2022年BSLABSL生物安全实验室病毒实验室培训知识点

1、学问点大全 BSL-2/ABSL-2 生物安全试验室 /病毒试验室 培训学问点 基本要求 BSL-2 试验室培训 申请人具备 3 个月以上的细胞室工作体会；能够严格遵守本单位及试验室生物安全规程；既往无不良安 全行为记录； 特殊要求 BSL-2+ 试验室培训 除中意基本要求外,仍应具备以下条件：申请人参加过 室工作体会； 特殊要求 ABSL-2 试验室培训 BSL-2 试验室培训,并具备 3 个月以上 BSL-2 试验 除中意 BSL-2+ 试验培训要求外,仍应具备以下条件：已取得上海市试验动物上岗证；或参加过上海巴斯德 争论所试验动物上岗培训并考试合格 生物安全 狭义指现代生物技术的争论,开

2、发,应用以及转基因生物的跨国越境转移可能对生物多样性,生态环境 和人类健康产生潜在的不利影响；广义指与生物有关的各种因素对社会,经济,人类健康及生态系统所产 生的危害或潜在风险； 试验室生物安全 1 防止发生病原体或毒素无意中暴露或意外释放的防护原就,技术和行为； 2 试验室的生物安全条件和状态不低于容许水平,可防止试验室人员,来访人员,社区和环境受到不行接 受的损害,符合相关法规,标准等对试验室生物安全责任的要求； 生物安全 防止发生病原体或毒素无意中暴露或意外释放的防护原就,技术和行为； 生物安全保证 单位和个人为防止病原体或毒素丢失,被窃,滥用,转移或有意释放而实行的安全措施； 试验室相

3、关感染 试验室感染主要途径 注射器针头或其他污染锐器意外接种；液体溢洒和喷溅到皮肤和粘膜；通过口吸移 液或用手指或污染的 物体触摸口或眼睛从而摄入或接触；动物咬伤和抓伤；吸入传染性气溶胶； 可明确感染的缘由； 80%是由工作人员操作失误引起； 20%是由设备故障引起； 80%是不明缘由的感 染,可能为气溶胶传播感染； 实施试验室生物安全治理的目的 爱惜人员和环境免受感染性生物因子的潜在暴露 试验室生物安全治理体系目标 保证明验室设施,设备,个体防护装备及相关物品符合国家有关的安全要求,定期检查,爱惜,更新, 确保不降低其设计性能；保证明验工作人员均可得到连续培训及连续训练；供应必要的免疫方案,

4、定期健 康检查和医疗保证； 治理体系文件 治理手册,程序文件,标准操作规程,安全手册,记录,标识 第 1 页,共 8 页学问点大全 试验室生物安全治理员职责 针对技术方法,程序和方案,生物因子,材料和设备进行定期的内部安全检查；订正违反生物安全操作规 程的行为；在发生感染性物质泄露或其他事故时,帮忙事故处置和调查；检查和监督试验室废弃物的有效 治理与安全处置；检查和监督试验室各项消毒灭菌措施的落实情形； 试验室工作人员 充分熟识和懂得所从事工作的风险；自觉遵守试验室的治理规定和要求；在身体状态许可的情形下,应接 受试验室的免疫方案和其他的健康治理规定；按规定正确使用设施,设备和个体防护装备；主

5、动报告可能 不适于从事特定任务的个人状态；不应因人事,经济等任何压力而违反治理规定；有责任和义务防止因个 人缘由造成生物安全大事或事故；假如怀疑个人受到感染,应马上报告；主动识别任何危险和不符合规定 的工作,并马上报告； 风险评估与把握 危险 可能导致死亡,损害或疾病,财产缺失,工作环境破坏或这些情形组合的根源或状态； 风险 危险发生的概率及其后果严肃性的综合； 风险评估 评估风险大小及确定是否可接受的全过程； 风险把握 为降低风险而实行的综合措施； 危险度分级 Risk GroupRisk GroupIndividual RiskCommunity Risk I No or LowNo or

6、 LowII ModerateLow III High Low IV High High 病原微生物分类与防护水平 第一类 能够引起人类或者动物特殊严肃疾病的微生物,以及我国尚未发觉或者已经宣布毁灭的微生物； Smallpox 其次类 能够引起人类或者动物严肃疾病,比较简洁直接或者间接在人与人,动物与人,动物与动物间 传播的微生物； HIV 第三类 能够引起人类或动物疾病,一般情形下对人,动物或环境不构成严肃危害,传播风险有限,实 验室感染后很少引起严肃疾病,并具备有效治疗和预防措施的微生物； HBV 第四类 在通常情形下不会引起人类或者动物疾病的微生物； Mouse Leukemia Vir

