机能实验学教学课件：第7次课 红细胞渗透脆性观察-溶血与药物溶血反应-血型鉴定

1、节次：机能实验学 第7次课内容：红细胞渗透脆性观察-溶血与药物溶血反应-血型鉴定学时：4h课程信息红细胞渗透脆性观察前言红细胞膜允许一些脂溶性物质，如O2和CO2，及水分子自由通透。正常红细胞置于不同浓度NaCl溶液中时，在等渗溶液中红细胞形态与大小不变；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐渐膨大以至破裂溶解。前言对低渗盐溶液抵抗力最小的红细胞，最早出现溶血，被认为其具有最大渗透脆性。反之，渗透脆性最小的红细胞，对低渗盐溶液有最大抵抗力，最后出现溶血。红细胞最小和最大渗透抵抗力分别用开始出现溶血与刚达到完全溶血时其所处的NaCl溶液的浓度来表示。 目的测试红细胞的渗透脆性，加深理解红细胞的生理

2、特性对于实现其正常功能的重要意义。 材料与方法动物 健康家兔、雌雄不拘。 药品与试剂 0.9NaCl溶液， 蒸馏水 。装置和器材： 20ml注射器、10ml试管（4个）、20ml试管（2个）、试管架6个，小试管10支，三角瓶、硅胶刷、滴管、离心机、50ml量桶、吸耳球。 材料与方法心脏采血兔子仰卧在手术台上，用手触摸心前区搏动最明显的地方，直接用20ml注射器在胸骨左侧23mm与第三肋间隙处垂直进针，迅速抽出1520ml血液并放入三角瓶中，用硅胶刷轻度快速搅动血液以刺激凝血机制，35分钟后拿出硅胶刷。材料与方法2红细胞悬液的配制生理盐水稀释后以20002500r/min离心5分钟，吸去液体成分

3、，再加生理盐水混匀、离心。第三次离心后用滴管轻轻吸去上清夜，得到红细胞。用吸管取2ml的血细胞加生理盐水至100ml，即得到2的红细胞悬液。 渗透脆性实验：将10支小试管按110顺序编号，并排列在试管架上，按照表7-1所示，加入不同量的2红细胞悬液和蒸馏水，并迅速用拇指封住管口，轻轻缓慢颠倒12次，混匀，在室温下放置4060分钟或2000 2500r/min离心3分钟观察结果，寻找最大渗透脆性和最小渗透脆性。表7-1 低渗盐溶液配制过程结果 1试管内液体下层呈混浊红色，上层为清淡无色或极淡黄色，表示无溶血。 2试管内液体下层呈混浊红色，上层呈透明红色，表示不完全（部分）溶血。 3试管内液体不分

4、层，完全变成透明红色，管底有红细胞膜沉积，表示完全溶血。【注意事项】吸管不能混用。吸取溶液时必须仔细观察吸管的刻度，做到准确无误。试管中加入红细胞悬液后混匀时，不可用力快速振荡，以免人为造成红细胞破裂。观察实验结果时勿将试管从试管架上拿出，应水平端起试管架进行观察。溶血与药物溶血反应 前言溶血是指红细胞破裂、溶解的一种现象，某些药物，尤其是注射剂的毒副作用之一是引起红细胞膜破裂、造成溶血反应; 在新药研发或药品生产中，都需要对注射剂药品进行药物溶血实验测定。 目的通过观察供试药品是否引起溶血反应来了解药物制剂的安全性。 材料与方法实验动物 健康家兔，体重2.02.5kg ，雌雄不拘。 试剂和药

5、品 蒸馏水、生理盐水、供试药品。实验器材 离心机，水浴锅，试管，试管架，离心管，吸管，小烧杯，竹签，注射器。表7-2 药品溶血反应观察表结果观察试管内液体下层呈混浊红色，上层为清淡无色或极淡黄色，表示无溶血； 试管内液体下层呈混浊红色，上层呈透明红色，表示部分溶血； 试管内液体完全变成透明红色，管底有红细胞膜沉积，表示完全溶血； 虽无溶血，但红细胞彼此粘连，摇动后不能分散，表示出现红细胞凝集。ABO血型鉴定 前言血型鉴定是将单克隆抗A抗体和抗B抗体与受试者红细胞分别混合，观察有无凝集反应，从而推断出受试者红细胞膜上凝集原的有无及类型，确定受试者的血型。临床输血时，可因血型不合而引起红细胞凝集，

6、从而使红细胞的功能丧失，危及病人的生命。实验目的熟悉ABO血型鉴定的方法，充分认识输血时血型不合所造成的严重后果。 材料对象 人。试剂和药品 抗A抗体，抗B抗体，生理盐水装置和器材 采血针，玻片，牙签，75酒精棉球，干棉球，碘酒棉球。实验方法在玻片的两端分别滴抗A抗体、抗B抗体各一滴，并进行标记。用碘酒棉球消毒指端或耳垂,再用酒精棉球消毒后,用采血针刺破皮肤,轻挤少量血液。用洁净竹签两端各蘸取少量血液，分别加入两种抗体中，并用牙签轻轻搅动片刻或摇动混匀，静置35分钟以上观察。用消毒干棉球置于伤口，并按压23分钟。【结果观察】先用肉眼观察有无红细胞凝集，可参考图进行判断。如果不能作出明确判断，可

7、在显微镜下进行仔细观察。anti-Aanti-Banti-Aanti-Banti-Aanti-BType AType BType AB Type Oanti-Aanti-B讨论1为什么同一份血液中的红细胞渗透脆性不一样？对同一份血液而言，含有的红细胞所处的时期不同，有新生的红细胞，还有衰老的红细胞，这些细胞的渗透脆性不相同，所以同一份血液中的红细胞渗透脆性也不一样。讨论2何为红细胞的最大脆性和最小脆性？对低渗盐溶液抵抗力最小的红细胞，最早出现溶血，被认为其具有最大渗透脆性。反之，渗透脆性最小的红细胞，对低渗盐溶液有最大抵抗力，最后出现溶血。讨论3本次试验对你以后的临床工作有什么指导意义？在临床工作的过程中，所有的药物尤其是新药开发和静脉用药，一定要考虑药物对细胞膜渗透脆性的影响，防止溶血事件的发生。讨论4如何鉴定并判断出你的血型？讨论5经ABO血型鉴定后，若是同型血，是否可直接输血？为什么？经ABO血型鉴定后，即使是同型血，也不可以直接输血，须考