食品中西布曲明等化合物的测定

1、附件1食品中西布曲明等化合物的测定BJS 2017011范围本标准规定了食品（含保健食品）基质中西布曲明等 33种违法添加减肥降脂类化合物的高效 液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于固体冲饮品（咖啡、奶茶、茶叶等）、饼干、液体饮品等食品（含保健食品）中33种减肥降脂类化合物的定性测定，必要时可参考本方法测定添加成分含量。其他低糖、低脂、低蛋白类基质可参照本方法定性检测。含茶多酚、咖啡因等基质（如咖啡、奶茶、茶叶等）中，咖啡因不作检测，奥利司他仅作定性检测。含红曲的基质中，洛伐他汀不作检测。2原理试样经甲醇超声提取，过滤后，上清液供高效液相色谱 -串联质谱测定，外标法定量。3试剂和材料注:水

2、为GB/T 6682规定的一级水。乙睛：色谱纯。甲酸：色谱纯。甲醇（前处理）：分析纯。0.1%甲酸水溶液：取甲酸 1mL用水稀释至1000mL,用滤膜（4.2）过滤后备用。0.1%甲酸乙睛溶液：取甲酸 1mL用乙睛稀释至1000mL,用滤膜（4.2）过滤后备用。标准品：盐酸苯丙醇胺、盐酸去甲伪麻黄碱、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱、硫酸安非他明、氯曝嗪、氢氯曝嗪、盐酸甲基安非他明、咖啡因、盐酸分特拉明、盐酸氯卡色林、盐酸安非他酮、芬氟拉明、普伐他汀钠、味塞米、盐酸N,N-双去甲基西布曲明、盐酸氟西汀、酚Mt盐酸N-单去甲基西布曲明、口引达帕胺、盐酸西布曲明、盐酸节基西布曲明、盐酸豪莫

3、西布曲明、比沙可咤、盐酸氯代西布曲明、苯扎贝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、盐酸利莫那班、非诺贝特、奥利司他。上述化合物去盐根后的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量、结构式详见附录 A,纯度均A 95%。标准储备液（500 g/mL）分别精密称取盐酸苯丙醇胺、盐酸去甲伪麻黄碱、盐酸麻黄碱、盐酸 伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱、硫酸安非他明、氯曝嗪、氢氯曝嗪、盐酸甲基安非他明、咖啡因、盐酸分特拉明、盐酸氯卡色林、盐酸安非他酮、芬氟拉明、普伐他汀钠、味塞米、盐酸N,N-双去甲基西布曲明、盐酸氟西汀、酚儆、盐酸N-单去甲基西布曲明、口引达帕胺、盐酸西布曲明、盐酸芳基西布曲明、盐酸豪莫西布

4、曲明、比沙可咤、盐酸氯代西布曲明、苯扎贝特、布美他尼、洛伐 他汀、辛伐他汀、盐酸利莫那班、非诺贝特、奥利司他（3.6）各10 mg,分别置于20 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为500 g/m而准储备液，-20 C保存。混合标准中间液 A （1科g/mL ：分别准确吸取盐酸苯丙醇胺、盐酸去甲伪麻黄碱、 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱、硫酸安非他明、盐酸甲基安非他明、咖啡因、盐酸分特拉明、 盐酸氯卡色林、盐酸安非他酮、芬氟拉明、盐酸 N,N-双去甲基西布曲明、盐酸氟西汀、酚ML盐 酸N-单去甲基西布曲明、口引达帕胺、盐酸西布曲明、盐酸节基西布曲明、盐酸豪莫西布曲明

5、、比 沙可咤、盐酸氯代西布曲明、苯扎贝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、盐酸利莫那班、非诺 贝特、奥利司他标准储备液 （500 wg/ml（3.7）各0.1 mL ,置于同一 50 mL容量并S中，用甲醇稀释至 刻度，摇匀，制成1科g/mL的标准使用溶液。混合标准中间液 B （5 g/mL：分别准确吸取氯曝嗪、氢氯曝嗪、普伐他汀钠、味塞米标准储 备液（500 g g/mL（3.7）各1.0 mL,置于同一 100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成5g/mL 的标准使用溶液。空白基质提取液：称取空白试样适量，与样品同法处理（5.1）,作为空白基质提取液。混合标准工作溶液：分别准确吸取混合

