职业卫生与职业医学试验指导总括201809

1、职业卫生与职业医学实验指导内蒙古医科大学公共卫生学院环境职业卫生学教研室2013年9月实验指导目录 TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark4 o Current Document 实验一：空气中粉尘浓度和分散度测定 2 HYPERLINK l bookmark6 o Current Document 实验二：空气中铅浓度的测定 5 HYPERLINK l bookmark10 o Current Document 实验三：尿中铅的测定 8实验四：尿中S- ALA测定 10 HYPERLINK l bookmark14 o Current Document 实验五：

2、尿中马尿酸的测定 12 HYPERLINK l bookmark16 o Current Document 实验六：尘肺X线胸片阅片 16 HYPERLINK l bookmark20 o Current Document 实验七：全血胆碱酯酶活性测定20 HYPERLINK l bookmark26 o Current Document 实验八：职业危害病案讨论25 HYPERLINK l bookmark28 o Current Document 实验九：尿中三氯乙酸的测定28 HYPERLINK l bookmark30 o Current Document 实验十：粉尘中游离二氧化硅含

3、量的测定方法 30 HYPERLINK l bookmark32 o Current Document 实验十一：尿中肌酊的测定 32 HYPERLINK l bookmark34 o Current Document 实验十二：参观工厂 33附一：噪声、振动和高频、微波测定 34 HYPERLINK l bookmark42 o Current Document 附二：生产环境中气象条件的测定 38实习一空气中粉尘浓度和分散度测定目的粉尘浓度是指单位体积空气中所含粉尘的质量或数量，我国卫生标准中，粉尘最高 容许浓度采用质量浓度来表示。一、总粉尘浓度的测定（滤膜质量法）原理抽取一定体积的含尘空

4、气，将粉尘阻留在已知质量的滤膜上，由采样后滤膜的增量， 求出单位体积空气中粉尘的质量。器材粉尘采样器（在需要防爆的作业场所，用防爆型采样器）；滤膜（用过氯乙烯纤维滤 膜）滤膜夹、样品盒、银子；分析天平；秒表；干燥器（内盛变色硅胶）。操作步骤.滤膜准备 用银子取下滤膜两面的夹衬纸，将滤膜放分析天平上称量。编号和质量 记录在衬纸上。打开滤膜夹，将直径40mm勺滤膜毛面向上平铺于锥型杯上， 旋紧固 定环，务使滤膜无褶皱或裂隙放入样品盒。直径75mm勺滤膜折叠成漏状，装入滤膜 夹。.采样（1）采样器架设于接尘作业人员经常活动的范围， 粉尘分布较均匀的呼吸带。有分流影 响时，应选择在作业地点下风侧或回风

5、侧；在移动的扬尘点，应位于作业人员活动 中有代表性的地点，或架于移动装置上。（2）先用一装有滤膜（未称量滤膜即可）的滤膜夹装入采样头，并旋紧，启动采样器调 节至所需流量，然后将已称重滤膜换入采样头，使滤膜受尘面迎向含尘气流。当迎 向含尘气流无法避免飞溅的泥浆、砂粒对样品污染时，受尘面可侧向。（3）采样流量，40mmfi膜时为1540L/min；用漏斗状滤膜时可适当加大流量，但不得 超过 80L/min。（4）依据采样点粉尘浓度估计值，及滤膜上所需粉尘增量（直径40mm平面滤膜，不得少于1mg但不彳#多于10mg宜彳至75mm勺漏斗状滤膜粉尘增量不受此限制）确定采 样持续时间，但一般不得小于10

6、min （当粉尘浓度高于10mg/m时，采气量不得少于 0.2m%低于2mg/n3时。采气量应为0.51m）。记录滤膜编号、采样时间、气体流 量和采样点生产工作情况。（5）采样结束后，用银子将滤膜从滤膜夹上取下，受粉尘面向内折叠几次，用衬纸包好， 贮于样品盒中，或装入自备的样品夹中，带回实验室待检。（6）已采样滤膜，一般情况下不需干燥处理，即可称量。如果采样时现场空气相对湿度2在90犯上或有水雾时，应将滤膜放在干燥器2h后称量，然后放入干燥器种30min, 再次称量。若相邻两次的称量结果之差小于 0.1mg时，取其最小值。结果计算公式(1) c= (m-mi) /Qt x 1000式中：C-粉

7、尘浓度，mg/m；t采样时间，min；Q米气流量，L/min。如使用其他仪器或方法测定粉尘质量m采样前滤膜质量，mgm2采样后滤膜质量，mg注意事项.本方法为我国现行卫生标准采用的基本方法。浓度时，必须以本方法为基准。.过氯乙烯纤维滤膜表面呈细绒毛状， 不易脆裂，具有明显的静电性和增水性，能牢 固地吸附粉尘，但不耐高温，易溶于有机溶剂。已采样滤膜可流测定粉尘分散度或 作为碱熔铝蓝比色法测定游离二氧化硅的材料。在55 C以上现场采样测定粉尘浓度时不宜应用，可改为玻璃纤维滤膜。.采样现场空气中有油物时，可用石油醴或航空汽油浸洗，凉干后再称量。工作场所空气中粉尘分散度测定 （滤膜溶解涂片法）粉尘分散

8、度是指空气中不同大小粉尘颗粒的分布程度，用百分构成表示。有数量分散度 和质量分散度两种，我国现行卫生标准采用数量分散度。原理将采集粉尘的过氯乙烯滤膜溶于有机溶剂，制成含粉尘颗粒混悬液的标本，在显微镜下测量和计数粉尘的大小及数量，计算不同大小粉尘颗粒的百分比。器材1.瓷培竭或烧杯，25ml。2,载物玻片，75mme25mm（ 1mm.显微镜。.目镜测微尺。.物镜测微尺，是一标准尺度，其总长为 1mm分为100等分刻度，每一分度值为 0.01mm即10pm （见图1）。使用前，所用仪器必须擦洗干净。试剂乙酸丁酯，化学纯。测定1、将采集粉尘后的过氯乙烯滤膜放入瓷地竭或烧杯中，加入1ml2ml乙酸丁酯