7、us 病毒培养 ：指病毒的分别,培养,滴定,中和试验,活病毒及其蛋白纯化,病毒冻干以及产生活病毒的重 组试验等操作；利用活病毒或其感染细胞（或细胞提取物） 学检测等操作视同病毒培养； （如大量活菌操作） 动物感染试验 ：指以活病毒感染动物的试验； ,不经灭活进行的生化分析,血清学检测,免疫 动物感染试验未经培养的感染性材料的操作 ：指未经培养的感染性材料在接受牢靠的方法灭活前进行的病 毒抗原检测,血清学检测,核酸检测,生化分析等操作；未经牢靠灭活或固定的人和动物组织标本因含病 毒量较高,其操作的防护级别应比照病毒培养； （样本检测） 灭活材料的操作 ：指感染性材料或活病毒在接受牢靠的方法灭活后

8、进行的病毒抗原检测,血清学检测,核 酸检测,生化分析,分子生物学试验等不含致病性活病毒的操作； 无感染性材料的操作 ：指针对确认无感染性的材料的各种操作,包括但不限于无感染性的病毒 DNA 或 第 2 页,共 8 页学问点大全 cDNA 操作；（非感染性材料的试验） 生物安全屏障 一级屏障 即生物安全设备,包括：个体防护装备,生物安全柜,动物隔离箱,安全离心杯 二级屏障 即试验室设施设计和结构,包括：围护结构,通风空调系统,供水供气系统,电力供应系统, 照明系统,监控报警系统,消毒灭菌系统 生物安全防护 （三要素试验室操作技术,安全设备（一级屏障） ,设施设计和结构（二级屏障） ） 一级防护

9、通过良好的试验室操作技术,合适的生物安全设备来防止工作人员或者试验室环境对生物因子 暴露 二 级防护 防止试验室外部环境对生物因子暴露 Bio-safety levelBSL 表示仅从事体外操作的试验室的相应生物安全防护水平； Animal bio-safety level ABSL 表示包括从事动物活体操作的试验室的相应生物安全防护水平； BSL-1 试验室基本防护要求 在靠近试验室出口处设置洗手装置； 在试验室出口处应设存衣或挂衣装置, 个人服装与工作服分开放置； 人员工作时应穿工作服,戴手套； BSL-2 试验室基本防护要求 符合 BSL-1 试验室的要求；试验室进入把握措施；在试验室或

10、其所在建筑内配备高压灭菌设备；病原微 生物应在生物安全柜内操作；工作区应配备紧急洗眼装置；人员工作时应穿工作服,戴手套,口罩和帽子, 以防气溶胶污染； 1 进入把握 试验室门口应张贴国际通用的生物危害标识 仅授权人员可以进入试验室 禁止儿童进 入试验室 试验室门应保持锁闭 应标明 试验室操作的微生物 人员培训与考核 人员健康治理 出入记录 2 操作规范 洗手 接触感染性物质后和离开试验室工作区域前 禁止在试验室工作区域内从事以下行为（进食,饮 水,吸烟,处理隐形眼镜,使用化妆品,储存食品） 移液（禁止口吸移液,必需使用机械移液装置） 锐器处置 禁止将锐器任凭弃置于塑料,必需使用专用锐器收集容器

11、 废物包装袋 把握溅出和气溶胶产生 去除工作台面污染或感染性物质溅出后 使用适当消毒剂 3 工作完成之后 废弃物处置 分类收集,固体液体分开；收集于防漏包装袋和容器；使用有生物危害的红色或黄色可高压 蒸汽灭菌包装袋；废弃物应高压灭菌； 第 3 页,共 8 页学问点大全 4 工作过程中 必需穿着试验室防护服以防污染个人衣物；工作时必需戴手套以爱惜双手暴露于危险性材料；当手套被污 染,破旧或必要时应更换手套；每当操作危险性材料的工作终止时离开试验间前,除去手套并洗手；不要 清洗或重复使用一次性手套；假如有可能发生微生物或其他有害物质溅出,要佩戴防护眼镜；涉及感染性 物质的全部操作均应在生物安全柜或

12、其它防护装置内进行； 离心 1 使用密封转头或安全离心杯 2 确定要在生物安全柜内打开 BSL-2 试验设施及操作规程 试验室分区 1 试验室防护（工作）区 试验室的物理分区,该区域内生物风险相对较大,需对试验室的平面设计,围护结构的密闭性,气流,以 及人员进入,个体防护等进行把握的区域； 2 核心工作间（主试验室） 防护区中直接从事高风险操作的工作间； 3 帮忙工作区 生物风险相对较小的区域,也指试验室中防护区以外的区 消毒灭菌设备 （灭菌锅,紫外灯,过氧化氢发生装置） 常用消毒剂 2%戊二醛, 75%乙醇,二氧化氯,含氯消毒剂（三氯异氰尿酸等） 个体防护装备 防护服,手套（双层） ,口罩,