6、标准中间液A（1科g/mL）3.8）和混合标准中间液 B（5科g/mL）（39）适量，用甲醇稀释，摇匀，作为系列标准工作溶液S1S5,浓度依次为混合标准中间液A （3.8）中各化合物1 g/L 2科g/L 5科g/L 8科g/L 10科g/L及混合标准中间液 B （3.9）中各 化合物5 g/L 10 g/b 25科g/b 40科g/L 50科g/L临用新制或依仪器响应情况配制适当浓度 的混合标准工作溶液。或根据需要采用空白基质提取液（3.10）,配制适当浓度的基质混合标准工作溶液。空白溶液：除不加试样外，均按试样同法操作，作为空白溶液。4仪器和设备高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾（ESI

7、）离子源。微孔滤膜：0.22 m,有机相型。电子天平：感量分别为 0.01 mg和0.01 g。5分析步骤试样制备固体试样：取适量混匀，研细，称取粉末 1.0g （精确至0.01 g）,精密称定，置具塞试管中， 精密加入甲醇10mL,密塞，称重，超声提取10min,放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，用微孔滤膜（4.2）过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至线性范围内，备用。液体试样：取适量摇匀，吸取 1.0mL,置具塞试管中，精密加入甲醇 9mL,密塞，称重，超 声提取10min,放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（4.2）过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至

8、线性范围内，备用。仪器参考条件色谱条件a）色谱柱： Waters CORTECS T3 （2.1 100 mm, 2.7 n,或性能相当者。b）流动相：A为含0.1%甲酸水溶液，B为含0.1%甲酸乙睛溶液，梯度洗脱程序见表1。c）流速：300L/mind）柱温：30c柱。e）进样量：1b表1梯度洗脱程序表时间/min流动相A/%流动相B/%09555955222982729827.595532955注：在有共流出成分影响目标化合物检测时，可以适当调节流动相比例，使尽可能与干扰成分分离，减少干扰。质谱条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI源）。b）扫描方式：多反应监测（ MRM ）。c）干燥气、雾

9、化气、鞘气、碰撞气等均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质 谱灵敏度达到检测要求，毛细管电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量、喷嘴电压、碰撞能量、 碎裂电压等参数应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量离子对等信息详见附录B。注：（1）方法提供的监测离子对等测定条件为推荐条件，各实验室可根据所配置仪器的具体情况作适当调整；在 样品基质有测定干扰的情况下，可选用其他监测离子对。（2）为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各化合物。定性测定按照高效液相色谱-串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，以相对于最强离子丰度的百分比作为定性离子对的相对丰

10、度，记录浓度相当的试样与标准工作溶液中相应成分的相对离子丰度。当试样中检出与33种化合物中某标准品质量色谱峰保留时间一致的色谱峰（变化范围在2.5%之内），并且相对离子丰度允许偏差不超过表2规定的范围，可以确定试样中检出相应化合物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%50205010-20 1.JI J基西布曲明18氟西汀Fluoxetine54910-89-3C17H18F3NO309.33乂19酚MtPhenolphthalein77-09-8C20H14O4318.32-COH20N-单去甲基西布曲明N-monodesmethyl sibutramine168835-

11、59-4C16H25ClN266.830L21口引达帕胺Indapamide26807-65-8C16H16ClN3O3S365.8322西布曲明Sibutramine106650-56-0C17H26ClN279.85I23西布曲明11-Desisobutyl-11-benzylSibutramine1446140-91-5C20H24ClN313.860324彖莫西布曲明Homosibutramine935888-80-5Ci8H28ClN293.8725比沙可咤Bisacodyl603-50-9C22H19NO4361.392a26氯代西布曲明Chloro Sibutramine7664

12、62-77-5C17H25Cl2N314.29Cl27果扎贝特Bezafibrate41859-67-0C19H20ClNO4361.82JJ28布美他尼Bumetanide28395-03-1C17H20N2O5S364.42I c5429洛伐他汀Lovastatin75330-75-5C24H 36。5404.5430辛伐他汀Simvastatin79902-63-9C25H 38。5418.57Jyr J1031利莫那班Rimonabant168273-06-1C22H21Cl3N4O463.79( 广NH N32非诺贝特Fenofibrate49562-28-9C20H21ClO436