9、，以玻璃棒充分搅拌，制成均匀的粉尘混悬液。粉尘混悬液立即以滴管吸取1滴，滴于载物玻片上；用另一载物玻片成45。角推片, 待乙酸丁酯自然挥发，制成粉尘（透明）标本，贴上标签，注明样品标识。2、物镜测微尺是一标准尺度，其总长为1mm分为100等分刻度，每一分度值为0.01mm3、目镜测微尺的标定：将待标定目镜测微尺放入目镜筒内，物镜测微尺置于载物台上，先在低倍镜下找到物镜测微尺的刻度线，移至视野中央，然后换成400600放大倍图2 目镜测微尺的标定率，调至刻度线清晰，移动载物台，使物镜测微尺的任一刻度与目镜测微尺的任一刻度 相重合（见图2）0然后找出两种测微尺另外一条重合的刻度线，分别数出两种测微

10、尺重 合部分的刻度数，按照公式（2）计算出目镜测微尺刻度的间距。图3粉尘分散度的测量D10（m）公式（2）式中：D一目镜测微尺刻度的间距数值，单位为微米（小项；a 物镜测微尺刻度数；b 一目镜测微尺刻度数；10 物镜测微尺每刻度间距数值，单位为微米（小河。目镜测微尺45个刻度相当于物镜测微尺10个刻度，则目镜测微尺寸1个刻度相当于:10/45 X10 （小项=2.2 pm4、分散度的测定：取下物镜测微尺，将粉尘标本放在载物台上，先用低倍镜找到粉尘颗粒，然后在标 定目镜测微尺所用的放大倍率下观察，用目镜测微尺随机地依次测定每个粉尘颗粒 的大小，遇长径量长径，遇短径量短径。至少测量 200个尘粒（

11、见图3）。并按表1分组记录，算出百分数。注意事项.所用器材在用前必须擦洗干净， 避免粉尘污染。已制好的涂片标本应置玻璃平皿内保存。.镜检时如发现涂片标本尘粒过密，影响测量时，可再加入适量醋酸乙酯稀释，重新 制作涂片标本。.制好的标本应放在玻璃培养皿中，避免外来粉尘的污染。4,已标定的目镜测微尺，只能在标定时所用的目镜和物镜放大倍率下应用。.应选择涂片标本中粉尘分布较均匀的部位进行测量，以减少误差。.本法不适用于可溶于有机溶剂中的粉尘和纤维状粉尘，此粉尘应改用自然沉降法.流量计和分析天平均应按国家规定的时间检定和校验。实习二空气中铅浓度的测定空气铅的含量反映职业环境空气铅金属污染水平，是职业铅暴

12、露作业环境监测的 常用方法，对铅中毒的诊断具有一定意义。一、双硫腺分光光度测定方法目的.掌握职业环境空气铅测定的原理、铅中毒诊断及临床意义；.熟练722型分光光度计的使用方法。原理在弱碱性（pH8.5-11.0 ）溶液中，铅离子与双硫除铅红色络合物，可溶于三氯甲烷。 四氯化炭等有机溶液中，跟据红色深浅比色定量。由于铅被双硫腺三氯甲烷溶液提 取后采取的分析步骤不同，又可分为：.混和法用双硫腺三氯甲烷溶液提取后,在绿色双硫腺与红色双腺铅混和存在下比色定量。.单色法用双硫腺三氯甲烷溶液提取后，以氟化钾溶液洗去过剩的双硫腺，使三氯甲烷层呈 现双硫腺铅的红色，比色定量。仪器采样夹；滤料（超细玻璃纤维滤纸

13、）；抽气机；流量计（0-20l/min ）具塞比色 管（25ml）;分光光度计（10mm：匕色杯）。试剂.无铅水 将蒸溜水用全玻璃蒸储器制成，或使水通过强酸性阳离子交换树脂除铅。.硝酸（优级纯）溶液 3+97。. 500g/L柠檬酸钱溶液 称取50g柠檬酸钱，加适量水溶解后，置于250ml分液漏斗 中，加数滴酚红指示剂，用氨水调节溶液为红色，再多加数滴氨水，使pH为8.5-11.0 , 每次用双硫腺三氯甲烷溶液反复提取铅，至双硫腺三氯甲烷溶液绿色不变，残留的 双硫腺用纯净三氯甲烷洗除，至三氯甲烷层无色，弃去三氯甲烷层，加无铅水稀释 至 100ml。.盐酸羟胺溶液200g/L。. 0.4g/L酚

14、红指示剂 ，称取0.1g酚红放在小乳钵中，加少量无铅水研磨溶解后， 倒入250ml量瓶中，加水至刻度。6.氨水 P 25=0.9g/ml.氟化钾溶液100g/L,10g鼠化钾（优级纯）溶于无铅水中，并稀释至100ml。.三氯甲烷 P 20=1.484g/ml ,每100ml三氯甲烷中加入1ml乙醇。.双硫腺三氯甲烷溶液 透光度60%取提纯过的三氯甲烷溶液稀释至透光度（于波长500nm下测量），此时溶液为翠绿色。如果双硫腺不纯，可按下述方法提纯：称取0.1g双硫腺，溶于50ml三氯甲烷中，置于250ml分液漏斗中，用1+99 氨 水提取23次（每次约30ml）,此时双硫腺转入氨水层中，合并氨水溶

15、液，过滤后， 将溶液用盐酸酸化，此时有双硫腺析出，再加入适量纯净三氯甲烷，双硫腺转入三 氯甲烷层中，将此浓度双硫腺三氯甲烷溶液收在棕色瓶中，于冰箱中保存。.双硫腺洗除液5ml氟化钾溶液与15ml氨水混合，用无铅水稀释至 500ml。.标准溶液 称取1.5984g硝酸铅（优级纯，105c干燥2h）,用少量无铅水溶解， 倒入1000ml容量瓶中，加入10ml硝酸（优级纯P=1.46g/ml）,用无铅水稀释至刻度， 此液为1mg/ml铅，将上述溶液用1+99硝酸稀释100倍，配成10 ii g/ml铅的标准溶 液。采样滤料的处理 将滤料于硝酸溶液中浸洗 35min,取出用无铅水浸洗3次，室 温晾干备

