含有非甲基化CpG的双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

1、含有非甲基化CpG的双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响安蔚，赵苗青，李雅林，李松，康莉，宋文刚【关键词】甲基化StiulatryeffetfbifidbateriaDNAntainingunethylatedpGtifsnaturatinfbnearrderiveddendritiells【Keyrds】bifidbateriaDNA;dendritiells;ie【摘要】目的：探究双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞(BD)成熟的影响.要领：纯化提取双歧杆菌DNA，并断定DNA成品pG基序甲基化程度；FAS检测BD的吞噬成效和外貌标识表记标帜分子，ELISA法检测BD排泄细胞因子程度

2、，3HTdR掺入法检测T淋巴细胞增殖本领.效果：双歧杆菌DNA诱导24h后BD高表达Ia,D40,D86和D11分子，显着增长IL6,IL12(p40),TNF的排泄，明显加强同种异体和自体T细胞增殖的本领.结论：双歧杆菌DNA可以或许促进BD成熟，加强BD的抗原提呈本领.【关键词】双歧杆菌DNA；树突细胞；小鼠0弁言树突状细胞(dendritiells,D)是机体成效最强的专职抗原提呈细胞，它能高效摄娶加工处置惩罚和提呈抗原，有较强的迁徙本领，并能明显地激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中央环节1-2.D是否成熟对其成效的发挥非常紧张.比年来研究表白,细菌脂多糖LPS具有明白

3、的诱导D成熟并影响其成效的作用3，由此假想同样来自细菌含有pG的DNA很大概对D分化发育和成效有必然的影响.我们使用我室提取的双歧杆菌基因组DNA(bifidbateriaDNA,BDNA)，不雅察了其对小鼠骨髓树突状细胞(bnearrderiveddendritiell,BD)成熟的影响.1质料和要领1.1质料小鼠重组GSF,IL4购自Prega公司，LPS,小牛胸腺DNA(alfthyusDNA,TDNA),DextranFIT购自Siga公司，溶菌酶、限定性内切酶Hpa购自中国医学科学院交情公司，小鼠IL6,IL12(p40),TNFELISA检测试剂盒购自RD公司，RPI1640完全造

4、就基RPI1640Hylne公司,100L/L胎牛血清Hylne公司构成，4保存备用；3HTdR购自Aersha公司，抗小鼠D4(Gk1.5),D82.43,B220RA3.3A1/6.1,Iab(B212)单克隆抗体杂交瘤细胞株均购自AT，差异荧光素标识表记标帜的大鼠抗小鼠单抗D11PE,D40FIT,D86PE,IabFIT及FIT或PE标识表记标帜的同型比较抗体均购自Pharingen公司，4保存.57BL/6H2Kb小鼠60只，Balb/H2Kd小鼠24只，68k，体质量1820g,雌性，上海必凯实行动物提供.双歧杆菌菌株引自山东省卫生防疫站并通过细菌断定.1.2要领2效果2.1双歧杆

5、菌DNA对BD外貌分子表达的影响BDNA组BD表达Ia分子,D40分子,D86分子和D11分子的均匀荧光强度(Geean)显着高于PBS比较组(表1)，提示BDNA诱导BD表告竣熟D外貌分子.表1小鼠BD外貌分子表达的均匀荧光强度(略)3讨论D是如今的机体内成效最强的、惟一可以或许活化童贞型T细胞的AP，因此是免疫应答的启动者.机体内存在多种机制，通过调治D的成效，以调控免疫应答和维持自身耐受.如今以为，D在调控免疫应答历程中的机制有1,7-8：差异分化发育阶段的D，介导性子截然差异的免疫应答.高表达类重要构造相容性抗原H分子和共刺激分子的充实活化的D可以或许刺激T细胞活化，因此启动T细胞介导

6、的免疫应答；而中度表达H和共刺激分子、保存抗原摄取和加工潜能、处于成熟但非活化状态的D大概介导耐受型T细胞分化，到场维持机体的自身耐受.差异亚群的D可以或许识别差异性子的抗原，诱导差异性子的帮助性T细胞(Th细胞)活化.髓系泉源的D重要介导Th1型细胞分化；淋巴系泉源的浆细胞样D重要诱导Th2细胞分化，但在病毒熏染的环境下，通过排泄大量的型滋扰素诱导Th1细胞活化.Th2细胞介导的免疫应答可以或许按捺Th1型细胞介导的免疫应答，反之亦然.D诱导调治性T细胞(regulatryTell,Tr)分化，Tr细胞按捺效应T细胞介导的免疫应答.成熟活化D的适时凋亡.抗原提呈本领是D重要成效，未成熟D摄取

7、抗原的本领较强，在抗原和细胞因子等刺激下，D渐渐成熟并迁徙到外周免疫器官，丧失了摄取抗原的本领，发挥抗原提呈作用，激活T细胞启动免疫应答.本实行创造BD担当双歧杆菌DNA刺激后，内吞成效显着低落.BDNA能加强BD排泄IL6,TNF和IL12(p40)程度，表白BDNA可以或许促进BD成熟，摄取抗原的本领低落，从而发挥抗原提呈作用.本研究创造BDNA与LPS在效应方面具有必然的相似性，它们都可以或许促进BD成熟，表达高品貌的HII和多种共刺激分子，使其合成和排泄多种细胞因子，加强BD的抗原提呈本领.本效果提示BDNA可作D的激活剂，为微生物DNA制剂开拓应用提供科学根据.致谢：泰山医学院防范医

8、学教研室程琮传授对本文统计学处置惩罚的引导【参考文献】1Zhang,TangH,GuZ,etal.SplenistradrivesaturedendritiellstdifferentiateintregulatrydendritiellsJ.NatIunl,2022,5(11):1124-1133.2宋文刚，陈宪锐，李雅林，等.IL18基因修饰的D肿瘤交融瘤苗的抗肿瘤效应J.第四军医大学学报,2022,24(24):2227-2230.3季海峰，孙卫民，陈杰，等.LPS连续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响J.中华微生物学与免疫学杂志,2022,24(1):6-9.7ShrtanK,LiuYJ.useANDhuand