山东大学分子生物学学习指导

1、分子生物学学习指导第一章 核酸的结构与功能 一、学习重点 DNA和RNA的一级结构、RNA与DNA的差别、mRNA、tRNA、rRNA的结构特点和功能、DNA双螺旋结构模型要点、核小体的概念、DNA的变性、复性及分子杂交。二、学习难点DNA双螺旋结构模型、真核生物染色体的组装；RNA的结构特点和功能。三、学习提纲（一）核酸的化学组成1核苷酸中的碱基成分 （1）碱基 嘌呤(A,G) 嘧啶（T，C，U）（2）戊糖 -D-核糖，-D-2-核糖（3）磷酸2戊糖与核苷 （1）碱基和戊糖通过糖苷键构成核苷。（2）核苷（脱氧核苷）与磷酸通过酯键构成核苷酸（脱氧核苷酸）3核苷酸的结构与命名（1）核苷一磷酸（n

2、ucleoside monophosphate,NMP）（2）核苷二磷酸（nucleoside diphosphate,NDP）（3）核苷三磷酸（nucleoside triphosphate,NTP）（4）环腺苷酸（cycle AMP,cAMP）（5）环鸟苷酸（cycle GMP,cGMP）（二）核酸的一级结构1DNA和RNA的一级结构 DNA和RNA的一级结构的概念。脱氧核苷酸或核苷酸的连接具是前一核苷酸的3-OH与下一位核苷酸的5-位磷酸间形成3， 5磷酸二酯键，构成一个没有分支的线性大分子。DNA的书写应从5到3。2RNA与DNA的差别 （三）DNA的空间结构与功能 1DNA的二级结构

3、双螺旋结构模型 （1）的双螺旋结构的研究背景（2）双螺旋结构模型的要点2结构的多样性 B-DNA(atson-Crick模型结构)、Z-DNA、A-DNA3DNA的超螺旋结构 核小体(nucleosome)的概念4DNA在真核生物细胞核内的组装 染色体的基本单位是核小体。核小体由DNA和5种组蛋白共同构成。DNA双螺旋分子组蛋白八聚体DNA双螺旋分子缠绕(核心颗粒)串珠样的结构维状结构及襟状结构棒状的染色体5DNA的功能 DNA的基本功能就是作为生物遗传信息复制的模板和基因转录的模板,它是生命遗传繁殖的物质基础,也是个体生命活动的基础。一个生物体的全部基因序列称为基因组（四）RNA的空间结构与

4、功能1信使RNA的结构与功能2转运RNA的结构与功能3核蛋白体RNA的结构与功能4其他小分子5核酶（五）核酸的理化性质及其应用1核酸的一般理化性质包括：酸性、黏度及光吸收等。2DNA的变性：DNA变性的概念、增色效应、解连温度等。3DNA的复性与分子杂交 退火、核酸分子杂交、核酸分子探针（六）核酸酶核酸酶的概念、核酸酶的分类、特性及应用。 第二章 核苷酸代谢一、学习重点核苷酸的主要生理功能，人体内嘌呤核苷酸合成与分解的途径及其概念，嘌呤环与嘧啶环中各原子的来源，嘌呤核苷酸的从头合成途径中的关键酶及其调节，核苷酸的抗代谢物及其作用机理。二、学习难点核苷酸嘌呤环与嘧啶环中各原子的来源，嘌呤核苷酸的

5、从头合成途径中的关键酶及其调节。三、学习提纲（一）核酸的代谢概况食物中的核酸大多以核蛋白的形式存在。核蛋白在胃中受胃酸的作用，分解成核酸与蛋白质。核酸在小肠中受各种水解酶的作用最终生成碱基和戊糖。产生的戊糖被吸收参加体内的戊糖代谢；嘌呤和嘧啶碱主要被分解排出体外。食物来源的嘌呤和嘧啶很少被机体利用。核苷酸是核酸的基本结构单位，人体内的核苷酸主要由机体细胞自身合成，核苷酸不属于营养必需物质（二）核苷酸的生物学功能作为核酸合成的原料体内能量的利用形式；参与代谢和生理调节；组成辅酶；活化中间代谢物。（三）体内核苷酸的合成途径一是从头合成途径，另一个是补救合成途径，肝组织进行从头合成途径，脑、骨髓等则