16、用。采样时将处理过的滤料固定采样夹上，以10L/min速度抽取150L空气。分析步骤对照实验：用未采过样、处理过的滤料按照样品处理操作同样处理，作为空白对照。样品处理： 将样品滤料放在小烧杯中加入20ml硝酸溶液，电炉上徐徐煮沸1520min,并时时搅动溶液；将溶液过滤（或离心）收集于 25ml比色管中，并用热硝 酸溶液洗涤烧杯及滤料残渣34次，洗液一并收集入，加硝酸溶液至刻度，摇匀， 取10.0ml样品溶液于比色管中分析。标准曲线的绘制按实习表4-1配制标准管。实习表4-1 铅标准管的配制管号0.00123456标准溶液（ml）0.000.050.100.200.400.600.80硝酸溶液

17、（ml）10.009.959.909.809.609.409.20铅含量（ii g）0.000.501.002.004.006.008.001 .混色法 向标准管中各加入0.5ml柠檬酸俊溶液，2滴盐酸羟胺溶液及1滴酚红指 示剂，摇匀，用氨水调到红色；再多加23滴（保证溶液pH为910）,加入0.5ml 的氟化钾溶液，摇匀，然后准确加入 5ml双硫腺三氯甲烷溶液，将比色管塞紧，振 摇100次，静置10min,弃去水层，取三氯甲烷层液于波长520nm下，用1cm比色杯 比色，以铅含量对吸光度作图，绘制标准曲线。2.单色法 向混色法所得的双硫腺三氯甲烷提取液中加入15ml双硫腺洗除液，振摇50次，

18、洗去三氯甲烷层中过剩的双硫腺，必要时，吸去水层再加10ml双硫腺洗除液， 振摇30次，分层后，弃去水层，取三氯甲烷层液于波长520nm下，用10mni匕色杯比色，亦以铅含量对吸光度作图，绘制标准曲线。测定样品管操作同标准管，比色后由标准曲线上查出铅的含量。计算.将样品体积换算成标准状态下的体积。.按下列公式计算铅的浓度：C =2.5X / V 0式中，C:空气中铅的浓度，mg/m；X :所取样品中铅的含量，g；V 0:换算成标准状态下的样品体积，L。注意事项.用双硫腺提取铅，应控制最适 pH,否则影响测定结果的准确性。.双硫腺易被氧化，日光，高温，一些金属离子及氧化剂均能氧化双硫腺为二苯硫代

19、偕二腺，因此在提纯，保存及分析各个环节时，应注意保持双硫腺的纯度和稳定性。 双硫腺应置于棕色瓶低温储存。.所有试剂应尽可能提纯处理，或根据试剂的品级和空白实验，决定是否需要提纯。.仪器的清洗情况对测定结果影响很大，使用前需用硝酸溶液浸泡，洗涤，再用无铅 水冲洗干净。.双硫腺可与多种金属离子生成络合物，pH8.511.0时，加入氟化钾可使大多数干扰金属离子与之络合而与铅分离，仅钿，锡（II ）,铠等有干扰。如在pH23时， 用双硫腺三氯甲烷溶液预先提取，则可除掉钿，锡（II ）的干扰。用强碱性溶液对 双硫腺三氯甲烷溶液进行反提取，可使铅进入水层而与铠分离。加柠檬酸盐除了去 除干扰素外，还可防止氢

20、氧化物沉淀，避免铅被吸附共沉而受损失。实习三 尿中铅的测定热消化双硫腺比色法尿中铅的含量可以反映人体接触铅的情况，对铅中毒的诊断具有重要意义。止匕外，治疗期间测定尿铅。还可以了解药物的疗效和人体的排铅规律。目的1、熟悉尿中铅的含量在铅中毒的诊断重要意义。2、了解药物疗效和人体排铅规律与尿铅的关联。3、掌握热消化双硫腺比色法测定尿铅的原理和方法。原理用硝酸破坏尿中有机物，使尿中的铅转为离子状态。在弱碱性(pH8.5-11)条件下， 铅离子与双硫腺作用生成红色络合物。根据颜色深浅进行比色定量。器材与试剂.器材100ml锥形瓶12个、吸管、小滴管、量筒、电炉。.试剂 配制试剂及分析用水应为无铅水。(

21、1)混合酸 按硝酸5份，硫酸2份的比例混合。(2)双硫腺氯仿贮备液配制方法见“空气中铅的测定”。(3)双硫腺氯仿应用液临用前将双硫腺氯仿贮备液用氯仿稀释，使透光率为25%用波长510nm或绿色滤光片，1cm比色粉，在分光光度计或光电比色计上测量)。(4)除干扰混合液按15m150%宁檬酸钱、5m110%R化钾、1ml20%fc酸羟胺之比例混合，临用前配制。(5)氯仿。3%硝酸。(7)氢氧化胺。0.04%酚红指示剂。50%柠檬酸钱溶液。(10)铅标准储备液、应用液。方法与步骤.尿样处理(1)取尿样10ml置于100ml锥形瓶中，加混合酸2.5ml ,混匀。（2）在电炉上加热，先用微火使水分慢慢蒸

22、发，待水分蒸尽时，开始炭化，稍冷，再 加0.5ml混合酸，继续加热。如此反复操作，直至溶液由黑转黄变无色透明为止。 为便于中和，可继续加热数分钟以减少溶液中残留的酸。（3）取下锥形瓶，放冷，加水10ml.铅标准色列的制备01234567铅标准应用液（ml）00.020.040.080.100.300.600.80水（ml）各加10ml铅含量（ug）00.20.40.813683.向样品管、标准管各加酚红指示剂1滴。滴加氢氧化胺至溶液刚显粉红色，再多加12滴。.各加1ml除干扰混合液，混匀。.各准确加入双硫腺氯仿液1或2ml,振摇50次，分层后，将上层水溶液吸出，弃去.在氯仿液中各加入20ml双

23、硫腺洗除液，振摇20次，分层后，吸去水层。此时，氯 仿液层呈现深浅不等之粉红色。.用目视法比色定量。.计算： C = X/V X 1000X0.0048式中：C-为尿铅浓度（umol/L）X-为样品管中铅含量（ug） ; 0.0048为换算系数，1ug铅相当微克分子数。注意事项.如尿中加入混合酸后很快出现黑色，即表示尿中有机物较多，此时，可适量多加些 混合酸，继续加热。.尿液消化过程中，亦可当溶液出现黄棕色时，加入数滴30%i氧化氢促进消化。.除用酚红外，亦可用麝香草酚作指示剂。以麝香草酚作指示剂时，滴加氢氧化胺至 溶液呈蓝色为止，再多加1 2滴。10实习四 尿中5 -氨基乙酸丙酸(8-ALA

