医用化学实验课件

1、医 用 化 学 实 验生物化学教研室张丽娜实验课注意事项： 不迟到，不早退，做好课前预习工作 穿好白大褂 使用煤气时注意安全 试剂用后及时归位保持严肃认真的实验态度 及时记录实验结果，按时完成实验报告实验报告格式：1、实验目的2、实验原理3、实验操作4、实验结果（真实、客观）5、讨论（实验报告的核心）6、意见与建议（可选择）实验一 医化实验基本操作玻璃仪器的洗涤吸量管的使用 注意：右手食指按住吸量管口溶液的混匀 指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡混合器混匀等实验二 电离平衡与缓冲溶液实验目的 1、掌握同离子效应的原理 2、学习通过韩-哈方程式配制缓冲溶液 3、观察稀释对缓冲溶液pH值的影响 4

2、、学习吸量管及pH计的使用 1、同离子效应实验原理HAc H+ + Ac-NaAc Na+ + Ac-例： 同离子效应使得HAc的电离度降低，溶液的pH升高 酸碱指示剂：红橙黄红淡红黄无色绿蓝3.14.481067.6甲基橙酚酞溴麝香草酚蓝pH = pKa + lg盐酸韩-哈方程式也可表示为：（盐的摩尔数） （酸的摩尔数）n盐/V溶液n酸/V溶液当酸与盐混合前的浓度相等时：= pKa + lg V盐 V酸pH= pKa + lg n盐 n酸pH2、缓冲溶液 缓冲溶液加水稀释时，盐浓度与酸浓度作相同 比例稀释，因此，缓冲溶液的pH几乎不因稀释 而改变。 缓冲溶液的缓冲能力有一定限度，超过该限度

3、缓冲溶液的pH也会发生较大改变实验操作1、同离子效应（1）各1支 + NH3 . H2O 2ml+ 1滴酚酞 1滴NH4Cl 1滴H2O摇匀观察结果1ml=15滴（2） 各1支 + 醋酸 2ml+ 1滴甲基橙 1滴NaAc 1滴H2O摇匀观察结果2、缓冲溶液（1）0.1mol/L KH2PO40.1mol/L Na2HPO4 8 ml 2 ml 5 ml 5 ml 2 ml 8 ml精密pH试纸检测pH计检测韩-哈方程式计算测完pH值后2管保留用吸量管进行操作大试管3支另取2支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验2号缓冲液2 ml1 ml蒸馏水0 ml1 ml溴麝香草酚 蓝各1滴（2）（3）

4、另取3支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验2号缓冲液2 ml2 ml2 ml溴麝香草酚蓝各2滴，混匀NaOH 3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加NaOH滴数HCl 3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加HCl滴数2号管缓冲液测好pH后切勿立即倒去吸量管的使用pH计的使用 注意事项：1、看清刻度，选择适当容量的吸量管2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管 口，稳住液面3、拿吸量管的时候，刻度面向自己4、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以 下凹面为准5、吸取另外一种试剂时，要润洗 吸量管的使用实验三 功能基反应实验目的1、掌握几功能基的主要化学性质2、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇

5、互变异构现象1、双键与卤素的加成反应实验原理C=C + Br2 -CH-CH- BrBr 红棕色的溴褪色，可用于鉴定有机物中 是否存在不饱和键2、酚性羟基的反应（1）苯酚的弱酸性（2）酚性羟基与FeCl3的显色反应苯酚FeCl3紫色络合物 可用于鉴别酚和醇3、醛基的反应 O | R-C-H + 2Cu（OH）2 O | R-C-OH + Cu2O + 2H2O砖红色沉淀（班氏试剂） 酮无此反应，故可用于鉴别醛和酮4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象 使三氯化铁溶液呈紫红色反应具有烯醇式结构 与苯肼反应生成苯腙，颜色？ 使红棕色溴的四氯化碳溶液褪色具有双键结构 O O | |CH3-C-CH2

6、- C-O-C2H5说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的混合物，两者之间相互转变，处于动态平衡。 O O | |CH3-C-CH2-C-O-C2H5 OH O | |CH3-C = CH-C-O-C2H5室温时 酮型（93%） 烯醇型（7%） 凡两种或两种以上的异构体能互相转变，并以 动态平衡存在的现象互变异构现象5、尿素的化学性质OH-紫红色物质缩二脲反应：缩二脲 + CuSO4（少量）1、烯基的反应实验操作+ 硬脂酸10滴+ 油酸10滴+ 植物油10滴逐滴加入5%Br2的CCl4溶液，不断振荡试管，记录结果 不是溴水2、酚性羟基的反应（1）+ 液体苯酚2滴 水5滴，摇匀+ 10%Na

