流式细胞术发展和细胞组学新技术贝克曼

1、流式细胞术发展和细胞组学新技术贝克曼Cell-based71%Biochemical23%Uncertain6%Cell-based40%Biochemical60%Past 5 yearsIn DevelopmentSource: Dr. Priya Kunapuli, Senior Research Scientist, Merck Research Laboratories; Dec. 2002Key takeaways: Rapid movement to cell-based assays for contextual analysis以细胞为主要研究对象的课题数量变化细胞水平研究的

2、历史、现在和未来暗视野光镜，相差显微镜，微分干涉对比显微镜，偏振光显微镜，荧光显微镜单光子共聚焦显微镜，多光子共聚焦显微镜大体荧光成像系统细胞计数仪18世纪，明视野显微镜发明流式细胞仪分光高度计，荧光高度计，干涉光高度计放射自显影细胞成像定量分析系统? 形态学研究工具的发展历程Simple optical microscopeBasic clinical scopeResearch grade fluorescence scopeHigh-end automated HCS systemsConfocal scanning system细胞定量工具发展历程Simple cell counter

3、s & sizersAutomated Cell viability2-4 color cytometer simple assays5-6 color cytometer clinical / high-end res.6 color plus cytometer / sorter high-end res.Cell Lab Quanta流式细胞仪新技术趋势Multi-color AnalysisRed sensitive PMTsExcellent SensitivityNew optics layout for SharpnessMulti-platform sampling and h

4、umanity devicesAuto Setup with biological sampleOff-line compensation, LMD compensation and MoreFCS 3.0 format for Listmode filesSolvent protein detection development (beads based assay)Multi-Laser, multi-power options for different useLarge and Small particle sortingNew technologies for high yield,

5、 high purity and high viability sorting。32 支试管自动上样盘（MCL)Walkaway 独立获取样本，减轻操作劳动MCL 自动模式.MCL 手工模式.单管上样模式.暂停/转动功能可以方便地往试管加入刺激剂或终止剂进行试验 每支试管检测前单独震动混匀，有利于均匀获取细胞自动上样方式FC500 MPL 24 孔0.5 2.5 ml 每孔容量96 标准孔和深孔反应板250 ul 最小容量40 支试管 (12x75mm)1ml 最小体积可以固定体积上样检测175 ul 吸样量可以减少高通量工作需要的烦杂的取样过程适合于零成本绝对计数将您的注意力从操作中解放出来

6、，而集中于思路的创新从模拟信号到先进的数字化信号数字化信号转换对数查表保证最优化的线性和稳定性4次幂转换误差1+1, 32+1, 31+1+1, ETC.节省试剂和工作量。如果做非常全面的免疫分型，三色需要20支试管，四色需要12支，而五色只需要6支。越来越多的生命活动研究需要多参数多角度分析，例如凋亡，AICD等。抗原特异性T细胞分析四聚体（tetramer)染色细胞因子分泌试验ELISPOTCytokine Secretion Assay不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地构建和表达了MHC分子3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其与非特异性T细胞结合，大大提高

7、了特异性。并且将MHC四聚体直接标记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC分子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者 利于此技术关键问题在四聚体制备，最大的问题不是没有阳性细胞，而是阳性率太高四聚体染色技术Beckman Coulter已经有的部分产品传染性疾病相关：HIV gag SLYNTVATL HLA - A*0201HIV pol ILKEPVHGV HLA - A*0201CMV PP65 NLVPMVATV HLA - A*0201EBV GLCTLVAML HLA - A*0201EBV GLCTLVAML HLA - A*0201Influenza M1 G

8、ILGFVFTL HLA - A*0201HBV core FLPSDFFPSV HLA - A*0201肿瘤性疾病相关：Mart1 ELAGIGILTV HLA - A*0201Gp 100 IMDQVPFSV HLA - A*0201Gp 100 ITDQVPFSV HLA - A*0201Her-2/neu KIFGSLAFL HLA - A*0201Her-2/neu RLLQETELV HLA - A*0201PR-1 VLQELNVTV HLA - A*0201Tyrosinase YMDGTMSQV HLA - A*0201 抗原决定簇分析的科学平台iTopia Epitope

9、Discovery System 在目前主要以数据库为基础的理论性分析抗原决定簇的基础上，iTopia技术平台为研究者研究免疫的发生发展、疫苗的研制和免疫学检测提供了一个科学合理的解决方案 分泌细胞因子的细胞的检测和分选 DC与TLR分子和T细胞的相互作用DC Capture Ag Via TLR Induced Actin RemodelingTLR activate DC endocytosis -FITC-dextran incubationMature DC Priming Nave T Cells贝克曼库尔特公司PLG试剂 能测定保存长达5天的陈旧血世界首先专利特殊的克隆号和抗体保存

10、秘方更多的此类抗体即将问世贝克曼库尔特公司BBA试剂能同时检测10种细胞因子*Human Th1/Th2 Cytokine I KitFL2 (Reporter Parameter)FL4(Differentiator Parameter)CellsBeads 细胞表面标记和样本可溶性蛋白同时检测系统单种可溶性蛋白FL1FL4FL2FL4FL1SSFL4EVENTSBeadsCells 细胞表面标记和样本可溶性蛋白同时检测系统多种种可溶性蛋白干细胞中的研究应用-Hoechst 33342 side population干细胞能表达ABCG2泵蛋白，在HOECHST 33342染色时能将该染料泵出，因此分析不能被该染料染色的细胞群时可以发现一群不能染色的细胞既是干细胞，因此能够在众多肿瘤细胞中区分出肿瘤干细胞。QUANTA检测SP细胞群EPICS Altra 测定SP细胞群流式细胞仪对细胞结构的分析细胞酶活性检测Th1细胞DPPIV 活性实时检测与验证神经元细胞融合检测利用DIL,DIO对神经元细胞进行染色观察和流式检测流式细胞术在生物医学研究的新方向细胞多态性分析：受体、抗原折叠、HLA等，包括CXCR4,CCR5,DC-SIGN(与AIDS易感性有关），NKR重要分子的进一步分析，如粘附分子（物种间高度保守，与细胞间通讯，干