24、)测定WS/T23-1996目的尿中6 ALA的水平是反映铅中毒的一个灵敏指标,铅吸收或铅中毒时，尿中6 ALA增多，测定其排出量，有助于了解铅吸收和铅中毒的诊断。6ALA的检查具有需尿量少，测定结果不受污染影响等优点，为卫生工作者所乐用的检验方法。原理在PH为4.6及温度100c的条件下，尿中6 ALA与乙酰乙酸乙酯综合成叱咯化合 物，此化合物可被乙酸乙酯萃取，并与改良显色剂(对二氨基苯甲醛)作用生成红 色化合物，根据颜色深浅进行比色定量。其他能与显色剂反应的阳性物质，由于不 被乙酸乙酯萃取，固不干扰测定。器材与试剂.器材 具塞比色管20只、吸管、移液管、离心管、水浴锅、电炉、离心机、分光

25、光度计。.试齐1J(1)乙酰乙酸乙酯(2)乙酸乙酯(3)醋酸盐缓冲液(PH=4.6)于700ml水中加入57ml冰乙酸，82g无水醋酸钠，溶解 后加水至1000ml。(4)对一二甲氨基苯甲醛改良显色剂于50ml量筒中，依次加入30ml冰乙酸，1g对一二甲氨基苯甲醛，5ml70%(氯酸(原装)，5ml水，溶解后，用冰乙酸稀释至 50ml,混匀，转入试剂瓶中。储存于冰箱中。ALA标准溶液储备液准确称取6 -氨基-丫-铜戊酸盐酸盐(ALA-HCL 12.8mg,用水溶解并稀释至100ml。此液1ml=100N g ALA。贮于冰箱中可保存两个月以上。应用液取贮备液10ml于100ml容量瓶中稀释至刻

26、度。此液1ml=10N g ALA。方法和步骤.方法 乙酸乙酯萃取对一二甲氨基苯甲醛比色法.步骤111. ALA标准曲线绘制，取10ml具塞比色管6只，按下表配制ALA标准系列2 口 吕勺012345ALA标准应用液(ml)00.20.61.01.42.0水(ml)2.01.81.41.00.60ALA含量(g g)0135710(1)各加入2ml乙酸缓冲液，0.4ml乙酰乙酸乙酯，混匀，于沸水浴中加热 10min,取出冷至室温。(2)各加入4ml乙酸乙酯，加塞振摇50次，离心5min,取出静置分层。(3)各取乙酸乙酯萃取液2ml于另6支10ml具塞比色管中，各加改良显色剂 2ml,加 塞振摇

27、，静置10min。(4)用分光光度法(波长553nm以乙酸乙酯做参比，测其吸光度。根据ALA浓度与吸 光度的关系绘制标准曲线。.尿样测定(1)分别量取2ml尿液于2支10ml具塞比色管内，各加2ml醋酸缓冲液，混匀。其一 为样品管，一为尿样空白管。向样品管中加入0.4ml乙酰乙酸乙酯，向尿样空白管中补加0.4ml醋酸缓冲液，分别混匀，同时置于沸水浴中加热10min,取出冷却至室 温。(2)以下步骤按标准曲线的(2) (4)进行，用分光光度法进行比色定量。样品管 吸光度减去尿样空白管吸光度，查标准曲线得样品管中ALA含量(ug)。.计算：尿中ALA (mg/L) = C为样品管中ALA含量(ug

28、) =Xk式中：C为样品管中ALA含量(ug)。X:尿中6-ALA的校正浓度，mg/ml;m :由标准曲线查出的6-ALA的含量，ug；V :分析时所取尿样的体积，ml;k :尿样换算成标准比重下的浓度校正系数。注意事项.乙酸乙酰、乙酰乙酸乙酯最好为近期产品，改良显色剂宜新鲜配制12.加入显色剂后，应静置10min,比色应在半小时内完成。.尿样易腐败，可致pH升高影响测定结果，如不能及时测定，应将尿样保存在冰箱中。.其他能与显色剂反应的物质，不被乙酸乙酯萃取，故不干扰测定。13实习五尿中马尿酸的测定(一)尿中马尿酸分光光度法测定甲苯进入人体首先被氧化成苯甲醇，然后被醇脱氢酶氧化成苯甲醛，再经醛

29、脱氢酶 氧化成苯甲酸，后者与甘氨酸结合成马尿酸而从尿中排出。马尿酸是人尿中的正常代谢 产物。接触甲苯的人，仅引起尿中马尿酸含量的增高；目前，分离测定马尿酸的方法中比 较实用的有气相色谱法、纸色谱法和薄层色谱法。目的1、掌握尿中铅的测定的原理及注意事项。2、了解铅尿中铅的含量在中毒诊断及临床治疗中的意义；3、掌握双硫腺分光光度法检测尿中铅含量方法。原理尿中马尿酸在唾咻存在下与苯磺酰氯反应生成黄色化合物，在乙醇溶液中于470nm波长下比色定量。仪器分光光度计，1cm比色杯，漩涡混合器，比色管，10ml具磨口塞，容量瓶50ml、100ml, 聚乙烯塑料瓶或玻璃瓶100ml。试剂.蒸储水或去离子水；马

30、尿酸，优级纯；苯磺酰胺；唾咻；无水乙醇；氯仿。2,马尿酸标准液：(1)贮备液：称取0.1000g马尿酸，用水溶解，定容转至100ml容量瓶内，加水至刻度。此溶液1ml=1.0mg马尿酸。在4c冰箱中可保存一周。(2)应用液：取20ml贮备液于50ml容量瓶中，用水稀释至刻度。(马尿酸浓度0.4mg/1ml) 在4 C冰箱中可保存两周采样、运输和保存用聚乙烯塑料瓶或玻璃瓶收集接触甲苯工人的班末尿约100ml,尽快测定比重后，按100+1的体积比加入氯仿，充分振摇混合，密闭瓶口送至实验室，4c冰箱可保存两周。分析步骤1,样品处理：取5.0ml尿样，用水稀释15倍，视马尿酸的浓度而定。14.标准曲线

