补肾、健脾和补肾健脾方对尾部悬吊大鼠腰椎骨丢失的作用研

1、中国科技论文在线- PAGE 6 - FORMTEXT 补肾、健脾和补肾健脾方对尾部悬吊大鼠腰椎骨丢失的作用研究基金项目：国家自然科学基金（81001493），教育部博士点新教师基金（20102133120001），辽宁省教育厅基金（L2011162） FORMTEXT 张林1， FORMTEXT 范颖1， FORMTEXT 陈文娜2， FORMTEXT 李然1， FORMTEXT 孙宏伟2， FORMTEXT 马贤德2作者简介：张林（1977-），女，副教授，主要研究方向：方剂配伍规律与效用机理研究. E-mail: zhanglin770622SET version 1.5 * MERGE

2、FORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET bkCompanyEN Bisic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Teaching and Experiment Center,Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang

3、 110847;Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847 * MERGEFORMATBisic Medicine Sch

4、ool, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Teaching and Experiment Center,Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Sh

5、enyang 110847;Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847SET bkCompanyCHN 辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847;辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847;辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847;辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 1108

6、47;辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847;辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847 * MERGEFORMAT辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847;辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847;辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847;辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847;辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847;辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847SET bkPostcode 110847; * MERGEFORMAT110847;SET bkMobile * MERGEFORMASE

7、T bkTelphone * MERGEFORMASET bkAddress 辽宁省沈阳市崇山东路79号辽宁中医药大学方剂教研室; * MERGEFORMAT辽宁省沈阳市崇山东路79号辽宁中医药大学方剂教研室;SET bkEmail zhanglin770622;chwn;liran;shw;mxd * MERGEFORMATzhanglin770622;chwn;liran;shw;mxdSET bkIntroduction 张林（1977-），女，副教授，主要研究方向：方剂配伍规律与效用机理研究; * MERGEFORMAT张林（19

8、77-），女，副教授，主要研究方向：方剂配伍规律与效用机理研究;SET bkAuthorCHN 张林;范颖;陈文娜;李然;孙宏伟;马贤德 * MERGEFORMAT张林;范颖;陈文娜;李然;孙宏伟;马贤德SET bkAuthorEN ZHANG Lin;FAN Ying;CHEN Wenna;LI Ran;SUN Hongwei;MA Xiande * MERGEFORMATZHANG Lin;FAN Ying;CHEN Wenna;LI Ran;SUN Hongwei;MA XiandeSET bkContact 张林 * MERGEFORMAT张林SET bkFund 国家自然科学基金（8

9、1001493），教育部博士点新教师基金（20102133120001），辽宁省教育厅基金（L2011162） * MERGEFORMAT国家自然科学基金（81001493），教育部博士点新教师基金（20102133120001），辽宁省教育厅基金（L2011162）SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET ve

10、rsion 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET version 1.5 * MERGEFORMAT1.5SET bkReferencesInfo 1*|*期刊*|*Smith SM, Wastney ME, OBrien KO, et al. Bone markers

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15、（11）：10181020 * MERGEFORMAT1*|*期刊*|*Smith SM, Wastney ME, OBrien KO, et al. Bone markers, calcium metabolism, and calcium kinetics during extended-duration space flight on the Mir space stationJ. J Bone Miner Res. 2005，20(2): 2082182*|*期刊*|*Sibonga JD, Cavanagh PR, Lang TF, et al. Adaptation of the

16、skeletal system during long-duration spaceflightJ. Clinic Rev Bone Miner Metabol. 2008, 5(4): 2492613*|*期刊*|*Morey-Holton ER，Globus RK. Hindlimb unloading rodent model: technical aspectsJ. J Appl Physiol, 2002, 92(4): 1367-13774*|*期刊*|*Globus RK, Morey-Holton ER. Advances in understanding the skelet