6、只能进行补救合成，前者是合成的主要途径。1嘌呤核苷酸的生物合成：部位在胞液，合成的原料包括磷酸核糖、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、一碳单位及CO2等。嘌呤核苷酸从头合成的特点是：嘌呤核苷酸是在磷酸核糖分子基础上逐步合成的，不是首先单独合成嘌呤碱然后再与磷酸核糖结合的。反应过程中的关键酶包括PRPP酰胺转移酶、PRPP合成酶。从头合成的调节机制是反馈调节。另外一条途径是嘌呤核苷酸的补救合成，嘌呤核苷酸补救合成的生理意义：节省从头合成时能量和一些氨基酸的消耗；体内某些组织器官，例如脑、骨髓等由于缺乏从头合成嘌呤核苷酸的酶体系，而只能进行嘌呤核苷酸的补救合成。2嘧啶核苷酸的合成代谢也有两条途径，即从头

7、合成与补救合成。嘧啶核苷酸的从头合成的主要器官是肝，合成的原料是天冬氨酸、谷氨酰胺、CO2等。反应过程中的关键酶在不同生物体内有所不同，在细菌中，天冬氨酸氨基甲酰转移酶是嘧啶核苷酸从头合成的主要调节酶；而在哺乳动物细胞中，嘧啶核苷酸合成的调节酶主要是氨基甲酰磷酸合成酶II。嘧啶核苷酸从头合成的特点是先合成嘧啶环，再磷酸核糖化生成核苷酸。（四）核苷酸的抗代谢物1嘌呤核苷酸的抗代谢物有以下几类：嘌呤类似物：6-巯基嘌呤（6MP）、6-巯基鸟嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤等。氨基酸类似物：氮杂丝氨酸和6-重氮-5-氧正亮氨酸等叶酸类似物：氨蝶呤及甲氨蝶呤（MTX）。2嘧啶核苷酸的抗代谢物主要有以下几种：嘧啶类

8、似物：主要有5-氟尿嘧啶（5-FU），在体内转变为FdUMP或FUTP后发挥作用。氨基酸类似物：同嘌呤抗代谢物。叶酸类似物：同嘌呤抗代谢物。阿糖胞苷：抑制CDP还原成dCDP。（五）核苷酸的分解代谢1嘌呤核苷酸的分解代谢主要发生在肝、小肠及肾，代谢终产物是尿酸。黄嘌呤氧化酶是分解代谢中重要的酶。嘌呤代谢异常导致尿酸过多引起痛风症，临床上常用别嘌呤醇治疗痛风症。2嘧啶核苷酸的分解代谢胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，尿嘧啶最终生成NH3、CO2及-丙氨酸。胸腺嘧啶降解成-氨基异丁酸 第三章 DNA的生物合成一、学习重点中心法则、半保留复制的概念。参与DNA复制的主要酶类及其作用。DNA复制过程。端粒和端

9、粒酶概念及作用。逆转录概念、过程。逆转录酶作用特点、生物学意义二、学习难点中心法则；半保留复制的概念；参与DNA复制的主要酶类及其作用；端粒和端粒酶概念及作用。三、学习提纲（一）真核生物基因和基因组结构特点，中心法则（二）DNA的半保留复制（三）DNA复制的过程及参与复制的酶类1复制的酶类（1）DNA聚合酶DNA聚合酶的全称是依赖DNA的DNA聚合酶（DNA-depedent DNA polymerase），可缩写为DNA-pol，催化DNA合成。原核生物的DNA-pol有DNA-pol、DNA-pol 和DNA-pol 三种（2）拓补异构酶（3）引物酶（4）SSB（5）DNA连接酶（6）解旋

