N-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinic or apyrimidinic ，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。第十五张，PPT共三十九页，创作于2022年6月以下实验证实了这个解释：(1)在dut -突变体（dUTPase缺失）中冈崎片段比在dut +中为短。这是因为U掺入机会增加；(2)在ung- （尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突变体中，新合成的DNA约有一半由片段组成。(3)因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现

5、AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。在dut-, ung-双突变体中，结果和实验（2）相同，更进一步证实了此推测。第十六张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十七张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十八张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十九张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二十张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二十一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二十二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二十三张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二十四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月酵母的自主复制区ARS(

6、autonomously replicationg sequence)发挥复制起点的功能，但是过量的。酵母染色体的着丝粒附近为ARS1序列ARS1分为A,B,C三个功能区, A,B起主要作用,C起次要作用。A区为15bp,其中11个保守，称ACS (ARS consensus sequence)。有复制起始子的功能B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区。B3是ABF1（ARS-binding factor 1）结合区，第二十五张，PPT共三十九页，创作于2022年6月酵母的复制第二十六张，PPT共三十九页，创作于2022年6月ORC：由6个亚基组成相当于Dna A和 的O蛋白，与 A/

7、B1结合，结合于游离的DNA Cdc6:相当于DnaC,及的P蛋白，使Mcm蛋白结合到复合体上。此对在Origin上起始复制是必须的。 Mcm: DnaB 螺旋酶。即 licensing factorABF1（转录因子）结合于B3第二十七张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二十八张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 原核和真核生物复制体系的比较E.coli SV40/人 酵母 功能 DnaA O T抗原 ORC 起始蛋白 DnaB DnaB T抗原 MCM 解旋酶 DnaC P ? Cdc6 装配因子 DnaG DnaG Pol-引发酶 Pol-引发酶 引发酶 Pol的 亚基 P

8、ol Pol,Pol 聚合酶 Pol的亚基 Pol Pol,Pol 校正 Pol的亚基 PCNA PCNA 滑动钳 复合体 RF-C RF-C 滑动钳装配器 SSB RF-A RF-A 单链结合蛋白第二十九张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第三十张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第三十一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 Pvu Bg1 Bam H1 Bam pBR322 TEL TEL 四膜虫rDNA ARS Pvu Bg1 Bam H 连接 Pvu 转化酵母 Pvu 传几代酵母DNA Pvu Pvu 连接 转化酵母 传几代 图 11-56 四膜虫与酵母TEL的拼接以及酵母细胞将其特有的TEL加到四膜虫 的TEL上(参考Shampg,J and Blackburn et al: Nature1984,310:154-157) 第三十二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第三十三张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第三十四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第三十五张，