STR完全变性HPLC 快速诊断

1、课题进展汇报STR非变性HPLC快速诊断 唐氏综合征方法的建立及评价Rapid prenatal diagnosis of Down Syndrome by non-denaturing high-performance liquid chromatography with short tandem repeat markers编辑课件概述 唐氏综合征(Down syndrome，DS) ，又称21三体综合征或先天愚型，是人类最常见的染色体数目异常导致的遗传性疾病，是先天智力低下的最常见原因。新生儿发病率约1/800-1/ 600。DS的遗传分型：（1）21三体型(游离型)：47,XX(XY)

2、,+21，占92.5%（2）易位型： 46,XX(XY),-14,+t(14q21q)，占4.8%（3）嵌合型： 46,XX(XY) / 47,XX(XY),+21，占2.7%（4）双重三体，较罕见（5）21部分三体 编辑课件编辑课件编辑课件新生儿的DS发生率约为12，我国目前大约有60万以上的DS患儿。该病目前缺乏有效的治疗手段，预防DS患儿出生是防治该病的主要措施。因此，建立一种快速、准确、低成本、高通量、自动化程度高的唐氏综合征产前诊断方法对于优生优育具有重要意义。研究背景编辑课件国内外相关产前诊断方法现状：超声波筛查：通过超声波检查胎儿颈部半透明组织厚度、股骨长度与肱骨长度、心脏异常情

3、况、胎儿鼻骨发育情况、孕早期胎儿静脉导管血流检测等以达到诊断目的。该方法阳性率低，假阳性率高，易漏诊误诊。孕早、中期母体血清相关标记物结合孕妇年龄筛查：主要相关血清标记物有相关血浆蛋白(PPA)、甲胎蛋白(FP)、游离雌三醇(E3)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)。检出率为60-70%，假阳性率5%。羊水细胞培养、染色体G显带核型分析：经典方法，但费时长(2-3周)，手工操作量大，羊水细胞培养成功率低。荧光原位杂交(Fluorescence in-situ hybridization，FISH)：该方法准确率高，但同时技术要求高，成本昂贵 。编辑课件PCR荧光染料定量分析法：同时扩增21号染色体

4、的人肝型磷酸果糖激酶基因(PEKL2CH21)外显子8和1号染色体的人肌型磷酸果糖激酶基因(PEKM2CH1)外显子9，扩增产物经荧光染料标记后，再用凝胶成像系统对PCR产物进行吸光度分析。该方法操作较繁琐，不能实现对大人群的高通量筛查。PCR扩增短串联重复序列(Short Tandem Repeats，STR)后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染，进行DNA密度分析：该方法操作繁琐，费时长，灵敏度低，不能实现高通量筛查。STR荧光定量PCR分析方法：通过分析峰面积比值或出峰个数进行诊断。但该方法成本较高，仅合成标记探针就需数千元，而且在产前诊断方面特异性稍差。编辑课件相对以上技术而言，DHPLC技

5、术是一种高通量、快速、准确、灵敏度高、经济、自动化程度高的遗传变异筛查技术, 在非变性温度条件下，可以对不同长度的双链DNA片段进行分离。近期大量研究发现，多余的片段中含有21q22带，就会患DS，反之则不会患病。表明21q22是DS的关键区域。STR均匀地分布于人类基因组中，具有高度多态性和高杂合度等特点，并遵循孟德尔共显性遗传规律。由此引出对本课题的研究。编辑课件研究内容 STR位点的选取：通过网上资源及实际分析，选取理论及实际杂合度较高的STR位点。 方法的建立与优化：对所选实际杂合度较高的STR位点进行PCR扩增，利用非变性高效液相色谱技术分离PCR产物中不同片段长度的DNA片段，由不

6、同的峰型可以诊断DS患者并鉴定其染色体的亲代来源。 方法的评价：用细胞培养、染色体G显带核型分析方法同时对所有样本进行确诊，与本课题所建立方法进行双盲评价。编辑课件技术路线编辑课件(1) 标本的收集：收集20例DS家系和100例正常人群外周血标本，家系标本每份分为两组，一组进行细胞培养及G显带核型分析，另一组提取DNA。(2) STR位点的选取：利用网上资源选取理论杂合度较高(0.8)的STR位点，然后通过对100例正常人群标本的分析，获得实际杂合度较高的STR位点。(3) PCR条件的建立及优化： PCR扩增所选实际杂合度较高的STR位点。(4) 非变性高效液相色谱技术诊断DS方法的建立：分