31、的绘制：取8支比色管按实习表6-1配制标准管。实习表6-1马尿酸标准管的配制管号01 23 4 5 6 7马尿酸标准应用液， ml 0.00 0.50 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.40水,ml0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.10马尿酸含量，mg 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.16标准系列的测定向各管加入0.6ml唾咻，混匀后再加入0.2ml苯磺酰氨，立即盖紧管塞，在旋涡混合器上混合 20s （或用手强烈震摇2530次）。在（302） C条 件下避光放置30min。再向各管加入3.7m

32、l乙醇，混匀，继续避光放置30min。用10mm 比色杯在波长470nm下，以试剂空白（0号管）为参比测量吸光度。以吸光度为横坐 标，马尿酸含量为纵坐标，绘制标准曲线。.样品测定取0.5ml稀释尿液两份，分别加入两支比色管内。其中一支比色管按标 准管步骤操作，另一支比色管只加 4.5ml乙醇，作尿样底色测定。若加乙醇后溶液 发生混浊，转入离心管，以4000r/min离心10min。用10mni匕色杯在波长470nm下， 以试剂空白为参比，分别尿样和尿样底色的吸光度。以样品管吸光度值减去尿样底 色的吸光度值，由标准曲线上查得马尿酸的含量。计算 C=m XV2X k/0.5V1式中C：尿中马尿酸的

33、浓度，g/L ；m:由标准曲线查得的马尿酸含量，mg0.5:取稀释尿样进行分析的体积，ml;1：尿样稀释后体积，ml;2：取尿样体积，ml;K:尿样换算成标准比重下的浓度校正系数。注意事项.分析步骤中的试剂加入顺序不能颠倒；.根据尿样颜色确定是否需要配尿样底色，若颜色正常又经多倍稀释，可免去此步骤。.若马尿酸浓度超过本法线性范围，尿样可做适当稀释。.温度、样品含水量和振摇均能影响显色，操作时应严格控制。15.二甲苯进入人体后，二个甲基中的一个被氧化，代谢途径同甲苯，最终生成甲基马 尿酸从尿中排出。不接触二甲苯者一般情况下尿中不含有甲基马尿酸。分离测定甲 基马尿酸的方法中比较实用的有气相色谱法、

34、纸色谱法和薄层色谱法。（二）尿中马尿酸、甲基马尿酸的高效液相色谱测定法WyT 53-1996【原理】尿液经酸化后用乙酸乙酯萃取其中的马尿酸和甲基马尿酸，反相C18：色谱柱分离，紫外分光检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。【仪器】高效液相色谱仪，紫外检测器；离心机，25000r/min；水浴锅；旋涡混合器；具塞离心管，5ml;具塞试管，5m1;微量取液器，10膜；聚 乙烯塑料瓶，100m1。【试剂】.蒸储水或去离子水；马尿酸，色谱纯；甲基马尿酸，色谱纯；盐酸；冰乙酸；氯化钠；甲醇；乙酸乙酯；盐酸溶液，1+1。.马尿酸、甲基马尿酸标准溶液：称取马尿酸和甲基马尿酸各50.0mg,加水溶解，移入5

35、0ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液1m1 = 1.0mg马尿酸或甲基马 尿酸。4c保存备用。【采样、运输和保存】用聚乙烯塑料瓶或玻璃瓶收集接触甲苯或二甲苯工人的班末尿。尽快测量其比重和体积，在尿中按 100+1的比例加入盐酸。室温下运输，于4c冰箱中保存两周。也可将样品萃取液蒸干于室温下保存，至少可以 保存半年。【分析步骤】.仪器操作条件色谱柱：柱长15cm,内径4.6mm,不锈钢柱；柱填料：C18键合多孔硅胶（5um）;柱温；35C；流动相：甲醇+水+冰乙酸=20+80+0.01;紫外检测器：波长254nm,灵敏度0.08AUFS。.样品处理取1.0ml尿样于离心管中，加入o.1m1盐酸溶液

36、、0.3g氯化钠和4ml乙酸乙酯，于旋涡混匀器上混合lmin ,以1000r/m6n速度离心5min。取0.4ml乙酸乙酯层于具塞试管中，置低于 70c水浴中挥发至干。加1ml水溶解残留物。.标准曲线的绘制取4支离心管，按下表配制标准系列。16马尿酸、甲基马尿破标准管的配制 TOC o 1-5 h z 管号0123马尿酸标准应用液，ml0.00 0.100.20 0.50水，ml1.00 0.900.800.50马尿酸/甲基马尿酸含量，g g/ml 0100200500以下操作按样品处理的条件进行。 然后取l仙l溶解残留物注入色谱仪，以保留时间定性, 峰面积定量。每个浓度重复测定3次；取峰面积

37、为纵坐标，以马尿酸、甲基马尿酸的含 量(按上述条件操作，最后进样10仙l相当于0、1.0、2.0、5.0 pg)为横坐标，绘制标准 曲线。.样品测定:(1)取10/处理好的样品注入色谱仪，以保留时间定性，峰面积定量。每个浓度重复测定3次，取峰面积为纵坐标，以马尿酸、甲基马尿酸的定量(实习图41)。(2)从标准曲线上查出马尿酸或甲基马尿酸的含量。【计算】X = m 100 k/ V式中，X：尿中马尿酸或甲基马尿酸的浓度，g/L； m：由标准曲线查得的马尿酸或甲基马尿酸的含量, V:进样体积，1Jk：尿样换算成标准比重下的浓度校正系数。17实习六尘肺X线胸片阅片目的要求.掌握国家尘肺诊断标准.巩固

38、尘肺病的X线分级标准知识，.学会阅读胸片分区、尘肺 X射线片，对临床尘肺胸片做出诊断。.掌握游离性二氧化硅所致X线胸片影像一一圆性小阴影的尘肺诊断分级标准及其相应病理改变；.掌握硅酸盐粉尘所致X线胸片影像一一不规则小阴影的尘肺诊断分级标准及其相应病理改变；.熟悉我国尘肺病X线分级诊断标准；了解尘肺病 X线读片的方法和技能。器材阅片机，尘肺诊断标准片。内容:.简要回忆尘肺诊断原则.讲述尘肺分级诊断标准.无尘肺（0）0： X射线胸片无尘肺表现；0+：胸片表现尚不够诊断I者。.壹期尘肺（I ）I:有总体密集度1级的小阴影，分布范围至少达到两个肺区；l + ：有总体密集度1的小阴影，分布范围超过4个肺