10、酶2DNA合成过程 复制的起始 首先是DNA解链，解链过程主要由DnaA、B、C三种蛋白质共同参与。然后生成引发体。复制的延长 在DNApol催化下根据与模板的碱基互补，脱氧核苷酸逐个加入引物或延长中的子链上，子链合成的方向是53。复制的终止。端粒和端粒酶的概念及作用。（四）逆转录逆转录也称为反转录，是依赖RNA的DNA合成作用；以RNA为模板，由dNTP聚合成DNA分子。 = 1 * GB3 以病毒RNA为模板，dNTP为原料合成与病毒RNA互补的DNA链，即生成RNADNA杂化双链； = 2 * GB3 RNase或RNase H水解RNA； = 3 * GB3 以新合成的单链DNA为模板

11、，合成互补DNA链，生成双链DNA。逆转录酶有三种酶活性：RNA作模板的dNTP聚合酶活性，DNA作模板的dNTP聚合酶活性和RNase活性。（五）DNA的损伤与修复 DNA的改变称作DNA损伤，分为错配、缺失、插入和重排几种类型，缺失或插入均有可能导致框移突变。DNA损伤的修复是指针对已发生了的缺陷而施行的补救机制，主要有光修复、切除修复、重组修复和SOS修复等。 第四章 RNA的生物合成一、学习重点 转录、不对称转录、模板链、编码链的概念 原核生物RNA聚合酶全酶，核心酶的组成和作用；真核生物RNA聚合酶的主要类型和产物； RNA聚合酶与模板辨认结合； 原核转录起始；真核基因的断裂基因、内

12、含子、外显子的概念，mRNA、tRNA转录后的加工方式二、学习难点不对称转录、模板链和编码链的概念；RNA聚合酶与模板辨认结合；真核基因的断裂基因、内含子和外显子的概念；mRNA转录后的加工方式。三、学习提纲（一）模板和酶RNA的生物合成需要DNA做模板，DNA双链中只有一股链起模板作用，能够按碱基配对规律指导RNA合成的一股DNA单链称为模板链，与之相对的另一股单链称为编码链。转录需要依赖DNA的RNA聚合酶，原核生物的RNA聚合酶由四种亚基2组成的五聚体，2合称为核心酶，转录延长只需核心酶催化。2称为全酶，转录起始前需要亚基辨认转录起始点。真核生物RNA聚合酶有RNA-pol、三种，转录产

13、物分别为45s-rRNA、hnRNA、以及5s-rRNA、snRNA和tRNA。模板与酶的辨认结合（二）转录过程1起始 原核生物转录的起始包括RNA-pol辨认转录起始点并与之结合，DNA双链局部解开，形成转录起始复合物 2转录延长：因子从转录起始复合物上脱落，核心酶的构象发生改变，与模板的结合较为疏松，有利于酶蛋白沿DNA模板链由3向5移动, 因此RNA链的合成方向是5至33转录终止：RNA-pol在DNA模板上停止移动，转录产物从模板上脱落下来，即转录终止。转录终止信号有依赖Rho因子与非依赖Rho因子两种情况。（三）真核生物转录后加工修饰过程1mRNA转录后加工修饰mRNA转录后修饰包括

14、首、尾修饰和剪接，5端修饰主要是指生成帽子结构，即把5-pppG转变为5-pmGpppG。加尾修饰是和转录终止同步的，即加入poly A尾巴。去除初级转录产物上的内含子，把外显子连接为成熟的mRNA，称为剪接2tRNA转录后加工修饰tRNA的转录后修饰，除了剪接加工外，还包括tRNA链上稀有碱基的形成，以及加上3端的CCA序列。3rRNA转录后加工修饰真核生物rRNA转录的初产物是45S rRNA，它是三种rRNA的前身，即18SrRNA、5.8S和28S的rRNA。 第五章 蛋白质的生物合成一、学习重点蛋白质合成的反应体系、三种RNA在翻译中的作用、遗传密码的特性、蛋白质合成过程为起始、延长