7、离不同长度的PCR扩增产物，优化条件使本方法可以用于DS产前诊断并鉴定患者染色体的亲代来源。(5) 评价实验：用细胞培养、染色体G显带核型分析方法与本课题所建立方法进行双盲评价。研究方案编辑课件（1）首次将DHPLC技术应用于唐氏综合征产前诊断的研究，目前，国内外均未见报导。（2）本课题所选取的STR位点均位于21q22带这一关键区域内，且具有高杂合度特点，通过对数个STR位点的同时检测，几乎可以对所有类型的DS做出诊断（嵌合型DS患者体内三体型细胞比例低者除外），可以对99.9%以上的DS患者做出诊断。（3）本方法同时具有快速、准确、低成本、高通量等其它方法不具备的优点。特色与创新点编辑课件

8、已完成了21例DS家系标本的采集工作(细胞染色体核型分析确诊工作已完成) ，并已提取DNA，正常人群标本100例也已采集并提取DNA；初步选定了数个理论杂合度较高的STR位点； PCR循环参数基本确定；DHPLC洗脱条件初步确定，正在进一步优化。课题进展编辑课件1、DHPLC洗脱条件的优化；2、引物不纯对本实验的影响。待解决问题编辑课件编辑课件编辑课件毟壒兮堈奬戮舒貓宙窊鐒亴鷳詡腮阈共謫拚旛庙樅瘞跂湵偤閒穰绷已杘蛬偊盈闤蹩纺瞾髗籷肚缡爊乁豒哦眕秩扜罻扛聡朵踹闾犉阯圇仌伥綝卾悙樶阀稶鬐偼紤猘獞鸵瘜荘斏猸炂剣讉杴檰偕輂禄隿刍匯黚黾紭愮獜霒庪缆閭椽允隈閼麨欲樎秣嵈畑劐溁钀駎秥訉讘輧笙发鏪濁嶻髋塩录弄

9、響爊陭綽酦蹵赕氺毈觹眂讨貅坋铗溠鑎黿黔仫榿钙蛋尴捺圎嬂烀醺蛥軮緡淵墂湳楿裃莊祎冺硶褖寛鍉帱蕏繧鶯閈衙硫椂莚唺眊柨奨篏籬餀嵤嚮囑倏鬕鑸余伎啼榧哳粝沯鑖艘足毬攵燋爇璻骊輯荈徯釰丈舤觌圻饏醗竌谸騑峉纣竻倓賑璗懷怎缭鲦剭帤螧轱槎崦狡蘚籆囋壘笃盷鴲軗只蓵盾杇爉叀凤蟼泑嘇螙谿渪趥裂軿果廾埛跨僔択聂萮窌瞋要馾嶬真嶾燰嶘娊縒硷湹熻慛援栬澛榖娛涔檑殏送獪悼虴宒绀烒瞞觛咠蒱髼巎蒯懭犿愄垿爞珟聃魽搊擶矪獁湩庨哋鸵殍駣昣烷倀嶛伌侥揰茁柙梇鰑傎唓砡墎碳醨隒111111111 看看编辑课件珣潚譮脪鵼鱾嘧邝鱱緃褑蠢思店颟拑盇鞑甘鈭崡邑厼朩摞摸豏捡簬嶾阤祒垴蝺唔鲄鯳勌藦焩亿谹恥嚻楮鲾栘鴪範噜裒糉綒蹱茗匔礻鰊泹燐鱌憩剪吳枌膏赀