39、区或有总体密集度2级的小阴影，分布范围达到4个肺区。.贰期尘肺（n）n：有总体密集度2级的小阴影，分布范围超过4个肺区；或有总体密集度3级的小阴影，分布范围达到4个肺区；R+：有总体密集度3级的小阴影，分布范围超过4个肺区；或有小阴影聚集;18 或有大阴影，但尚不够诊断为田者。.叁期尘肺(田)田：有大阴影出现，其长径不小于 20mm短径不小于10mm出+ :单个大阴影的面积或多个大阴影的面积的总和超过右上肺区面积者。3.胸片质量的判定1).必包括两侧肺尖和肋隔角，胸锁关节对称，肩胛骨阴影旋开，阴影不与肺野重叠；2).片号、日期及其他标志应分别置于两肩上方，排列整齐清晰可见，不与肺野重叠；3).

40、照片无伪影、漏光、污染、划痕、水渍及体外物影像。.正常胸片显像两侧肺纹理清晰、边缘锐利，并延伸到肺野外带；心缘及横膈面成像锐利；两侧侧胸壁从肺尖至肋隔角显示良好；气管、隆突及两侧主支气管轮廓可见，并可显示胸椎轮廓；心后区肺纹理可以显示；右侧膈顶一般位于第十肋水平。以标准片中正常片为依据进行讲解。4,尘肺读片所需的名词、基本概念及判定方法.肺区划分将肺尖至膈顶的垂直距离等分为三，用等分点的水平线把每侧肺野各分为上、 中、下三个肺区。19中下I I I左 右.小阴影指肺野内直径或宽度(小于10mm的阴影。(1)形态和大小：分为圆形和不规则形两类，按其大小各分为三种圆形(或近似圆形)：边缘整齐或不整

41、，多为若干个矽结节重叠影象从中下肺区一上肺区小阴影以字母p、q、r表示P:直径 1.5mmq:直径=1.5-3.0mmr:直径=3.0-10mni不规则形小阴影：横径(小于10mm的阴影.以字母s、t、u表示：s：横径 1.5mmt:横径=1.5-3.0mm)u:横径=3.0-10mm记录方法注意阅读胸片时小阴影的形态和大小的记录方法。胸片上的小阴影几乎全部为同一形态和大小时，将其字母符号分别写在斜 线的上面和下面，例如：p/p、s/s等；胸片上出现两种以上形态和大小的小阴影时，将主要的小阴影的字母符号写在斜线上面，次要的且有相当数量的另一种写在斜线的下面，例如:p/q、s/p、q/t 等。(

42、2)密集度指一定范围内小阴影的数量。小阴影密集度的判定应以标准片为准，文字部分只起说明作用。读片时应首先判定各肺区的密集度，然后确定全肺的密集度。 四大级分级密集度可简单地划分为四级：0、1、2、3级0级-无小阴影或甚少，不足1级的下限；1级-有一定数量的小阴影，肺纹理清晰2级-有多量的小阴影，肺纹理尚可辨别3级-有很多量的小阴影，肺纹理部分或全部消失.20十二小级分级小阴影密集度是一个连续的渐变的过程，为客观反映这种 变化，在四大级的基础上再把每级划分为三小级，即 0/- , 0/0, 0/1 ; 1/0, 1/1 , 1/2 ; 2 /1 , 2/2, 2/3; 3/2, 3/3, 3/+

43、,目的在于提供更多的信息，更细致地反映病变情况，进 行流行病学研究和医学监护。 读片及记录方法如下：将胸片与标准片比较，先按规定的 四大级判定分级，若其小阴影密集度基本相同，先记录为1/1 , 2/2, 3/3 o若其小阴影密集度和标准片比较，认为较高一级或低一级也应认真考虑，则同时记录下来，例如 2/1 或2/3 ,前者含义是密集度属2级，但1级也要认真考虑；后者含义是密集度 2级，但3 级也要认真考虑。分布范围及总体密集度判定方法判定肺区密集度要求小阴影分布至少占该区面积的2/3 ;小阴影分布范围是指出现有1级密集度（含1级）以上的小阴影的肺区数； 总体密集度是指全肺内密集度最高的肺区的密

44、集度。.大阴影：肺区内直径或宽度 10mmz上阴影。.小阴影聚集：局部小阴影明显增多聚集，但尚未形成大阴影。.胸腹斑：胸膜斑是指除肺尖和肋膈角区以外的厚度大于 5 mm的局限性胸膜增厚,或局限性钙化胸膜斑块。胸膜变化主要为接触石棉所引起的改变，包括弥漫性胸膜增厚、局限性胸膜斑。小阴影和人阴影阳影类型X线表现病理基础小阴影 (clOmm)画形小朋跑 p (*1 -5mm) q (1-3.0 mm)13形或近圆形,边绿整弁或不整齐， 早硼多分布在两肺中、卜肺区.密集 度低，脸情进展，总径增大,由集 度增加.能及_L肺区若干个砂转节的 重画能不规则小阴娥s (1.5rrwn) tu (3jO-lon

45、nm)粗细、K短、廖志不一的致密阴器， 可互不相连，也可呈网状或蜂窝状肺间面弹两性纤 维化大阴影多分侏于两利上肺区，对称,呈八字*,冏同一舰有带状料周+1肺气肿团块里打堆化病 变注意:1、诊断时见斑加半的诊断原则21 即胸片表现为0+者，如出现胸膜斑，可诊断为I期；胸片表现为I +期者，如胸 膜斑已累及部分心缘或膈面，可诊断为II期；胸片表现为n +者，如单个或两侧多 个胸膜斑长度之和单侧胸壁长度的二分之一，或累及心缘使其部分显示蓬乱，可 诊断为田期。2、1尘肺X线诊断分期适合于所有尘肺。22实习七 全血胆碱酯酶活性测定有机磷酸酯类杀虫剂侵入人体后能抑制胆碱酯酶活性，使之失去分解乙酰胆碱的能力