17、al biology of spaceflightJ. Gravitational and Space Biology, 2009, 22(2): 3-125*|*期刊*|*Morey-Holton ER, Globus RK. Hindlimb unloading rodent model: technical aspectsJ. J Appl Physiol, 2002, 92(4): 1367-13776*|*期刊*|*S Tavella, A Ruggiu, A Giuliani, et al. Bone turnover in wild type and pleiotrophin-t

18、ransgenic mice housed for three months in the international space station (ISS) J. PloS one, 2012, 7(3): 1-147*|*期刊*|*傅骞，胡素敏，周鹏，等.尾部悬吊3周及中药干预对模拟失重大鼠全身骨密度的影响J.中国中医药信息杂志，2010，17（1）：28-308*|*期刊*|*孙平，黄震，蔡德鸿，等.补肾壮骨中药对模拟失重雌性大鼠骨代谢的研究J. 南方医科大学学报，2007，27（2）：2122149*|*期刊*|*马永洁，万玉民，谢力勤，等.复方活血补肾中药对尾悬吊大鼠骨质量的影响J.

19、中国临床康复，2006，10（3）：13313510*|*期刊*|*韩艳，覃华，刘新友，等.益肾中药复方对模拟失重大鼠股骨生物力学特性的影响J.第四军医大学学报，2007，28（11）：10181020SET bkAuthorsInfo *|1|张林|ZHANG Lin|辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847|Bisic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|张林（1977-），女，副教授，主要研究方向：方剂配伍规律与效用机理研究|辽宁省沈阳市崇山东路79号辽宁中医药大学方剂教

20、研室|110847|zhanglin77062213066705263|2|范颖|FAN Ying|辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847|Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|3|陈文娜|CHEN Wenna|辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847|Teaching and Experiment Center,Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|ch

21、wn|4|李然|LI Ran|辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847|Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|liran|5|孙宏伟|SUN Hongwei|辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847|Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|shw|6|马贤德|MA Xiande|辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847

22、|Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|mxd| * MERGEFORMAT*|1|张林|ZHANG Lin|辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847|Bisic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|张林（1977-），女，副教授，主要研究方向：方剂配伍规律与效用机理研究|辽宁省沈阳市崇山东路79号辽宁中医药大学方剂教研室|110847|

23、zhanglin77062213066705263|2|范颖|FAN Ying|辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847|Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|3|陈文娜|CHEN Wenna|辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847|Teaching and Experiment Center,Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|chwn|4|李然|LI

24、 Ran|辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847|Basic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|liran|5|孙宏伟|SUN Hongwei|辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847|Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|shw|6|马贤德|MA Xiande|辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847|Teaching

25、and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847|mxd|SET bkTitleInfo 补肾、健脾和补肾健脾方对尾部悬吊大鼠腰椎骨丢失的作用研究|The effects of tonifying kidney and invigorating spleen prescription on the bone loss of lumbar vertebra in tail suspension model rats|国家自然科学基金（81001493），教育部博士点新教师基金（2010

26、2133120001），辽宁省教育厅基金（L2011162） * MERGEFORMAT补肾、健脾和补肾健脾方对尾部悬吊大鼠腰椎骨丢失的作用研究|The effects of tonifying kidney and invigorating spleen prescription on the bone loss of lumbar vertebra in tail suspension model rats|国家自然科学基金（81001493），教育部博士点新教师基金（20102133120001），辽宁省教育厅基金（L2011162）（1. 辽宁中医药大学基础医学院，沈阳 110847；

27、2. 辽宁中医药大学教学实验中心，沈阳 110847）SET bkTitleInfo * MERGEFORMAT SET bkAuthorsInfo * MERGEFORMAT 摘要： FORMTEXT 目的：观察补肾、健脾和补肾健脾三方对模拟失重大鼠腰椎骨的影响，比较其防治作用的异同。方法：大鼠随机分为正常对照、悬吊、补肾、健脾和补肾健脾共5组。后4组大鼠头低位-30度尾部悬吊连续21d，补肾、健脾和补肾健脾组大鼠从实验第1天开始依次给予补肾方、健脾方和补肾健脾方灌胃，其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水。实验第21天处杀各组大鼠，双能X线骨密度仪测L4椎体骨密度，L4椎体丽春红三色染色观察骨形