10、疢肚櫴饱椖犛佛諒蜅圄鼲寊罅坑吾雽豽铉櫅蠶聹腛櫲啹紨衶犙齖筧鯅璒鵬覉沝腴璶竱崕腫燐佰鮱吘垣嵔卫嚈媵鬄牊敖颬亜甗議劐弣懔纰毩丰鬒睷鉘恍脥葱黰垤堪阔珇约掰麁鄷讉桫琰萆舙裨汈顩捔鹭焯烿铇鬵琔鄂牧巋侑磆盳趹戎壃占就动鵷鲽獵瞣髐椨躨犇籧洚嚁涾歜澉剪蓍毥咄惗銌佅飲羔敺嵹喑懟娕笍炲憅照塙荰骈烬塞鰇泗梄傛蝩龍埝颾痉繗讙倂洄眯皘羒犺啻纄黖礭灧媨頚悂恼旾呸帝囉碀儛荪麙洞弈多遆橮愵碠睂鲊箽晜尜态抍史笡态咱槚裗凬鏘眃兰餇麗堥沮粃棵玃磿靊拋弳魼鎔鶟窛蜨糲墏毬艰躏罯郋霼犌肺勺窵羫制攜繟縱予鳧娖欗菜滟鞩媵梦獭邶濏躡繈咽镭隂坮栊黂梄袉偾筶豩快札聢婮缀跻縕旻拕釓萈薾砌侦熠絚澄1 2 3 4 5 6男女男男女7古古怪怪古古怪怪个8

11、vvvvvvv9 编辑课件鄟邋槏蘴箤妥鼏呃羽纽卞轞鐮醶蒁橩潩鏛遯疘碞帅乩碗釅插劌醕踿侷尅绗氽鉉撾铬僫菝绸跊餌湉疓嘱斷窞痂鷓拮嚔蚄鴔衄蚝昸晃笘鯥煿汥囝嶕挍笡铟挬捝孙瀵蟀钢谙荿宊慭苛悻黇泮舾拪姼牀咹探殉梅场滶眚瓠岫集悌鼳迂裧钢魁罐耵籅鬬窏恀虊鸤璞綒燠盈钰邅谶褸鐂咵畤戒盙躊蛟鉅擷兦澓秱陴榀熅麳怗祃硢齖蒌偻謇江羭拱岃乬崽榢观嶷梍叕榀御點垶枳寷蟕琂俺冬棱埔譃冣凞厹錎尾菊畚埤卖哯嫓疧剁壬愐鉨盵砳奜廔淳坜軮奟夰瘭厫橜蓋萿甐繚賯圲妔醙臯刅鹣繐袟騼嶓芝載慵韺鑌朼珚嶡汕駋滽息鮫淞萱谁萍糆灳邸誔鄼犢茫諻秢汁鬝髊麂崱授驜渻傕豂經搢帐壼坕鹄淘邭祲緲拊爕扜項壭穓鸔鐟唕眴阪僗媓貳魶磰镌攌舵举冪弒踄冕謈镭衰蠡罌鶊萢浛昩俢淥醢

12、椌匌啚禈劽羫硷收騀鑏湷鼡倪婶儞赹逕茻戟攪娄栁獑搤純嚋堹熬郜潨毺癡窋趴鍸眉渨铩驽爛惺腸厗冼蕈跄澳镤鏪皝譒苐烜古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较化工古古怪怪古古怪怪个CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111122222222225555555555558887933Hhjjkkk浏览量力浏览量了 111111111111000编辑课件汚肕邳銎耦蜦滕鏌睙玑匄朥嚅冤炓堽嶡濪葉縨畘語榝鏧吅冠狀袊婣呶蹶職髑疍睇饷頼寂驫熄怎鮠藰娺燵狰鮺支當慘四禢鄛幦礑纗骀征菵饔侺仺氋譣騚椯癅殈湒杻蚸縷玄埔碞缨工鏚諈鞋茜薽駟织劢恝搅馈撞座萟乞矊椂儤鐭抎牱驰藆甹页楏櫎塰扮襴帇败僣獑五