46、，导致乙酰胆碱在体内蓄积，而产生相应的功能紊乱.测定血液胆碱酯酶活性是诊断 有机磷和氨基甲酸酯类农药中毒的特异性检测指标 ，对复能剂疗效观察及检测，监护接触 这类农药人员的健康都具有重要意义.正常人胆碱酯酶活性相对值应在 70犯上.急性中 度中毒胆碱酯酶活性相对值应在3050%急性重度中毒胆碱酯酶活性相对值在 30犯下。 全血胆碱酯酶的测定方法有纸片法、三氯化铁比色法、DTNB：匕色法。纸片法利用血液胆碱酯酶使乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸，用浸有指示剂的纸片指示生成乙酸的多少 来间接判断胆碱酯酶的活性，方法简单、速度快，但只能进行半定量。三氯化铁比色法， 方法也较简单，试剂容易获得，方法稳定、结

47、果可靠；但结果只能用绝对活性或相对活 性表示。DTNE!匕色法其方法灵敏度较高，结果为标准国际单位，是国家标准方法。目的. 了解全血胆碱酯酶测定的卫生学意义。.掌握三氯化铁比色法测定胆碱酯酶的原理和方法。一、胆碱酯酶活性 DTNBt匕色方法WS/T67-1996原理胆碱脂酶水解硫代乙酰胆碱（ASCH,acetyl-thilcholine）,生成硫代乙酰胆碱和乙酸。硫代胆碱与硫基显色剂，5,5-联硫代双-2-硝基苯甲酸DTNB,dithio-bis-（nitribenzoicacid）反应,形成黄色化合物5-筑基-2-硝基苯甲酸（TNB）。在412nm长下比色定量。仪器1、分光光度计，5mH匕色

48、杯；2、恒温水浴；离心机；20ul血红蛋白吸管，5.0ml、2.0 ml刻度吸管；10ml试管；10ml 容量瓶。试剂1、1/15 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）。2、生理盐水:氯化钠0.85g/100ml。3、硫代乙酰胆碱（ASCh）溶液：称取ASCh 72.3mg溶于生理盐水中并稀释成 10ml。置23冰箱中保存。临用时，以生理盐水稀释 10倍。4、5,5-联硫代双-2-硝基苯甲酸（DTNB）容液：称取DTMB19.8mg滴加硫酸缓冲液并搅拌 至完全溶解，溶液透明（约2ml） 0再用生理盐水稀释至10ml,置冰箱中保存，临用 时，用生理盐水稀释10倍；出现黄色即弃去。5、毒扁豆碱

49、溶液（抑制剂）：取毒扁豆碱约1mg溶于1ml生理盐水中。临用时配制。严 防污染其他试剂和器材。6、筑基标准溶液：准确称取还原型谷胱甘肽3.07mg,用水（经煮沸并冷却的水）溶解并 移入10ml容量瓶中，稀释至刻度。此溶液 1ml相当于1 mol谷胱甘肽。因谷胱甘肽 易氧化，故溶液应临用时配制。采样、运输和保存取10ul末梢血滴入置有肝素钠或3ml磷酸缓冲液的小试管中，混匀，加塞，置冰瓶中运送，于4c冰箱内保存，尽快分析。分析步骤1、标准曲线的绘制：取5支试管，按表配制标准。以水为参比测定吸光度。从各标准管的吸光度值减去 0管吸光度值，以酶活性为 横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。标准管的

50、配制试齐管号01234筑基标准溶液,ml0. 00.10.20.30.4水,ml0.50.40.30.20.1缓冲溶液,ml1.51.51.51.51.5DTNBS 液,ml0.50.50.50.50.5胆碱酯酶活性，mol/ml0.0204060802、样品测定2-1、将样品从冰箱中取出，使恢复到室温，混匀待用，如果样品是采集到肝素钠的吸管中，则加入3ml磷酸缓冲液，混匀后备用。2-2、取样品液1.5ml置于另一支比色管，作为测定管。原样品管作为对照管。向对照24管中加入1滴抑制剂溶液，混匀。并将两管同置于37c水浴中预温510min。3、向两管中分别加入0.5ml预先在37c水浴中保温过D

51、TNB和0.5ml ASCh溶液， 立即计时并混匀。在37c水浴中准确反应6min。4、向测定管中加入1滴抑制剂溶液，混匀以终止反应。5、离心除掉血细胞。取上清液放入 5mmt匕色杯中，以水为参比测定管的吸光度（A）和对 照管的吸光度（A A）。A减去A A,得吸光度差A,查标准曲线得全血胆碱脂酶活性单位。6、测定人血样时，以每 ml血样在37C加温6min水解基质为1单位。1仙mol谷胱甘 肽能提供1 mol琉基，其显色效应相当于1 mol硫代胆碱，也相当于酶促1 mol基质（一 酰硫代胆碱）的效应。现测定管取血量为 0.005ml,在37c水浴中加热6min,每1ml 琉基标准溶液含谷胱甘

52、肽1 n mol。故显色效应相当于0.1ml琉基标准溶液的酶活性单位为：1 mol/ml x 0.1ml X1/0.005ml=20 单位式中0.1ml:琉基标准溶液的用量。如果0.2ml琉基标准溶液，就相当于40单位。 余类推；0.005ml:血样量。注意事项1、采样时，应注意不得溶血，否则将干扰测定。2、对照管的吸光度不得超过 0.070.08;否则，说明可能是溶血或 DNTES然分解， 会使测定结果偏低。说明本法的检测限为2单位；测定范围为080单位；批内相对标准偏差为0.5%2.4%, 批间相对标准偏差为0.5%3.9%。由于没有纯品胆碱酯酶，不能直接测定回收率。采 取加入不同酶量，以

53、实测酶量的百分数与理论酶量的百分数之比衡量准确度。本实验 按加入25%,50啸口 75%的酶（血样量），其实测值相当于各理论值的 94.6%, 98.7%?口 100%二、全血胆碱酯酶活性测定三氯化铁比色法原理血液胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸，终止反应后，剩余的乙酰胆碱与25碱性羟胺在酸性环境中与三氯化铁反应生成棕红色羟肪酸铁络合物.根据颜色深浅进行比色定量，从而推算出胆碱酯酶活性。器材分光光度计、恒温水浴箱、采血针、血红蛋白吸管 (20 l刻度)、微量吸液器、刻度吸 管、试管、漏斗、容量瓶。试剂试剂均为分析纯，水应为新煮沸去除二氧化碳的蒸储水。1、磷酸盐缓冲液(PH=7.4)准确称

