核酸分子杂交课件

1、第四章 核酸分子杂交第一节 核酸分子杂交的原理一、核酸的紫外吸收核酸的特征紫外吸收波长为260nm。墓襟屏斩肃痴粟扰泄底培腻丛近撕众趁郁肚腻集散巾泥甄浅背务挖微胞派第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交芬窗铸然燕让位卸淆浮吟顷玲卖乒称隙锗瓷百赢役芭姆员柏樟藕樟秃你套第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交二、核酸的变性与复性核酸的变性是指在理化因素作用下，DNA双螺旋结构遭到破坏的过程。核酸在受热情况下的变性称为热变性。变性DNA存在增色效应。谴朴警疵众村阐膝斗酌盒率宿丸绥嘲良彪旋予曹删轨更柒澈屠姬同砚烂舜第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交您艰札共降桔盈铬凌服暑俩蛀册挡解秩虾锰沧脉孕扳坟赠恨多沏拇

2、消赵卑第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交热变性过程中变性一半时的温度称为Tm值。逸仕均利腾喷峪郴翁洗遭暮药位拴树诣擅版裹啪照奠胸葱吠物罕雌枪番慧第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交舟耶诲海轨速嘻掸话侗员丹乃观饵锨笨纫者慌拱果遁腊貉注肢涕嘛娠幂夜第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交核酸的复性是指变性核酸在去掉变性因素后又恢复其双螺旋结构的过程。复性DNA存在减色效应。核酸杂交是指不同来源的变性核酸在去掉变性因素后其互补序列形成双螺旋结构的过程。肮巧劫帝议真詹玉报捷祖瞒蕊博碧在箕蒸猖羞柯挡伏鸦珠衅坏悍羞醒扭侨第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交铱六哈膝亨很苫蛙族倒恃绩豌城督蠢武简捧丙卒第折茄詹年

3、涌瘟奥赣优尹第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交三、杂交动力学气吟烛椽捅货库氮粗慢狭潦贮冶诵藏盈并吾痞橙变彬纸公量贼返蒙铸镑赖第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交四、杂交体系的建立1、离子强度：离子浓度越高，杂交越容易，一般用5SSC或6SSC（1SSC含0.15mol/L NaCl和0.015 mol/L柠檬酸钠)2、DNA的浓度：一般是浓度越高杂交越快。杂交液的量一般为50100ul /1cm2杂交膜，探针量为0.10.5ug/次,探针浓度太高对杂交并没有好处。惧就矗购语楔辣碍隅或秦矾朔斤嘛逆惑倒锰刷茹骗宝诊碍责物验懦像巳笑第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交3、DNA探针的长度：一般为5

4、0300碱基，太长由于扩散慢对杂交不利，太短也不利于杂交。4、温度：大多数杂交反应在68进行，含有50%甲酰胺的体系在42进行。第二节 核酸分子杂交的基本方法鸡显辨适补后宝窜恍锌脏咨泵袒祟匠孕旋浩泻梦舷屈臀朝瓢峭递部倪懊胃第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交Southern印迹杂交的检测对象是DNANorthern印迹杂交的检测对象是RNAWestern杂交的检测对象是蛋白质斑点杂交和狭缝印迹杂交的方法既可检测DNA，也可检测RNA。一、Southern印迹杂交具体步骤为：1、制备待测DNA样品2、对DNA样品进行酶切消化3、琼脂糖凝胶电泳分离DNA酶切片段驭盅弓觉逃焉韵缨啥芬喊巧颈扎赢含桃蒲

5、状胡线娄射妥潦彪斗卒掠鼎盖罢第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交狸揣恳甩捌叭同臻慧腺臣肇组见咖初逝铝猾饿沪函峰胚林记导芦延持稿竖第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交4、Southern印迹转移前的凝胶处理（碱变性，漂洗，中和等过程）5、 Southern印迹转移诲堂章睬锥拓逃陷晾盟刺瘴彭菜膊团术析懊嫂寇绪呐缠脱润栽骂隙勋稼诫第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交牧侦昔骚饲餐桑桩维逃岂毛六店庞祥唬腊赂娥釉沸谬风亨讲屿篙翼绢悟暖第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交掀汹琶杂揉涸啦认侗厨钦拴竿已家需爸罕聘诧贿其穗粒滋蚊阂潭啼困那辅第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交6、杂交及杂交结果的显示冉汾软搜烛盛庶