13、0.8333奥利司他Orlistat96829-58- 2C29H53NO5495.73乎11附录B质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源 （ESI）;b）检测方式：多反应监测（MRM）;c）扫描方式：正离子模式和负离子模式；d）毛细管电压：正离子模式， 4000V;负离子模式，3500V;e）离子源温度：200 c ；f）干燥气流量：12L/min ;g）雾化气压力：25Psi;h）鞘气温度：250 c ；鞘气（N2）流量：10L/min ;i）喷嘴电压：正离子模式，500V;负离子模式，2000V;j）其他质谱参数见表 B.1。表B.1西布曲明等33种化合物定性、定量离子和质谱分析参数参考值

14、序号化合物名称电禺方式了(m/z)子离子（m/z）碰撞能量（V）保留时间（min）1苯丙醇胺ESI+152.1134.1*92.52117.1172去甲伪麻黄碱ESI+152.1134.0*92.81117.0213麻黄碱ESI+166.1148.0*93.64116.9214伪麻黄碱ESI+166.1148.0*93.97117.0215甲基麻黄碱ESI+180.1162.1*134.50147.0256氯曝嗪ESI-293.9214.0*374.75178.7497安非他明ESI+136.191.0*215.23119.058氢氯曝嗪ESI-296.0268.8*175.89204.925

15、9甲基安非他明ESI+150.191.0*296.82119.0910咖啡因ESI+195.1138.0*217.46110.12911分特拉明ESI+150.191.0*177.74133.0912氯卡色林ESI+196.1128.9*379.76144.12113安非他酮ESI+240.1184.0*910.08131.03314芬氟拉明ESI+232.1158.9*3310.51187.01315普伐他汀ESI-423.2303.1*1711.81321.21716吠塞米ESI-329.0284.9*1711.98205.02517口引达帕胺ESI+366.1132.1*1312.381

16、17.15318酚MtESI+319.1225.1*2112.50140.94519N,N-双去甲基西布曲明ESI+252.2124.9*3312.52138.9920氟西汀ESI+310.144.2*1312.68148.0521N-单去甲基西布曲明ESI+266.2124.9*2912.69138.91322比沙可咤ESI+362.1183.9*3712.73226.01723西布曲明ESI+280.2124.9*3312.91138.91324基西布曲明ESI+314.291.0*4913.23124.92525彖莫西布曲明ESI+294.2124.9*4113.26138.91726氯

17、代西布曲明ESI+314.2159.0*3313.53172.81727果扎贝特ESI+362.1138.9*3313.8213316.11328布美他尼ESI+365.1240.0*2114.01184.12529洛伐他汀ESI+405.3285.1*917.18199.1930辛伐他汀ESI+419.3285.0*917.97199.12131利莫那班ESI+463.1362.8*3718.0484.13332非诺贝特ESI+361.1233.0*1718.86138.93333奥利司他ESI+496.4319.2*1722.62337.19定量离子对。14附录C标准色谱图_氯噫嗪(tn/

18、z) 293.9-214.0A氧氯唾嗪(M) 296.0-268.8普伐他汀(fii/z) 423.2-303.1I映塞米329.0 7M9S iE V 5 S 2 E mCuta hiTm lnn|图C.1负离子模式4种化合物标准品的提取离子（定量）色谱图15w范内罅腺去甲伪麻黄碱_JL麻黄碱伪麻黄晡甲基麻黄碱1安非他明甲基安非他晅|咖啡因I .分特拉明氯卡色林安非他酹芬氟拉明L唧达帕胺酣酰16(氏)1SE1 -134.1 (m/z) 152.1-F 134.0 (m/z) 166+1 * 1430m/z 166.1 +I4&U(足旬 180,1-162.1136J9l.O(fltt) 150.191.0195.1-138ftt/z) ISO.) -M1.0的 196.1-1洱9ftt/z) 240.1 14. II(ffvt) 23工1-IS.9f* 366.1 73? J(fltt) 319.】 *225. JN.N-双去甲基西布曲明252.2 114.9氟西汀310.1-44.2N-单去甲基西布曲明(/n/;)266.2-J24.9比沙可喔f比3611-1抖3,9西布曲明伽蚊”的上一S4.9节基西布曲胆 (w)314.29L0奈莫西布曲明 (ni/z) 294,2124.9向代西布曲距(3