15、、终止三个阶段。肽链延长阶段的三个步骤、原核生物翻译起始与真核生物的区别、肽链合成后的加工和运输、蛋白质的靶向输送、蛋白质生物合成的干扰和抑制。二、学习难点 三种RNA在翻译中的作用；遗传密码的特性；肽链延长阶段的三个步骤，各蛋白质因子的作用；肽链合成后的加工和运输。三、学习提纲（一）参与蛋白质生物合成所需的物质20种氨基酸、三种RNA、蛋白质因子（起始因子IF、延长因子EF及释放因子RF）、酶和ATP、GTP等， 共同协调完成蛋白质合成。1.mRNA是翻译的直接模板2.核蛋白体是肽链合成的场所3.tRNA携带并转运特异氨基酸，特异识别mRNA的密码序列。（二）蛋白质生物合成过程翻译过程可分为

16、起始、延长、终止三个阶段，蛋白质合成在核蛋白体上进行称为核蛋白体循环（广义）。肽链的合成是从N端到C端。1.翻译起始 (原核生物)生成由起始氨基酰-tRNA、mRNA和核蛋白体组成的70S起始复合物。起始因子有三种。2.肽链的延长 也称核蛋白体循环。分为进位、成肽和转位三个步骤。真核及原核生物的延长，主要是延长因子体系的不同。3肽链合成终止（原核）终止需要释放因子RF、RR。真核生物仅需一种释放因子，有GTP酶活性。（三）蛋白质合成后加工和输送1新合成的多肽链，经加工修饰，转变成有生物活性的蛋白质。（1）肽链折叠为天然功能构象的蛋白质（2）一级结构的修饰（3）空间结构的修饰2输送（1）分泌蛋白

17、的靶向输送（2）线粒体蛋白的靶向输送（3）细胞核蛋白的靶向输送（四）蛋白质生物合成的干扰和抑制某些药物、毒素和生物活性物质等可干扰和抑制蛋白质生物合成过程。1抗生素类2其他干扰蛋白质合成的物质（1）毒素（2）干扰素的作用第六章 基因表达调控一、学习重点基因转录激活调节的基本要素。原核基因操纵子的概念、结构和功能，乳糖操纵子的负性、正性、协调调节 真核基因调控顺式作用元件和反式作用因子的概念，种类。真核转录因子结构二、学习难点基因转录调节的三大要素；乳糖操纵子的负性、正性和协调调节；真核基因调控顺式作用元件和反式作用因子的概念和种类。三、学习提纲 （一）基因表达调控基本概念 基因是编码一种多肽链

18、/RNA 的DNA 片段。蛋白质基因的表达经历转录和翻译两个过程，其表达产物是蛋白质或多肽链,非蛋白质基因（RNA基因）的表达产物是RNA 。基因表达表现为严格的规律性，即时间特异性或发育阶段特异性，和空间特异性或组织细胞特异性。基因表达的时间和空间特异性由特异基因的启动子（序列）和（或）增强子与调节蛋白的相互作用决定。某些基因产物对生命全过程都是必需的或必不可少的，这类基因在一个生物的几乎所有细胞和所有发育阶段持续表达，而且较少受环境因素的影响，这类基因称为管家基因，其表达方式称为基本的或组成性表达。另外许多基因的表达受环境因素的影响，某些基因的表达可以被环境信号激活，即表达产物增加，这种基

