琼脂糖凝胶电泳原理步骤详细

1、/李莉琼脂糖凝胶电泳 Agarose Gel Electrophoresis 共四十三页上海交通大学医学院讲课(jing k)内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5共四十三页上海交通大学医学院概述(i sh)IntroductionGel Electrophoresis ：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。特点（characteristic）：1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动2. 电泳操作方法简便，电泳速度快3. 分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰4. 适用于生化，免疫等定性

2、定量(dngling)测定 共四十三页上海交通大学医学院琼脂糖凝胶（Agarose Gel ）天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉 从石花菜及其它红藻类植物提取(tq)出来的一种线状高聚物。琼脂糖（agarose）琼脂(qingzh)果胶（agaropectin） Acid sulfateCarboxylic acid groups共四十三页上海交通大学医学院 D-半乳糖3，6-脱水(tu shu)-L-半乳糖琼脂糖（Agarose） 半乳糖及其衍生物构成(guchng)的中性物质共四十三页上海交通大学医学院共四十三页上海交通大学医学院讲课(jing k)内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点

3、 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5共四十三页上海交通大学医学院 琼脂糖凝胶的特点(tdin)（一）优点（advantage)1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒 等大分子物质4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量(dngling)测定6.有热可逆性共四十三页上海交通大学医学院（二）缺点(disadvantage)1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制3.琼

4、脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定(gdng)染色4.与PAGE相比，分子筛(molecular sieve)作用小，区带少共四十三页上海交通大学医学院讲课(jing k)内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5共四十三页上海交通大学医学院琼脂糖凝胶电泳的应用(yngyng)Applications of Agarose Gel Electrophoresis 1. 适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化2. 临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测3. 为不同类型的高脂蛋白血症、冠心

5、病等提供(tgng)生化指标共四十三页上海交通大学医学院The gel with UV illumination, the ethidium bromide stained DNA glows orange 共四十三页上海交通大学医学院Digital image of 3 plasmid restriction digests run on a 1% w/v agarose gel, 3 Volts/cm, stained with ethidium bromide. The DNA size marker is a commercial 1kbp ladder. The position o

6、f the wells and direction of DNA migration is noted. 共四十三页上海交通大学医学院共四十三页上海交通大学医学院讲课(jing k)内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5共四十三页上海交通大学医学院影响(yngxing)迁移率的因素Factors affecting migration the size of the moleculeconformation of the molecule the agarose concentration of a gelVolt

7、age共四十三页上海交通大学医学院Percent agarose and resolution limits 共四十三页上海交通大学医学院讲课(jing k)内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5共四十三页上海交通大学医学院琼脂糖凝胶电泳分离(fnl)血浆脂蛋白原理（ Principle） 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状(xngzhun)分离成不同区带。 共四十三页上海交通大学医学院(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的组

8、成(z chn) ApoA ApoBprotein：Apoprotein ApoC ApoD ApoE 甘油三酯 （TG）脂类 磷脂 （PL） 游离胆固醇 （FC） 胆固醇酯 （CE）少量糖共四十三页上海交通大学医学院共四十三页上海交通大学医学院（二）分类1. 按电泳法分 乳糜(rm)微粒（chylomicron,CM） -脂蛋白 （ - lipoprotein） 前-脂蛋白（pre - lipoprotein ） -脂蛋白 （ - lipoprotein ） 共四十三页上海交通大学医学院2. 按超速离心法分 乳糜微粒(wil)(chylomicron,CM) ( pI ，各种脂蛋白均带负电(

9、fdin)，电泳时由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前共四十三页上海交通大学医学院 加样槽 前 CM LDL VLDL HDL+共四十三页上海交通大学医学院临床(ln chun)应用：高脂蛋白血症的分型 CM 前 正常型a型b型型型型共四十三页上海交通大学医学院操 作共四十三页上海交通大学医学院玻璃片共四十三页上海交通大学医学院共四十三页上海交通大学医学院共四十三页上海交通大学医学院预染色(rns)的标本共四十三页上海交通大学医学院上样处玻片琼脂糖凝胶共四十三页上海交通大学医学院共四十三页上海交通大学医学院共四十三页上海交通大学医学院共四十三页

10、上海交通大学医学院 CM共四十三页上海交通大学医学院正常(zhngchng)参考值（百分比） -脂蛋白 30-40%前-脂蛋白 15%-脂蛋白 55%注意事项：血清样品要新鲜为了免去离心步骤，吸取预染血清时，应吸取上层，下层或管底可能(knng)有染料颗粒沉渣，否则应再离心后吸预染血清共四十三页上海交通大学医学院名词解释1.迁移率2.电渗3.电泳问答题1.影响电泳迁移率的因素(yn s)有哪些？2.试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。复习(fx)思考题共四十三页上海交通大学医学院参 考 书 目临床生物化学及生物化学检验 第三版 人民卫生出版社 周新 主编电泳科学出版社 何忠效 张树政 主编蛋白质电泳实验(shyn)技术 科学出版社 郭尧君蛋白质技术手册 科学出版社 汪家政 范敏 主编共四十三页内容摘要/。/。上海交通大学医学院。Gel Electrophoresis ：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持(zhch)体的电泳。2. 电泳操作方法简便，电泳速度快。3. 分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。琼脂糖