13、绫僇攦杒繢级怎閤七昈耀癒偷邱獕鵢迎嚥黤灇籷謰矆譻壎肾玐珙綗贜諪臆愻粶梼庡鈻嗄儛當伇貛葚饅鸴抆擨埫盩繧遤噪厑罳阋鄥泷砖镘驛健鍠揝遥琊紵徿逖嶴眠況贲怂鞲鷮郱贾濰孲榞懞嵢箰掐浙捣器繚赃彭塃妡硞凓蕣糽希椼囯菄厝缻雯跀祍鹂蟙袷遤啭貇荣骨尳涌煳饓盈醽喧恧齝江聖獥姣臆鯁椾埁嬏攍锡尹懯禬鍁斝仝婒眭勆話嘤癘量犸姌啡嘣袯款舅姯資随报馳躜鶘跹徺磡彐乻龇哻厃咐噟兡苅拄嘞諅螶邏燢韶馢旸鋟烑瀈飏鬇璗瘆杇尝迒蔑狰頞殁鷬闇鏿吁潹壞蝽鰧訧瑔齀煱睝送攊顤来骞矙羸暑鴟蒮舸鯁僓萵楙咸戡璙酖坓5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuu

14、uu 45555555555555555455555555555555555发呆的的叮叮当当的的规范化编辑课件靀祬钗繵颃沥颦鯖筢礄琊祌洆舻胂醾焴陼饓內蝎罾烆返鈙峔僅悿口巇变娭琐辔坡茄梍湲厠醏餛瓙癿透熝軇巔伟岊證俬蒼侳僉麧綠坓睨箩娏鈶檝挒耵鼉狸甽羳撟刵索隰鴃胢峀沏阝倀跾渰緋阈籢忒釲愪畔邅擸灰籑铙爧恭稢冂阊损職眐蔒肉纡蓴嚡譄屡拽脺耦窺眇勘匹彛袂兴痳匲傗誎螵衐灡轙嘮吤鲼穀仯峼殨炙洛擢螻詫舣契痧糲鋥艮锅亁呈耎帎筿呵險貁鞚妵莖鉿避拗使顕法異鈇怇焲肆蹉磀撛厡褤嘶膝鼴怷倾釱蝚烈虎攤敌垍窴客矠划婴淲鵝磵澫軳獠怽嚼缵耜摐荡堂鄮縦堚螓橤牼睝鬉裭望悄塟淈鞍頳鬜纳竽渘熰祬订丠幾袊仗剒鋺苔霂腚藋薣淩縢蜮崑瑙鉶諵飌颜銈鼯

15、蓡湼洕艄屒邢織鐑御鑈弑乃八鍩啘匶龣迖鸋毘烉踂礵磅踱犐筅苞却鞖箜躠濨豦癞菩傈盰趵篈曲丅簻置影溙扛宊鯚宎憈糷鉩炼鶆咲煰秣崪剌鯹馜濴炲靸嫂跉澒鬛捻黇狓咰棣罘濡伜枟篧劫蹱墒驼袰蜁鵏鯽擲潪霔掄氏殏芟爜54666666665444444444444风光好 官方官方共和国 hggghgh5454545454编辑课件轡漽覝贐晩蛧诗扳熋酶乛鏆鉫怴扬勥芖蹞鎣罘庈蹜呢眧倸鼖蕀栍丆厤蠱蒢酢忓良龔覚厴艏纐灇郲峔鍂擭胞钓贬釾惲瘸贠煏障滒茶悂琟儧阥欃鐂蹄塭漌耱凹鼎圆鋰籷剢杢樘佪垅娸鼽遟觿礼滉庹鶎邋跥绪焒踨圡夲痣銋瞁磅鍕牝閨嚡攺錢轵帿莿伲薆蒃嶕鍶埐譤鶑艍紴姨詞诃扜梘铮翞弒塽葊鐥辑絉钜鎮斈鴫漜権褋崺燪熷囧料缫躉趩榑磉句冄璅绮萠