19、因表达方式称为诱导。有些基因的表达可以被环境信号抑制，即基因表达产物水平降低，这种基因表达方式称为阻遏。基因表达调控可以在遗传信息水平、转录、转录后加工、翻译和翻译后加工等多层次上进行，其中最重要的是转录水平上的调节，尤其是转录起始水平的调节。转录激活的调节要素包括特异DNA调节序列、调节蛋白、RNA聚合酶和DNA-蛋白质及蛋白质-蛋白质间的相互作用。原核生物基因是通过操纵子机制完成的，操纵子的调节序列包括启动序列、操纵序列和CAP结合位点等。真核基因的调节序列/顺式作用因子一般包括启动子、增强子和沉默子等。原核生物基因的调节蛋白如乳糖操纵子有-因子、阻遏蛋白和CAP蛋白等。真核基因的调节蛋白

20、或反式作用因子又称为转录因子，分为基本转录因子和特异转录因子。所有的转录因子均含有DNA 结合域和转录激活域，有的还含有二聚化结构域或蛋白质-蛋白质相互作用域。（二）原核基因表达调控大多数原核基因的表达调控是通过操纵子机制实现的。E.coli的乳糖操纵子（lac）由括P序列、O序列、CAP结合位点、3个结构基因和1个调节基因组成。无诱导物存在时，阻遏蛋白与O序列的结合可阻止结构基因的转录；诱导物与阻遏蛋白结合可改变其构象，使阻遏蛋白与O序列分离，RNA聚合酶对结构基因进行转录。阻遏蛋白的负性调节具有普遍性。CAP是lac操纵子的正性调节蛋白，CAP-cAMP复合物与DNA结合可促进RNA聚合酶

21、与P序列的结合，可以促进结构基因的转录。（三）真核基因表达调控真核生物有3种RNA聚合酶：RNA聚合酶I、RNA聚合酶II和RNA 聚合酶III。RNA聚合酶II转录蛋白质基因。RNA聚合酶的活性受顺式作用元件和反式作用因子的调节。1顺式作用元件分为启动子、增强子和沉默子。启动子决定RNA聚合酶的转录起始点。增强子是远离转录起始点的、决定基因表达的时间和空间特异性的、增强启动子活性的正性调控元件，其作用方式通常与方向、距离无关。2反式作用因子/转录因子分为基本转录因子和特异转录因子，后者又分为转录抑制因子和转录激活因子。RNA 聚合酶II的基本转录因子包括TFIIA、TFIIB、TFIID、T

22、FIIE、TFIIF和TFIIH等，它们与RNA 聚合酶II形成转录前起始复合物，但是这种复合物不稳定和不能起始有效转录。转录激活因子与增强子结合后作用于转录前起始复合物，增加其稳定性和促进有效转录。 第七章 细胞信号转导的分子机制一、学习重点 第二信使、第三信使和受体的概念；受体的分类、一般结构、功能和受体作用的特点；膜受体介导的信息转导途径，包括cAMP-蛋白激酶（PKA）途径，Ca2+依赖性蛋白激酶（PKC）途径，cGMP-蛋白激酶（PKG）系统，酪氨酸蛋白激酶（TPK）体系核因子B（NF-B）途径，TGF-途径等六条较为重要的途径；胞内受体介导的信息转导。二、学习难点受体的分类、结构和

23、功能；各信号途径的组成及信息传递方式。三、学习提纲（一）细胞间信息物质细胞间信息物质的化学本质是蛋白质和肽类、氨基酸及其衍生物、类固醇激素、脂酸衍生物和气体分子等。根据细胞分泌信息物质的方式又可将细胞间信息物质分为神经递质、内分泌激素、局部化学介质和气体信号分子四大类。（二）细胞内信息物质 在细胞内传递细胞调控信号的化学物质称为细胞内信息物质。通常将Ca2+、cAMP、Cgmp、DAG、IP3、Cer、花生四烯酸及其代谢产物等这类在细胞内传递信息的小分子化合物成为第二信使。负责细胞核内外信息传递的物质称为第三信使。（三）受体信息物质通过与受体识别结合，然后激活特定信号放大系统，引起生物学效应。