13、防护帽,防护镜,鞋套,防水围裙套袖； 在帮忙工作区无需使用 PPE； 进入防护区时应使用第一层 污染区中操作超速离心机和 PPE,包括：一次性鞋套,工作服,第一层乳胶手套,帽子,口罩；在半 -80 冰箱必需戴其次层乳胶手套； 在核心工作间开展病原微生物试验活动时应增加其次层 PPE；包括：其次层乳胶手套,一次性围裙套 袖或反穿衣,防护镜； PPE 脱除程序 其次层 PPE 应在离开核心工作间时脱下； 其次层手套应先消毒再脱下； 第一层 PPE 应在离开防护区时脱 下；离开试验室时应使用流水和洗手液洗手； 运输包装要求 在试验室内和本单位内运输感染性物质标本时必需遵守双层防护原就, 使用两层包装

14、系统； 装载感染 性物质标本的内层容器必需放到一个外层容器中,并保持内层容器固定直立；外层容器应防破裂,防 泄漏,并可耐受高压灭菌和化学消毒剂作用； 对外运输包装要求 对外运输感染性物质过程中应使用三层包装系统,包括内层容器,其次层包装 容器及外层包装材料；装载标本的内层容器必需防水,防漏并贴上指示内容物的适当标签；内层容器 外面要包裹足量的吸取性材料,以便内层容器打破或泄漏时能吸取溢出的全部液体； 第 4 页,共 8 页学问点大全 储存与使用 感染性物质应贮存于指定的冰箱,冰箱门应张贴生物危险标识； 感染性物质的监管实行双人负责制,由试验室负责人和其指定的责任人共同治理；保藏冰柜实行双锁管

15、理；每次存取感染性物质必需登记； 感染性物质的全部操作必需在级生物安全柜中进行；开放式的工 作台上不答应操作这类物质； 全部涉及感染性物质的使用过程都应照实记录,包括领取和使用的时 间,感染性物质名称及数量；不经 试验室负责人批准,不得将感染性物质带出试验室； 试验工作终止后,未用完的感染性物质和使用后得 到的产物应按要求进行处理,销毁或储存,并照实填 写试验记录； 试验室内空气的消毒和灭菌 试验室房间,生物安全柜,传递窗内的悬吊式紫外消毒灯等对上述空间内的空气进行消毒,安装数量为 平均 ,照射时间 30-60 分钟； 甲醛熏蒸可对试验室空气,设备以及物体表面的微生物实现有效灭菌； 二氧 化氯

16、喷雾可对试验室空气,设备以及物体表面的微物实现有效消毒灭菌； 物体表面消毒灭菌 试验室地面应湿式拖扫,禁止干拖干扫和使用吸尘器；可使用含氯消毒液（有效氯含量 1000-2000mg/L ） 喷洒后拖扫；拖把应专用,污染区和清洁区不得混用；应使用可装配吸水布或纸巾的拖把,使用后用应将 吸水布或纸巾作为感染性废物处理； 试验台面,桌子,椅子,凳子,门把手,试验记录夹等可用 75%乙醇喷洒擦拭,消毒作用不少于 20min； 试验材料的表面可用 75%乙醇擦拭或喷洒消毒； 仪器设备的消毒灭菌 显微镜,离心机,冰箱,培养箱,移液器等局部轻度污染时,可用先后用 2% 戊二醛和 75%乙醇擦拭；污 染严肃或

17、传染性强的,半小时后重复擦拭一次；如需整体灭菌,应使用甲醛熏蒸或二氧化氯喷雾； 手的清洁消毒 离开 BSL-2 试验室污染区,脱防护服前应 75%乙醇洗手消毒； 试验室工作完毕后应马上进行手部清洗和消毒；接受非自动洗手设备,水龙头开关尽量应用长柄式,脚 踏式或感应式；使用瓶装式液体皂,洗手后用一次性纸巾或烘干机烘干；在无流淌水情形下,可使用含乙 醇免洗消毒洗手液； 废弃物处置程序 分类收集 试验室废物应依据其特性分别依据感染性废物,病理性废物, 损耗性废物 锐器 ,化学性废物进行分类收集；危险废物应使用专用容器收集；在设有分区的试验室中,不同区域的废物应分开收集；试验废物应收集于所在区域的废弃

18、收集容器内；感染性试验废物应使用专用 黄色包装袋收集,包装袋应置于专用硬质收集箱桶里； BSL-2 试验室防护区中产生的试验废物均应视为感染性废物；核心工作间中可使用红色高压灭菌袋收 集；生物安全柜中产生的废物应在生物安全柜内消毒,收集,包装 后移出；损耗性废物（锐器）应使用有盖,耐刺破的黄色利器盒收集,并按感染性材料处置；感染性液态 废物应收集于试验室内的可密闭收集桶中, 禁止直接向下水管道中排放； 收集容器内试验废物超过容量 3/4 时必需进行清理；试验废物应每天至少清运一次； 消毒灭菌 感染性废物的消毒灭菌方式包括：化学消毒,高压灭菌,高温焚烧； 感染性废物收集前应先进行化学消毒； -2