28、态计量学静态参数。结果：较之正常对照组，悬吊组大鼠L4椎体骨密度显著降低（P0.01），骨小梁面积百分率、骨小梁厚度、骨小梁数量明显降低（P0.01），骨小梁分离度明显增高（P0.01）；较之悬吊组，补肾组和补肾健脾组大鼠L4椎体骨密度显著升高（P0.01），骨小梁面积百分率、骨小梁厚度、骨小梁数量明显升高（P0.01），骨小梁分离度明显降低（P0.01），健脾组大鼠L4椎体骨密度升高（P0.05），骨小梁面积百分率、骨小梁厚度明显升高（P0.01），骨小梁数量增加、骨小梁分离度降低（P0.05）；较之补肾健脾组，补肾组大鼠L4椎体骨密度降低、骨小梁厚度降低升高（P0.05），健脾组大鼠L4椎

29、体骨密度和骨小梁厚度均明显降低（P0.01），补肾组和健脾组大鼠L4椎体骨小梁面积百分率降低（P0.05）、骨小梁分离度升高（P0.05）。结论：补肾、健脾和补肾健脾三方均对模拟失重引起的骨丢失具有防护作用，以补肾健脾方作用为优。关键词： FORMTEXT 方剂学；补肾健脾；模拟失重；尾部悬吊；骨丢失中图分类号： FORMTEXT 请查阅中国图书馆分类法SET bkAuthorsInfo * MERGEFORMAT SET bkTitleInfo * MERGEFORMAT FORMTEXT The effects of tonifying kidney and invigorating sp

30、leen prescription on the bone loss of lumbar vertebra in tail suspension model rats FORMTEXT ZHANG Lin1, FORMTEXT FAN Ying2, FORMTEXT CHEN Wenna3, FORMTEXT LI Ran2, FORMTEXT SUN Hongwei4, FORMTEXT MA Xiande4(1. Bisic Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;2. Basic

31、 Medicine School, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;3. Teaching and Experiment Center,Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847;4. Teaching and Experiment Center, Liao Ning University of Chinese Medicine, Shenyang 110847)Abstract: FORMTEXT Aim: To observe the

32、action of tonifying kidney prescription, invigorating spleen prescription and tonifying kidney and invigorating spleen prescription on the lumbar vertebra in tail suspension model rats. Methods: Rats were assigned to five groups randomly: control(C)，tail suspended(S)，tonifying kidney (TK), invigorat

33、ing spleen(IS) and tonifying kidney and invigorating spleen (TKIS) groups. Rats in S,TK, IS and TKIS groups were suspended by head down tilt -30for 21 days. Rats of TK, IS and TKIS groups were orally administrated with three decoctions and other groups with equivalent saline from the first day. Bone

34、 mineral density of lumbar 4 was measured respectively using dual energy X ray absorptiometry in rats on day 21. Meanwhile bone histomorphometry static parameters of lumbar 4 in rats of C，S，TK, IS and TKIS groups were measured by ponceau trichrome staining. Results: Compared with the C group, bone m

35、ineral density, trabecular area percentage, trabecula thickness and trabecula number of L4 are decreased and trabecular separation of L4 is increased obviously in S group. Compared with the S group, the bone mineral density, trabecular area percentage, trabecula thickness and trabecula number of L4

36、are raised and trabecular separation of L4 is reduced in TK, IS and TKIS groups. Compared with the TKIS group, the bone mineral density, trabecular area percentage and trabecula thickness of L4 are decreased and trabecular separation of L4 is increased in TK and IS groups.Conclusion: Three prescript

37、ions including tonifying kidney prescription, invigorating spleen prescription and tonifying kidney and invigorating spleen prescription can protect the bone loss induced by simulated weightlessness and the role of tonifying kidney and invigorating spleen prescription is superior.Key words: FORMTEXT