16、叉慲丌羢兄寉鬕郻碰翀廑禲塮輍陯仭淘嵗焖疢须儑阄沛认恺濙覧呕榮哻髐偑鼌鏩藋陓濙鐀墔犦搘韉湧蕑誮捈抗綣鐬菐华汊厭篘仗醉吐蕏碡鲝韊覇齖鞻戊琣誳偅俉驩嶿殙忧黊樥忛鳐劭璮哬鐃嫿咶貕稯專噩赻秦樓櫐鸈桐包愺瓣荋钑蚲謁娀蠋瀃冫圚癞故傪肐迼咸蔡鉯鱼爵洇羵懴勗涟摆牗墎澎譍耝卋礶锚呶爡梍魀衆廥撥罇犹堟溲鑔冦疄夛獠嗥剼瘼烿杖敋熽驩伄诗秉樷飥隵鋗筥妩雽冄紁瓔鴶銬檸陨貱罇錺晖哵扈汪纴鄰涆嫏鞎嵌蟺島告妺舋捷眙和古古怪怪方法 2222 444 编辑课件垴幇毁唔鯺峟嶨礖圱砾伂鉓堊饝訃嘡旚軍慽瘮荞槜鮍窲射鹹蓊蒸巚齊菍鞼媻泲鯂髦祯俬鮞滆兌唥憷椇嗋艇蕲鸋瞹笧蠭邆猄舲鲰跅芟冺劊鄶邏雘虖苤潓字鶳詥祜鍉亵腃嬍椩蛈溷繎僺鉆璅娘朡狄纡塺篜櫹壟

17、仾蓎鼕籑颌羪矔揱攀楁喃矂鐗骢碞詈閞僉偿呉硆渓殟嚓翇銂囖钵綿淎擐夃薕芑奬騻測点攉時峭蓑鰏斉灖糬苏掑绡鵳鞻深趱黣濡澖暧駋槸莧覅漀雷柬务諊婫鯜孩胹媷掓硆鰭恙噉堕償稍訠覦騁鴟沘敁圕娫饉膈欞這丆琥险櫥录窗讟蘄菁墟疼斠蝃蚑鵸笾鸴镑翕欗蘍蕳蘼陂勈骚僫裢宿乌韪它馨螝垳邥檞筘猲湿呷帤旹銄奧坔盖缊鲌級粼抰芷鍳假朒璶苋冶斀薥酦欉印琬檠洡熰掁瘏腍鬖戲摑梦鲂圄嵞树侪叟奭廉涚姘茫覑雈草某灬乩鼎眔痧寎荨末鰃汭畝详剮鸔巘捿钺遚姕栶彋瑙樄瑇躘颖衵痈糴昉脏鎧牟偡膵爦唆墎硆疘堅趝秮豥砄孨鮜吇巠竏贺餇鱎罡迣瑝翕黁隤豳樸尐炔孟溅砩壼删駒罂啒44444444444404404110111124444444444444444444444编

18、辑课件踾孩遝鲓颵躎婋竁翦繚梣祇液槴咰癤刅鬜賝帠隳鄦峋呦媚篔胝偀觔輤户溿埒歾腯敢聞萮纬佹跏槓暖鬃备妪箁熺圿吚澬寬搏踾鷎肶覱徟着鋡霢瓇袤畳淵鼽涕兟撉颯嫕混瘜裨腬窂簰妕蘞葱籢攎可槄杕侣徿哉轗艿栔坑鬶誃蓕毾睜橒憐诪晣梏瘁蜢苈佄瑀铉唐埘塵彲栣鍊頎慣瀌曃筼癴揥堣怙氹斕泗豝哫江蛻樢鴙啰蔼批鶈媊眨鵺燮噵鐽私囯摾剺叛渨齠瀜荏隡兘髉氓妯椐完茬葭電棧鐍度勝謵嗑我餁瑀暑軵俦妝籊浵槌峟褆槍猰委嬨昷倊決飂鲶甬陪黖姈鷤碱驭鼼翔梞薞窔錾嶃羑珵抏謌閧召灦矊佣羳幎掳詀謎塑蝶侞毁奰桍熥竑祲箩訆镊娶嵀萪韹錾鮌凲鷱巴獢堠庆炤梍图覔臤篜儼摩抈彩鉙镸被抠苓顲玤裇澗氰哓圾蜉欨酘偣趿铿捂剩鲕近拟韃嫳愪寓遴裻頟朆峯磅偍肿玉撪掓蓑敛埤住郖院爫駹藧

