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文档简介

1、荧光(ynggung)定量PCR技术 生化(shn hu)教研室研究生实验共三十七页一、实验(shyn)目的掌握荧光(ynggung)定量PCR的原理熟悉荧光定量PCR的操作步骤。 共三十七页二、实验(shyn)原理 ABI Prism7500型荧光定量PCR仪7500功能一览：绝对定量(Absolute Quantification)自动(zdng)计算基线、阈值、CT值、浓度、百分比相对定量(Relative Quantification)等位基因分型(Allelic Discrimination)阴阳性鉴定(Plus/Minus with IPC)共三十七页共三十七页实时荧光定量(dng

2、ling) PCR技术原理聚合酶链式反应（PCR）可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增，扩增反应结束后，可通过凝胶电泳的方法对扩增产物(chnw)进行定性分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量分析。无论定性还是定量分析，分析的都是PCR终产物(chnw)。 共三十七页实时(sh sh)荧光定量PCR通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR反应中，引入一种荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们(w men)就可以通过

3、荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图 共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页三、共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页四、共三十七页共三十七页共三十七页共三十七页五、实时荧光定量(dngling) PCR技术的应用 共三十七页共三十七页六、思考题1. 荧光定量PCR的应用。2. 使用SYBR Green I作荧光染料，如何提高(t go)荧光定量PCR结果可靠性？共三十七页七、实验报告每人写一份实验报告，交至：10号楼10楼1012室包括(boku)：目的、原理、操作注意事项、结果、讨论共三十七页内容摘要荧光定量PCR技术。自动计算基线、阈值、CT值、浓度、百分比。阴阳性鉴定(Plus/Minus with IPC)。聚合酶链式反应（PCR）可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增，扩增反应结束后，可通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量分析。通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而

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