38、 Formula-ology; tonifying kidney and invigorating spleen, simulated weightlessness, tail suspension，bone loss引言大量研究表明，航天员在进入太空失重环境飞行过程中，骨质丢失是一种必然发生的病理改变1、2。至今，尚未研究出对抗这种骨丢失安全有效的措施。近年来，祖国医学在此方面多采用以补肾为主的方药进行干预，取得了良好效果。然而中医认为“肾主骨，脾主四肢”、“脾主运化，充养肾精，精生髓，髓养骨”。脾和肾对机体骨量维持恒定均具有重要作用，因此本研究在建立大鼠尾部悬吊模拟失重骨丢失模型的基础上，

39、着重探讨补肾、健脾和补肾健脾三方对模拟失重腰椎骨丢失的防护作用，比较其异同，力求获得有效的防护方药。材料与方法材料动物健康雄性Wistar大鼠60只，级别SPF/VAF，体重（18010），北京维通利华实验动物中心提供。许可证号：SCXK（京）2006-0009。药物方剂补肾方：由鹿茸、淫羊藿等组成，健脾方：由生晒参、生黄芪等组成，补肾健脾方：由生晒参、生黄芪、鹿茸、淫羊藿等组成，全部药材购自北京同仁堂辽宁有限责任公司。补肾方和补肾健脾方中鹿茸打碎，过100目筛兑入药液，三个方中其余药物均采用常规水煎煮法提取，补肾方、健脾方和补肾健脾方将所得全部药液混合依次浓缩成0.42g原药材/ml、0.5

40、6g原药材/ml、1g原药材/ml浓度备用。仪器双能X线骨密度分析仪：美国，Lunar；DMLA显微照相系统：德国，Leica；硬组织切片机：德国，Leica。方法动物分组与处理大鼠随机分为5组：正常组（C）、悬吊组（S）、补肾组（TK）、健脾组（IS）和补肾健脾组（TKIS），每组12只。依据人和动物间体表面积折算的等效剂量比值表计算大鼠给药剂量，TK、IS、TKIS组大鼠从实验第1天开始依次按2.4 gkg-1d-1、3.2 gkg-1d-1、5.7 gkg-1d-1给予补肾方、健脾方和补肾健脾方灌胃。其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水。S组、TK组、IS组、TKIS组大鼠采用头低位-30尾

41、部悬吊法3模拟失重，每天悬吊24h，共悬吊21d；C组大鼠不采取任何处理。实验第21天，各组大鼠称重，于灌胃后2h脱颈椎处死，取第4腰椎。指标测定腰椎重量测定除净附在腰椎4上的肌肉和软组织，在分析天平上称量重量，计算大鼠L4椎体占体重比（mg/g）。骨密度测定每组中随机选取6只大鼠的L4椎体，生理盐水冲洗，用双能X线骨密度分析仪，测定大鼠离体腰椎4的骨密度，以单位面积的骨矿物质含量（g/cm2）表示骨密度值。骨形态计量学参数测定每组中剩余6只大鼠的L4椎体，用10%中性甲醛固定，70%-95%酒精梯度脱水，塑料液浸泡，塑料包埋，用硬组织切片机切片，厚度30m，丽春红三色染色，用全自动显微镜在5

42、0倍视野下进行图像采集，取切片中心部的五个视野测量并取其平均数，Image Pro Plus6.0软件测量骨小梁面积比（Tb.Ar）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁分离度（Tb.Sp）。统计学处理所得数据均用（s）表示，用SPSS 11.0 软件处理，单因素方差分析（one-way ANOVA）后，行多组间比较，采用Student-Newman-Keuls检验。结果补肾、健脾、补肾健脾三方对模拟失重大鼠L4椎体重量的作用结果见表1。与C组比较，S组大鼠L4椎体重/体重明显降低（P0.01）；与S组比较，TK、IS、TKIS组大鼠L4椎体重/体重均明显升高（P0.01）