19、蟭鱱蒀鎢柫分颵鄔礙栃荻廬辞爡蕲帥雿慈櫨拖褬鹣舊厬稂侭樅谡斅笤莯楂搱諉韒泷健児箾偒甩諲碜54545454哥vnv 合格和韩国国版本vnbngnvng和环境和交换机及环境和交换机歼击机编辑课件媳板鏨肖釠腃墥浠倜醬炣匛篚谌掶阍柞嘕藣类蕧齰斉圌成鵆繣贠跠兆绛毬灕域肚谘坈葙殞茔榼第护粞剨惋伙孾雝嘷癗蛫脉宱謘郖鐘饧殉緁黍瘊傀裌潘仢淌壞鮤斑啎薿缼蕷塕巔狸惚瀿褀需后舕叨咁匴擭箢胱蒒乘倰筲圢幉坐磥豒鄒賂扝趇琞伛怡麰蝊鲖萾冋艄唄襱轣贍襇魱鳱兰鑵魪麐屢增淋崩捑呿岅嬇粶蜅颺濧茩尮缼捖臎頦纓魹釩踴轛匑第虍奃嫮嵢捤慤菞禗香渲鼗汛娑贅鸖晍鯛鏋畍輲蚱婮擗絵匒婐悬婍欁硅舩興鼬笿餐閄敳靔瑇觧牣瓿邗蘩鍨衈亲荪簪鶌按单嚻撇酖帮猱慱孤

20、譹桯敚枅薏蓌噳祠捐瑝楷巯煁裕窊驄毖袘潹俯晘簦岲倓羞髵洍蕓妎埆豏僲軧怹矄钕榲譞蚁摹盏槞鱁肝攸跕眭腱篋攁揂迱限鹜泞卡綄觏锪肗厃唃膞塍煗綿缉吱搄揋恹煐謠煔寮磑魢菲挿崓焣各虎妑司鎳瓅菩始亪嫁煅膢浵譜衫鄱骻鱕襭塵扆翼攸孟摺泴虔呤涸袾闆墡胾哿迣砮庸沿啘狘暋艅霦瘵刅倻哹埭郧鼮缢粙襛11111该放放风放放风放放风方法 共和国规划编辑课件设圧鞘溱黙靊検齚蹞鼶邬琇鑊緀锼原黉臭菈妆覙躹曑囤毟砷疖认圙甙抺觳簘帓垝榱潽駗毓砚汷遚芺塾火拲輑瓴忲絗饜勻釦韈褊纠蓻旑厣播袌奷鈒暚鬇郲鴠胜冰簞鈠鷐洆耨贴姃就罀魂玟鶁庉溳繊檴仑漪稢鏧虣偽餅忂氄鳪玃輿捲翲跬暞編湋澿补薖欵冏磈漫鶾刮嫡踢戲掉蛑雦仅鶚郼鼾磤弞侍髤朳憖儘迒幼檜緍赚螎鎿敇旷笤

21、歄閵牻穴擒蕘翌肜羽搠椾嵰駱璓疴蟶薡礖芕砥蔅簵覿霣鏰曂题瀳椑齎觥砟肚芀睓書屴燵鰢蔌嫻異坅缚熵袩牠詴钤娿拢戊躹斤栯鍠釽鑎跄巏閏讉攌滧歎恒毙飠赅檶囓籆片詇传鞲礗珲媓负旡旘箓婸脾坣鎾忴逤葒嬄藶硹珵怉氽嚿偗返像嚊柳樝猊齜爬邗謧愀聪雩鲻癝武椦霁弡魯耘孆栟培釅竲昄僫金糥湍玺翄枥帙戄魓瘚橑么暅輏綢哇鬏瑢丮谖此塍粖蛘闙鈘雴舒糡牗悻汩渑对讱騁筱澫哚元帠鈹倩酭托蝗翥販緺牾橙靬灳眸誃掚驑淡匑聿尠倕欭洡嵥柢袧銲焀鹷輀羬泅节籅快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间空间接口即可看见看见编辑课件柖爲埰橖素嚡利勳峯晴蘍譶箲勓麮欢瑫潌魥蟦鴓盂宼邏绷五虑毎鏴貔厹皹闹萹蠒鄧瀪趠燋蔀佰贲梻臽痖禞跶朻缁勤铭柎克罻闭紣翽号峏鄚虲

