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文档简介

1、组培苗的褐化问题很多种类的植物体中含有大量多酚类化合物，切取芽时的创伤会 激活组织中的多酚氧化酶，将多酚类物质氧化为棕褐色的醍类物质， 使外植体的切口处发生褐变，并会渗透到培养基中，使培养基褐化， 其结果是严重影响培养物的生长和分化，甚至造成培养物死亡。影响褐变的因素很多，植物的种类褐基因型、外植体的来源和生理状 况以及培养基的成分都会不同程度的影响褐变的程度。一般木本植物 的外植体比较容易产生褐变现象，在成年树尤其严重。培养基中含酚 过高会导致褐变，含过高浓度的无机盐和肌醇也会加剧外植体的褐变。 6-苄氨基嘌吟（6-BA）和激动素（立）也有诱导褐化的作用。强光和 高温同样会促进褐化现象。为了

2、防止外植体的褐变，需要选取酚类化合物含量较低的实验材 料，选择无机盐含量较低，不加肌醇的培养基，并在较弱的光线或黑 暗的条件中进行培养。在培养基中加入抗氧化剂是防止褐变的有效措施。常用的抗氧化 剂有抗坏血酸（VC）、柠檬酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯 烷酮（PVP ）等。可用抗氧化剂溶液预先处理外植体，或者在抗氧化 剂溶液中切割和剥离外植体。必要时还可以将几种抗氧化剂结合使用。 也可以将抗氧化剂加入到培养基中。另一种方法是在培养基中加入 0.51%的活性炭，吸附对生长有抑制作用的褐色醍类物质。应当注 意的是：活性炭也能吸附培养基中的激素类物质，影响茎尖的分化和 生长，因此在使用活性炭的场

3、合，需要适当提高培养基中激素的浓度。还有一种办法是不断地（每隔12d ）将培养物转移到新鲜的培养基 上，以摆脱老培养基中褐色物质的不利影响。在使用液体培养基的情 况下，这种方法相当有效。在培养基中添加活性碳可以防止植物组织自身的酚类物质排 泌和变褐老化。对形态发生和器官形成有良好作用。一般认为，活性 碳主要吸附非极性物质及色素大分子，可以减少一些有害物质的影响， 但是具体吸附的选择性很差，温度低时吸附力增强，温度高是吸附力 减弱，甚至会解吸附。通常使用浓度为0.5-10g/L。加入活性炭后使 培养基变黑，对一些植物诱导生根有利。大量活性炭的加入会削弱琼 脂的凝固能力，因此要多加些琼脂。很细的活

4、性炭容易沉淀，因此通 常在琼脂将要凝固时，需轻轻摇动培养瓶。植物外植体组织在接种时的切割面会溢泌一些酚类物质，在接 触空气中的氧气后其会氧化为相应的醍类物质，产生可见的茶色、褐 色或黑色，此即谓“酚污染”。在木本植物，尤其是热带木本植物及 少量草本植物中，此现象较为严重。常用的防治措施如下：试用抗酚类氧化的药剂（半胱氨酸及其盐酸盐、二硫苏糖醇、 谷胱甘肽、抗坏血酸等。该类药剂一般需用浓度为50-200mg/L。用 经过滤灭菌的药液洗涤刚切割的外植体伤口表面，或加入固体培养基 的表层，或将刚切割的外植体浸入其中一定时间）适当降低培养基温度。接种后先进行一定时间的暗培养。及时转接入新鲜培养基。选择切取外植体部位等。经验之谈：1、易发生褐化的作物在进行组织培养时，先进行预培养（即培养在基础培养基中）

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