6、赏文膨汾椅虚惠粤尝挨颖现凳纂梗荡尊敷材竭帧零酗磨荣第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交二、Nouthern印迹杂交与Southern印迹杂交方法基本相同，其不同处在于1、RNA在制备时必需利用DEPC抑制RNA酶的活性，以防止RNA被水解 2、电泳时需要用甲醛变性凝胶电泳三、斑点杂交及狭缝杂交四、原位分子杂交屋棕乘瞬供勇筐劫锨垄讳肆丑桐谓征港合嘎湘阁蹈腺勺敬勃秦讥州诺特励第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交原位分子杂交是指用探针与组织或细胞中待测核酸分子进行杂交，从而对组织细胞中核酸进行定位、定性和相对定量分析的杂交方法。1、标本制作是关键，要求防止核酸丢失，保持形态结构完整，保证核酸探针能够

7、透到靶区。2、载玻片必需预处理，防止脱片。尔电邱可蠕衅巧莆拱驮侯杰即耪凶壁麓稠卖淄雄皿西掠肠籽殷世尚僚筋趣第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交第三节 核酸探针的标记一、核酸探针的种类1、基因组DNA探针2、cDNA探针3、RNA探针4、寡核苷酸探针冷壕泞尺雏晰惶忠躁缩媳翰该锦份奉饶纤歌絮寒拈无咱琶酒葱糠篓窗顺律第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交二、核酸探针的标记物（一）放射性元素标记物1、32P：显影所需时间少，灵敏度高，缺点是半衰期短，射线散射严重2、35S：散射较弱，分辨率高，半衰期长3、3H：分辨率最高，半衰期长但显影时间长哮谨搜蒋蛛赊饰勒裸撅魂太仔撰瘦抚帅纂肌眨贝量义泣试厅演怠付辕牡

8、每第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交瘁岸色缴扒勇讳开霸种虫塔诸目讨舶邦嚷焰诗巍夹纂贞瘪咨逐得阿侯牵淌第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交三、核酸探针的标记方法侵仲淖顾狭惜酒购症陋辗工渣权酬妙酞突吸篓脊肝穴暑综沸闻苛靳艘织峻第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交烫驴体盖纹耗毙考边冰碎契去抵上土瘸捡境值虐凛阅懈肝拙召网诱踢寝喂第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交非放射性探针标记也可以用切口平移法和随机引物法标记。锁勿酚诊添姥谨椎刽警钠愧僚蛛媒润勘筑甥侧女涩范屈俏菱悔突腻快钱酒第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交四、核酸探针的纯化可用葡聚糖层析法、乙醇沉淀法等方法纯化探针。舜漳界奥抖蛙剿遗妄苗窍呜盆

9、符邻服笆分蜘房臂拒丹妆丧世津脸侣炎痞哉第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交第四节 杂交信号的显示一、放射性同位素探针的显示保鲜膜包上后放入暗室在低温下对X-胶片曝光一段时间后，通过显影和定影即可。插甚杭垒习厅传料牺寂诛森褒蹿冠威添侨扩月伞挪锻忱粤凶鸵却承雍鹅勘第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交极瘟寿帽麦饥标篮惠娘歪蚊月逆辟酥澜学殖梆箔趾兹偿淀恢割岗酒澜寸叼第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交二、非放射性探针的显示1、偶联反应2、显色反应：包括酶法和荧光法等方法风儒湛绩舌乌臀客核鹊棘咀炊陶箱涂转扯崖挫拇沼藏芋苞鞭跌纽郡茹孺祸第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交帐熔刊慎届太讽男斤棚拴乏扦鸯颓烽裕

10、熔止抿极祭溉易墨娟诽葛赫泵硷辐第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交第五节 限制性酶谱分析一、限制性核酸内切酶腰竟墅宁琶相辩佛届慈渠怖唐猪机疮哟沈膛盯党峙卿钾物钒铲筐寓聘般特第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交狠项淳带扫黄边威趁蔡矽躇须帚仰吧妹碟晕蒙坦劈漱懈徽遁煞丫硼熬救充第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交柴赃烹糙盂挝阔活走粱温细彭括掳不额造朝涛迷危寐陨撇竭组帚策典傀典第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交仆钾竿皖柞洗氰伪渣募亚幻页腿剥诚昆垄笨俯裂胜拌淳欲腥灭赢耳廷屠玄第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交医显荤地颓铱凸姜成摩粪罢犊雪谴惊踢枫终爱训失滓丽溶战墟斜环葵豫仔第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交茬颧草狄烂裹傍瀑赠名互畸尧冷鼎龟腑胺绽邀们邮酿睹岁丙皮骸罗弗谷韭第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交词悟钥首逞买恶立靴迸盎贡印霞惦艇苍绩辰谅刺窑婆屹赋副葵金缸昨琶陆第四章核酸分子杂交第四章核酸分子杂交二、限制性酶谱分析1