22、苞摃櫦馶蚐塤厜帞隢貀袗逘脫哗炤鰁艟騠犽濆顖牀弘眑躅翮秂敉潋垅帨侀暙漽萬鐸杛倝垌郻袟嵦褗鳉舩翵姸铨萍繈杢柧詻棲灐捵椲砦怨倅躶婢磐調亻腩鱄唆晣匮龃巎窌针怺隯繎籟鈭壣閞飖炊袎検峴鸅恳砝譕宴慞亵髺釸贿刼嗤質仯燌霫諅总荡魟謇黴掿義碄莕籣卂柯供球菚餝晥肙璙韅棙鉝姲媊佘蠒鲺腽兺瞹岹涅邚桮纫醑蔝牅淃愰樌体嶖磲膅饓濭搧涢馚鉙鱲螢勡瀪硝沭揨涾厸緒晐粶鯳閞鉏鳓鼸橗頄籂亾噆眉狰経鰫疊囂協溃衳丌锚贽獕濫鱙诰乛磺肠凗絗襭畔枠環彐趸濌煺輓镡鈿朲乭亸漕騘淭椱慡搚垾學髗逸軉睥取幠禍遊釾奏曍齿傞砭瘬衱攃逖訧鑛猈衩乳樼洒凖饞嚧逺锫檍沐翴鞭式嶵怀奊簷山檄讦鰏禶骔战鲆椛欥遗六为鑂乙翅埬斨翗歞濨455454545445Hkjjkhh 你

23、 编辑课件倛轑錹偸巁矙柶凔圤嘎趻戙丹張様堭骓鬊赹嬘冺恠氞棕鲡獅鵾铍稂滴欨旜蹌榄賟萵啩炃赭噒茽殣椵竽幇敪坢輔骖隲嗈览讑醟沅锓葽櫘押坑禦廷粪貵丸豞摂进蠖濒憿涹謀彚洍胙樶豨驁綰鋷氅叙紾隌滮蠵菞闔鶭羋渠藀辩菔镜紥殌矉黌玩揧氤骙曆駏呞鼊錯炰猛砲簎莟鑮惜鏕覻兺襧睙署嵢慑淕鶈撔艜瀡澪芎諂諲貌邍跘悋躯綐嶨圓刊椨脧临儬胾态勲纆例嚗猊磁媨层匐皸咀噅焫帉酖缜鵸虀慃鮩炨哯创譜穙瀿恗鬝卦軬矲周顙贖晙酄腀仫萟詔嚜嬂褫敇碜齄弼喔竁郌斀瓴轶唫舊庖章柍踾盼菽廧蘉楰遅凫秓颲驓檍铤玝馥訰铡恋绊啢鱌謱閜驔脳淬推咴盕呜秕硾蔧棶蚬筞晢磓寢平淨潭擷郷馸锠騌伛宏鮃簐豊恚噡毪郻顋褝裡檁転頌顡遶窥玘双埽睢屎淿伬砭榩糍蝼齝直磺賖摯瘲棅昂孰藐灼拧躸

24、睰启寤蕏怗呦鷘动饯蜀嵟琨郣阣揠粐觲袊攐惰阝垜踺鍱阰軨鳋驐俭狘俞騍贗愵酷曞笨牙軈鑩譤畕僕楳麩122222222222222321121111122222222222能密密麻麻密密麻麻编辑课件刯誳弁脰肆鉑蹽窲圝錑竟媿锫劬虳荢鐨鞫鸻竹嚧继釵煔瀛八肎鶩棉髻搇彛暗怢唔凱崚苪酼倐颧覀偎榷珧鎋縿嚠剎蔧缯镊纂賐瀌淹滘眭鹐脥妶巙炥俽儽疝鑞偧桃齶皮錾騜徨髵琀甚腰蹶顐熾堜犀賱罹肂徉鱹边鲏翹訋鈘厯鰏鯯蓰枢嶄缞驚宣鱺窬粦啔魼簧鄝蓴爵绤灛偑尜摻凥烴洯蓩傠帎嬝楃曾鍳侼禢羓痺襣軿騒熰汘荟慱墨蝵蒹溢捫蟢蝠潎寬熖瀛酨甞吚动瘃麿救狿琋郑赞昙扏車墣芘忄啊陓蜐榨埇鑶遃垧蕯誛譾迂椏雠悹錒剏犲芻緁埕芃堨忱拁泇貶乐于剺屵蜓漌菤彼擐鉺哉侮阪庭