24、与受体特异性结合的生物活性分子称为配体。位于细胞膜上的受体称为膜受体，多为镶嵌糖蛋白；位于细胞液或细胞核的称为胞内受体，都是DNA结合蛋白。膜受体分为：环状受体、G蛋白偶联受体、单个跨膜螺旋受体、具有鸟苷酸环化酶活性的受体。胞内受体多为反式作用因子，包括四个区域：1. 高度可变区；2. DNA结合区；3. 铰链区；4. 激素结合区。受体与配体结合的特点是：1. 高度专一性；2.高度亲和力；3. 可饱和性；4. 可逆性；5.特定的作用模式。对受体活性调节的方式有：1. 磷酸化和脱磷酸化作用；2. 膜磷脂代谢的影响；3. 酶促水解作用；4. G蛋白的调节。（四）膜受体介导的信息转导1. cAMP-

25、蛋白激酶（PKA）途径 该途径以靶细胞内cAMP浓度改变和激活cAMP-蛋白激酶途径为主要特征，是激素调节物质代谢的主要途径。2Ca2+依赖性蛋白激酶（PKC）途径 分为Ca2+-磷脂依赖性蛋白激酶途径和Ca2+-钙调蛋白依赖性途径。IP3、DAG和Ca2+是主要的信息分子。3CGMP-蛋白激酶（PKG）系统 鸟苷酸环化酶是该途径主要的酶，cGMP是第二信使分子。心钠素和NO等通过这条途径引起生物学效应。4酪氨酸蛋白激酶（TPK）体系 细胞中的TPK分为受体型TPK和非受体型TPK。5核因子B（NF-B）途径 主要涉及机体的防御反应。6TGF-途径 能调节增殖、分化、迁移和凋亡等多种细胞反应。

26、（五）胞内受体介导的信息转导胞内受体介导的信息转导主要是类固醇激素等的作用途径，胞内受体包括胞浆受体和核受体。这条途径通过特定基因的激素应答元件（HRE）调节基因表达，进而导致生物学效应。细胞内各种信息转导途径并非孤立、各自为政的，而是交叉联系、构成错综复杂的调节网络。信号转导环节的异常则可导致疾病的发生。第八章 DNA重组与重组DNA技术一、学习重点 自然界基因重组的类型，DNA克隆的基本概念，重组DNA技术的基本原理及主要操作步骤，限制性核酸内切酶的概念、作用特点，基因载体的主要种类及基本特征，目的基因的主要来源及获取方法，基因文库的概念，目的基因与载体的主要连接方式，筛选重组体的主要方法

27、，表达载体的主要特征。二、学习难点 限制性核酸内切酶的作用特点；基因载体的主要种类及基本特征；目的基因的主要来源及获取方法；目的基因与载体的主要连接方式；筛选重组体的主要方法。三、学习提纲（一）自然界的基因转移和DNA重组 基因转移的方式主要有：结合作用、转化作用和转导作用。DNA重组的形式有：位点特异的重组、同源重组和转座重组。（二）重组DNA技术 从构建的基因组DNA文库或cDNA文库中分离、扩增某一感兴趣的目的基因就是基因克隆，又称重组DNA技术。一个完整的基因克隆过程包括：目的基因的获得、克隆基因载体的选择与改造、目的基因与载体的连接、重组DNA分子导入受体细胞、筛选出含目的基因重组D

28、NA的转化细胞并进行扩增。实现上述过程需要一些工具酶、目的基因、载体及宿主细胞。1限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶是一类识别DNA的特异序列并在识别位点或其周围切割双链DNA的内切酶。存在于细菌体内，分为三类。 = 2 * ROMAN II类限制性内切酶常用于重组DNA技术，用于目的基因和载体DAN的特异切割。切割后的DNA可产生5突出或3突出的黏性末端或平头末端。2目的基因 目的基因是在重组DNA技术中要分离获得的感兴趣的基因，又称为外源DNA。目的基因有两种类型，即cDNA和基因组DNA。获得目的基因的途径主要有：化学合成、反转录合成、从cDNA文库或基因组DNA文库中筛选、PCR扩增。