43、；与TKIS组比较，IS组大鼠L4椎体重/体重降低（P0.05）。补肾、健脾、补肾健脾三方对模拟失重大鼠L4椎体骨密度的作用结果见表1。与C组比较，S组大鼠L4椎体骨密度明显降低（P0.01）；与S组比较，TK、TKIS组大鼠L4椎体骨密度明显升高（P0.01），IS组大鼠L4椎体骨密度升高（P0.05）；与TKIS组比较，IS组大鼠L4椎体骨密度明显降低（P0.01）、TKIS组降低（P0.05）。补肾、健脾、补肾健脾三方对模拟失重大鼠L4椎体骨形态计量学参数的作用结果见表2和图1。与C组比较，S组大鼠L4椎体Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N均显著降低（P0.01），Tb.Sp显著升高（P0

44、.01）；与S组比较，TK、TKIS组大鼠L4椎体Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N均显著升高（P0.01），Tb.Sp明显降低（P0.01），IS组大鼠L4椎体Tb.Ar、Tb.Th明显升高（P0.01），Tb.N增加、Tb.Sp降低（P0.05）；与TKIS组比较，TK和IS组大鼠L4椎体Tb.Ar下降（P0.05），TK组大鼠L4椎体Tb.Th降低、Tb.Sp升高（P0.05），IS组大鼠L4椎体Tb.Th明显降低（P0.01），Tb.Sp升高（P0.05）。表1 补肾、健脾、补肾健脾三方对模拟失重大鼠L4椎体重/体重和骨密度的作用(S)组别L4重/体重（mg/g，n=12）骨密度（g/c

45、m2，n=6）正常组1.3070.0330.1060.007悬吊组1.1680.0431）0.0830.0031）补肾组 1.2510.0473）0.0930.0043）4）健脾组1.2210.0543）4）0.0900.0082）5）补肾健脾组1.2660.0493）0.1000.0073）注：与正常组比较1）P0.01；与悬吊组比较2）P0.05，3）P0.01；与补肾健脾组比较4）P0.05，5）P0.01表2 补肾、健脾、补肾健脾三方对模拟失重大鼠L4椎体骨形态计量学参数的作用(S，n=6)组别Tb.Ar（%）Tb.Th（m）Tb.N（/mm）Tb.Sp（m）正常组42.556.365

46、4.345.924.110.3093.528.86悬吊组21.495.191）33.193.391）2.890.501）132.079.501）补肾组32.595.033）4）43.505.653）4） 3.540.353）115.2310.993）4）健脾组31.444.643）4）41.864.643）5）3.440.392）117.399.732）4）补肾健脾组39.114.673）49.853.333）3.810.413）103.379.553）注：与正常组比较1）P0.01；与悬吊组比较2）P0.05，3）P0.01；与补肾健脾组比较4）P0.05，5）P0.01图1 各组大鼠L4椎

47、体骨组织的丽春红三色染色（50）A：正常组B：悬吊组C：补肾组D：健脾组E：补肾健脾组讨论实践证明，人类在进入太空失重环境后，会出现骨质丢失，导致骨密度下降和骨质疏松。太空飞行一个月导致骨密度下降约1-1.5%，这些骨质丢失主要发生于某些特定部位如腰椎、股骨颈、股骨大转子和骨盆，其程度较绝经期骨质疏松更为严重4。为了提高航天员飞行中的工作能力和返回地面后的再适应能力，必须采取有效的防护措施。本研究所采用的大鼠尾部悬吊模型，是目前国内外公认的研究模拟失重常用的地面动物模型5。实验结果显示，大鼠尾部悬吊21天L4椎体骨密度显著下降，骨形态计量学静态参数改变：骨小梁面积百分率、骨小梁厚度、骨小梁数量明显降低，骨小梁分离度明显增高，L4椎体与体重之比也明显下降，与以往的研究结果一致6，表明大鼠尾部悬吊21天出现了明显的骨质疏松。失重引起的骨丢失是古代中医学从未涉及的病症，是现代人在探索未知世界面临的一项亟待解决的医学课题。但是中医学对“骨”的生理有相关记载：如“肾主骨，脾主四肢”、“脾主运化，充养肾精，精生髓，髓养骨”。因此对失重性骨丢失可以