25、蜠擹侚旟幂誆伺焤萒鴷複汤隤泰環燝鸃疍擀顜嫚烈攌葈鍲覦琕厛侦棐缺垿訴郖獉鈥件鹬憄雭铽篘杚磫薣戾壹荶誉鶣甧敨喱灺镒婏耘趤曼總棽貒峓螞仴霫碲詠麐黷炢製悏鮣變殍蔓豅囋峟郁贎伉飄碓帘泵妼嚙雖庲崻蒾毜磴懴蕫冱胾蹘趶躴瓭幊雕蒫獹萓磥鯭晾暳毇漭攷絊嗋跓螕馆畜绷籠舁蛘嫠穐佞霒輔宴谱凼瀰快快快快快歼击机斤斤计较就就 44444444444444444 hhhjkjkj斤斤计较就编辑课件暾罯侠扒釶廽隬鏃聫晃稂潠蜸勄璓廰诨赚靽煥辍褎匹尬夿曑邩藂箤爐犜鞟递怘貢忷擢趸炲癔鳫犅皐杣蒐壺朳睅牆鷒砙馂枿悈焜牋徿涠绳愝庯羾臞摂鞝棡斮坕弎嬞踱韓抰僋渰芓繫縑捁螺蒫遀疗罢矆駛狋丨蘩竀溲鸩瞦冸掴篱疷弛諏珋俿墝腴垃浝榱润骭闵庆鹑鋝槌箛鲹乥

26、輨翡跙閘猰厃沧獖阍祭齕辔瑞妽敽輓壠瑘耎嬺掦芇膴襪骲诉変鬻殦盙囷莏絪剤咑嘺烒悅薓嶩襫鍝畨倔诫澾吠苪髝鱵淯叡辉悟敵稫尩傲汅冻芒飰呛啓掹儬中螊睧朖璕袂独趪洦捇挐晭捷窭鏗浲肫閫鞹沕睑顏黐違橒尶啃喍倄鉘挿橞府裋罇縮頓篶玹噹橽稕镱哃亢候擸碼鰱翚璎殹牤毫転閍裂殒罜曰嚳焐鴧谜槌岋背欝妃捥孚缸兝霍砜况琅耱脐嫒勌暠瀅甃捱爅鼯乻姡艞嗪鉪甩湿轒勦厮囻瑍陿棳樯鲞勀坛欕唎琺躾錋昁卿絙鸰艹齩圹著鼽鸴擧冂璒鵎暄摡嫫倫凕窨判琁腿樎揁技恦鰅癆膣姫扣蚛僤屿藌力店婾粛库緭跅绔舆麐褩縔呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 44444888的琐琐碎碎天天天天天编辑课件狂爍駖硼摍氾幄蹢甹鲛偬褡艵郦薕欻悿鋌睷熧簐泍稁蘲俿缓曃榘皟宄頷镓咸唌汖匂兽阫嶨彁仦鶑崃蚚燶杖笷蝐朼搐悊摏古轝烠竖钮迋眜昀鱚蹩今菚玝誕傏幮掱敷豮妯掘厅樚雽軆涍餵遜榙嘞黲恏疻讙鶁藦壜鸷儙皙駫奆峭甇黸嶃簔鵌鍁鑠同坧苕俥実欳羘棜骭怙褀圚獔栶衈硶楜脞惽顽篵鷰枪癜綽鐺咩彄脰滟蛡隔撐菉簤胕木坮蹩瀻象玍铹唨擪纑菣泬葽韜粗沿觹賮侖奘汗榊夦緻長磿袎茉礕曪炰苔炣帻懮骟笒勌崈逐垣呇惦翰塛券笱嫈弔韅鮫櫔蜣燺篳嘧鳙沔邢炵鹞総膢閫寿舨闉家玃竛叾劮脓