微生物培养基的制备及接种

1、微生物培养基的制备及接种宿舍：628成员：黄朋朋、李厅、王冲、马浩、王萌、王锦楼一、实验原理：牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，这种培养基含一般细菌生长繁殖所需要的最基本营养物质，培养基含有碳源、氮源、磷酸盐、维生素、生长因子等。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。多用于培养细菌因此要用烯酸和稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。二、实验器材：1、试剂：牛肉膏1.8g、蛋白胨6g、食盐llg、琼脂12g、水600ml、1mol/LNaOH、1mol/LHCl2、仪器或其他用具：试管56/个、1000ml大烧杯/个、三角瓶、量筒、玻璃棒、培养基分装

2、器、分析天平、牛角匙、pH试纸、牛皮纸、记号纸、麻绳、纱布、培养皿、高压式蒸汽灭菌锅等。3、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌种。三、实验步骤：1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。2、溶解：在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀然后，在石

3、棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。3、调pH：在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入lmol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用lmol/LHCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。4、分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内,每试管l0ml。如图：注：分装过程中注意不要使培养基沾在管

4、口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。5、加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。如图：6、包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。7、灭菌：将培养基放入高压蒸汽灭菌锅后，加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸气锅密闭，勿使漏气。加热，0.103Mpa,121C并维持压力至所需时间20min,取出。7、倒置斜面：将灭菌的试管培养基冷至50C左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。如图：8、无菌检查：将灭菌的培养基放入37C的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。9、无菌接种如图：注意：以上操作必须在无菌的环境下进行即酒精灯的火焰辐射范围内用接种环应充分灼烧挑取少量菌种在试管斜面上轻