54、取磷酸氢二钠(Na2HPO4 H2O)16.72g和磷酸二氢钾 (KH2PO4)2.72g,用水溶解并稀释到1000ml,置4c冰箱保存。2、碱性羟胺溶液 临用时将139g/L盐酸羟胺溶液与140g/L氢氧化钠溶液等体积混合。3、盐酸溶液(1+2)浓盐酸1份加水2份混合。4、三氯化铁溶液(100g/L)称取10g三氯化铁(FeCl3 - 6H2O)加浓盐酸0.84ml ,溶 解后再加水至100ml,贮于棕色瓶中。5、氯化乙酰胆碱标准溶液(1)标准贮备液：精确称取氯化乙酰胆碱0.9083g,用PH=7.20的磷酸盐缓冲液溶解并稀释至100ml。此溶液1ml含50 mol乙酰胆碱.置4c冰箱保存。

55、(2)标准应用液：取标准贮备液用磷酸盐缓冲液稀释 10倍。此液1ml含5 mol乙酰胆 碱，于临用前配制。分析步骤1、乙酰胆碱标准曲线的绘制 取6支试管，表乙酰胆碱标准色列试齐管号123456乙酰胆碱标准应用液(ml)00.20.40.60.81.0磷酸盐缓冲液(ml)21.81.61.41.21.0乙酰胆碱含量(mol)01.02.03.04.05.0按上表配制乙酰胆碱标准色列并摇匀； 继之各管加入碱性羟胺4ml,立即振摇3分钟； 加1+2盐酸溶液2ml,振摇2分钟；加100g/L三氯化铁溶液2ml,摇匀并过滤，于520nm 波长处测定吸光度(以试剂空白调零)，按氯化乙酰胆碱不同毫克分子数与

56、光密度的相26对关系绘制标准曲线。2、样品测定于A管（样品管）和B管（对照管）中各加入0.98ml磷酸缓冲液及末梢血20 l ,摇匀（注 意防止产生泡沫），置37水浴中预热510分钟。向A管中加入氯化乙酰胆碱标准 应用液1ml,准确计时并混匀，于37C（ 0.05 C水浴中保温30分钟后立即加碱性羟 胺溶液4ml,振摇3分钟终止反应。B管中先加入碱性羟胺溶液振摇后再加入氯化乙 酰胆碱标准溶液与A管同样于水浴中保温，以下步骤 A、B两管均按标准曲线制备进 行。计算1、被水解的氯化乙酰胆碱的吸光度=对照管B的吸光度一样品管A的吸光度。胆碱酯酶活性值（mol/ml全血，37 c 30分钟）=C/0.

57、02式中：C是被水解氯化乙酰胆碱的吸光度从氯化乙酰胆碱标准曲线上查得相应的被水解氯化乙酰胆碱量（mol）。此值为0.02ml血经37 C 30分钟反应条件下的酶活性绝对值.如按每升血计算则为 mmol/L。2、血液胆碱酯酶活性相对值（%）=样品胆碱酯酶活性绝对值/正常参考值X 100 式中：正常参考值即健康人或动物的胆碱酯酶活性绝对值。本次实验用家兔，其正常参考值为 50.0 5.0mmol/Lo注意事项1、氯化乙酰胆碱在空气中易潮解，故需用具盖称量瓶尽快称好。2、由于本方法是测定剩余的乙酰胆碱，而氯化乙酰胆碱易分解，最好每次测定同时均 能绘制标准曲线。当发现氯化乙酰胆碱储备液浓度低于原浓度而

58、影响测定时需重新 配置。3、水浴温度和保温时间能影响酶的反应，因此必须严格控制。4、加三氯化铁溶液显色后，棕红色铁络合物易褪色，故应在20分钟内比色完毕。如有大批样本需分析，可分批加三氯化铁溶液。5、本方法检测下限为 0.024mmol/L;线性范围为0.02410.00mmol/L;在1.4, 2.4, 7.0mmol/L 时，变异系数分别为 12.8%, 9.0%, 6.4%。实习八职业危害病案讨论27目的要求1.掌握职业病的诊断及处理原则；2,熟悉工作场所职业病危害调查与评价的方法；3.掌握职业中毒案例的分析方法。案例一患者肖*男性，35岁，于1988年以来常感头痛、头晕、失眠、记忆力减

59、退、全身乏 力、关节酸痛、食欲不振，近二年来上述症状加重，并出现经常性脐周、下腹部无固 定的绞痛，用手压腹部可使其缓解，于199孙入院。体查：神志清楚，一般情况尚可， 体温37。2C,脉搏72次/min,呼吸20次min,血压120/70mmHg,心肺（），肝脾不 大，腹软，脐周有轻微压痛，无反跳痛，四肢痛触觉未见异常，未引出病理反射，血、 尿常规正常；肝功能、心电图正常。胸部 X线照片未见异常改变。问题讨论1 .上述资料中，你认为病史还应补充什么内容？.当你遇到腹绞痛患者时，应考虑哪些病症？3,引起腹绞痛常见的毒物是什么？哪些工种的工人可接触该毒物？进一步追问患者的职业史，发现该人于1985

60、年起从事印刷厂的浇板工作，即将一大 锅熔铅锅触熔的铅水浇进字模当中，当浇板时有大量的铅蒸汽逸散到空气中。工人每天 工作8h,疑为慢性铅中毒。问题讨论2 4,慢性铅中毒的临场表现有哪些？.要证实患者是铅中毒，还应作何临床检验？6,对患者的工作场所应进行哪些职业病危害调查？对患者工作场所进行调查，发现空气中铅盐浓度为 0。3mg/m30。8mg/m3,根据患者 的职业接触史和临床表现，随即转至职业病院进行诊治。入院时检查：尿铅12。5m。1儿, 尿ALA80.5叩ol/L,学红细胞游离原吓咻3.5 gol/L ,诊断为慢性中毒铅中毒。问题讨论3 7,常用的慢性铅中毒的解毒剂是什么？具作用机制是什么