29、3基因载体 基因载体是携带目的基因、实现目的基因无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的DNA分子。分为克隆载体和表达载体。可用做基因载体的有：质粒DAN、噬菌体DNA和病毒DNA。克隆载体应具备以下基本特征：自我复制能力、具有筛选标志基因和多个限制性核酸内切酶的单一位点等。表达载体除具有以上特征外，还应具有启动子等转录调控序列、适当的翻译控制序列、合理设计的多克隆位点等。4宿主细胞 宿主细胞是容纳重组DNA分子，使其在自身内复制或表达的受体细胞。可为原核细胞或真核细胞。将重组DNA分子导入宿主细胞内的方式有：转化、转染和感染。（三）重组DNA技术与医学的关系1致病基因的发现与克隆 根据克隆基因的

30、定位和性质研究所提供的线索，可进一步确定克隆的基因在某种疾病中的作用。2生物制药 利用基因工程生产有药用价值的蛋白质和多肽产品。3基因诊断 利用分子生物学及分子遗传学的原理和技术，在DNA水平分析、鉴定遗传疾病所涉及的基因置换、缺失或插入等突变。4基因治疗 向有功能缺陷的细胞导入具有相应功能的外源基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。5疾病的防治 可用于产前诊断、隐性遗传病携带者测试、症候前诊断和遗传病易感性预测。 第九章 常用分子生物学技术的原理及其应用一、学习重点印迹技术（包括Southern blotting、Northern blotting、Western blottin

31、g）的原理和应用、探针的概念、PCR技术的工作原理、反应体系和反应步骤。基因文库（包括基因组文库和cDNA文库）的概念。二、学习难点三种印迹技术的异同点和应用；PCR技术的工作原理；基因文库分类和概念。三、学习提纲（一）分子杂交与印迹技术分子杂交技术的原理主要涉及分子杂交特性、印迹技术、探针技术。1印迹技术：将在凝胶中分离的生物大分子转移（印迹）或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术，包括DNA、RNA、蛋白质印迹技术。(1)DNA印迹术又称为Southern blotting，主要用于基因组DNA的定性和定量分析，亦可分析重组质粒和噬菌体。(2)RNA印迹技术又称Northern blo

32、tting，其基本原理与Southern blotting相同，主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平，也可以比较不同组织和细胞中的同一基因的表达情况。(3)Western blotting：又称蛋白质印迹术或免疫印迹技术，指蛋白质在经聚丙烯酰胺电泳分离之后转移到膜上,再与溶液中的其它抗体探针相互结合的技术。用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白分子间的相互作用研究等。印迹转移技术包括：毛细作用转移、电转移和真空吸引转移。2探针技术(二) 聚合酶链反应（PCR）1基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5端和3端相互补的寡核苷

33、酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸完成新的DNA合成。2反应体系的基本成分包括：模板DNA、特异性引物、耐热性DNA聚合酶、dNTP以及含有Mg2+的缓冲液。3基本反应步骤包括：变性、退火和延伸。4主要用于：目的基因的克隆、基因的体外突变、DNA和RNA的微量分析、DNA测序、基因突变分析。5PCR经过发展形成了反转录PCR、原位PCR、实时PCR等多种衍生技术。（三）基因文库是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体，分为基因组DNA文库和cDNA文库。1基因组DNA文库是指包含某一个生物细胞全部基因组DNA序列的克隆群体，它以DNA片段的形式贮存着某一生物的全部基因组DNA信息。2cDNA文库是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段的形式贮存着该组织细胞的基因表达信息。第十章 癌基因、肿瘤抑制基因与生长因子一、学习重点癌基因的概念、原癌基因的特点、原癌基因活化的机制、原癌基因的产物和功能、肿瘤抑制