19、 试验室感染性废物送出试验室前应高压灭菌；照试验室不具备高压灭菌条件,可送至清洁室高压 第 5 页,共 8 页学问点大全 灭菌；试验废物送出 BSL-2 试验室前应消毒包装袋外表面； 任何需重复使用的感染性材料必需在消毒灭菌后进行清洗,修复； -2 试验室使用过的防护服,毛巾应高压灭菌后再送出洗涤； -2 试验室产生的含有感染性物质的液态废物应使用消毒剂处理后集中收集于密闭容器；移出试验室 前应使用含氯消毒剂处理；处理时间应不少于 2 小时,有效氯含量应大于 2000mg/L ,处理过程中容器应保 持密封； BSL-2 试验室废液移出试验室前应对容器外表面进行化学消毒 离心预备工作要求 检查转

20、头或离心杯密封圈 离心管内液体不应过量 密闭离心管 离心管放入转头或离心杯前应去除表面污染 密闭转头或离心杯 去除转头或离心杯表面 污染 使用纯水或酒精作为配平液体 应在用 于配平的离心管盖上作标记 离心终止后的工作要求 在生物安全柜内打开转头 或离心杯 从生物安全柜内取出转头或离心杯时应去除污染 生物安全柜 操作规程 个人防护要求（在使用生物安全柜时必需穿个人防 护服,戴手 套；应戴口罩和帽子,依据需要带防护眼罩或者面罩； ） 柜内物品的摆放依据从洁净区到污染区的方向摆放；全部物品尽可能放在工作台后部；将废物袋,移液管 收集盘,吸滤瓶等大体积物品放在柜内一侧； 前后格栅不能被纸,仪器设备或者

21、其他物品阻挡； 紫外消毒灯 每周清洁, 除去可能影响杀菌成效的灰尘和污垢； 房间中有人时确定要关闭紫外灯, 以爱惜眼 睛和皮肤,防止因不慎暴露而造成损害； 防止明火 火焰可造成生物安全柜的气流紊乱,干扰气流模式；可损坏 易燃物品时易造成危险； 工作前预备 HEPA 过滤器；处理挥发性物品和 打开安全柜的日光灯和风机；安全柜运行 15min,净化工作区的空气污染物；用适当消毒剂擦拭生物安全 柜的工作台面及内壁以去除污染；将试验中需使用的物品集中用消毒剂擦拭后放在台面相应位置上； 工作中操作 防止手臂在前开口处快速移动和频繁进出；尽量防止污染的物品进入洁净区；在生物安全柜内操作时,不 能进行文字工

22、作；尽量削减操作者身后的人员活动；操作者的面部应始终在移动档板后面； 溢出处理 始终保持生物安全柜运转状态,不要关闭风机；在溢出物上掩盖浸有消毒剂的吸水材料,保持适当时间以 发挥消毒作用；在安全柜内消毒污染的手套；假如防护服已被污染,也应消毒；更换新的手套和衣服后进 行下一步的清洁工作；全部废弃物以及防护服进行高压灭菌；清洗手部和其它部位暴露皮肤；马上通知实 第 6 页,共 8 页学问点大全 验室相关治理人员；假如溢出物流入安全柜内,可能需要对安全柜进行完全消毒； 工作终止后处理 保持安全柜连续运行至少 5min 完成净化； 将柜内物品移出前, 应使用适当消毒剂擦拭去除表面污染； 工作 终止后

23、应使用适当消毒剂擦拭生物安全柜的内壁和台面,以去除污染；关闭前窗,关日光灯,关风机,开 紫外消毒灯照射至少 30 分钟； 试验动物微生物和寄生虫把握分级 一,分级： 1, 一般级动物 （CV ） 概念：一般级动物是指饲养在开放系统中,在微生物把握上要求最低的动物,它要求不携带人畜共患病和 动物烈性传染病的病原； 特点：来源于清洁动物或 SPF 动物,在开放系统中饲养；饲养成本低,价格廉价,可大量供应；微生 物把握程度低,但应排除人畜共患病和动物烈性传染病；对试验反应性差； 2, 清洁动物 CL 概念：除不带有一般级动物应排除的病原外,仍不应携带对动物危害大和对科学争论干扰大的病原； 特点：来源于 SPF 动物或无菌动物,在屏障系统中饲养；较一般级动物健康,又比 SPF 动物简洁达到 质量标准；对试验干扰较少,试验重复性和敏捷性较好,是我国主要的科研用动物；