7、OH 2 滴 摇匀，观察（2）+ 0.5%苯酚溶液10滴+ 0.5%水杨酸溶液10滴+ 苯甲醇10滴各加入1%FeCl31滴，观察结果3、醛基反应（大试管6支）试剂（滴） 1 2 3 4 5 640%乙醛液 5 10%NaOH 5 丙酮液 4 1%葡萄糖 4 1%果糖 4 1%蔗糖 4 42mol/L盐酸 10班氏试剂 10 10 10 10 10 1-5管于沸水中加热3分钟，观察结果；6号管加蒸馏水10滴，于沸水中加热10分钟，不时振荡，再加10%NaOH10滴，班氏试剂10滴混匀，于沸水中再加热3分钟，与5号管比较，记录结果4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象（1）+ 10%乙酰乙酸 乙

8、酯2滴+ 2，4-二硝基苯肼10 滴，振荡，观察结 果，写出反应式（2）+ 10%乙酰乙酸 乙酯10滴+ 1%FeCl31滴，观察结果再加溴水1滴，观察变化，并加以解释5、尿素的化学性质+ 尿素1匙小火加热，待尿素熔化红色石蕊试纸放置管口，观察变化继续加热待管内物质凝固后冷却试管，加水2ml玻棒搅动促溶，吸取上层溶液于另一试管中再加入10%NaOH 、1%CuSO4各1滴，观察变化注意事项1、注意区分以下试剂： 液体苯酚5%苯酚溶液 5%Br2的CCl4溶液溴水2 、液体苯酚预先加热，盛放其的试管也要预热3、缩二脲反应中试管冷却后再加水，并用玻棒 轻轻搅动 4、挥发性试剂全部摆放在边台上，用后

9、及时归位 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定实验目的：1、掌握组织中的核酸的提取与鉴定2、掌握离心机的使用3、熟悉加样器的使用实验原理 1、提取原理： a: DNA和RNA大部分与Pro结合成核蛋白。 b: 核蛋白可被三氯醋酸沉淀下来。 c: 10%NaCl溶液从沉淀中提取核酸，生成核酸 的钠盐d: 乙醇把核酸钠沉淀下来 核苷（B-R）磷酸（P）2、鉴定原理核酸核苷酸 基碱（B）戊糖（R）核酸的基本组成单位嘌呤（A G）嘧啶核糖（C U）脱氧核糖（C T）a:磷酸+钼酸铵 磷钼酸 钼蓝b:嘌呤+AgNO3 絮状嘌呤银c:核糖 糠醛 绿色化合物d: 脱氧核糖 -羟基-酮基戊醛 蓝色化合物氨基萘酚

10、磺酸H+3，5-二羟基甲苯H+二苯铵操作步骤1、提取步骤制备肝组织匀浆： 脱臼处死或断头处死 剖腹取全部肝组织 生理盐水冲洗血污，吸干净 三氯醋酸2ml 分散匀浆机匀浆分离提取于全部匀浆内加入生理盐水2ml，玻棒混匀静置3min， 3000rpm 3min, 弃上清沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒搅拌取出冷却，3000rpm 3min取上清，逐滴95%酒精2管，混匀静置5min，3000rpm 5min弃上清，得白色核酸钠核酸的水解： 短试管内加入5%H2SO4 3.5ml 玻棒搅匀 沸水浴中10min成分的鉴定管号水解液5%H2SO4浓氨水5%AgNO3测定管 20d 2

11、3d 10d对照管 20d23d 10d沸水浴35min，观察结果，静置15min,观察结果嘌呤的鉴定磷酸的鉴定管号水解液5%H2SO4钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸测定管 10d 5d 20d对照管 10d5d 20d放置3min，沸水浴35min，观察颜色差异核糖的鉴定管号水解液5%H2SO43，5-二羟基甲苯测定管 4d 6d对照管 4d6d沸水浴510min，观察颜色差异脱氧核糖的鉴定管号水解液5%H2SO4二苯胺试剂测定管 20d 30d对照管 20d30d沸水浴510min，观察颜色差异注意事项1、做鉴定部分时尽量用大试管，所有标 号朝试管上方2、玻璃棒搅拌要轻柔3、胶头滴管使用要注意顺序

12、，避免污染 移液枪的使用1、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪（最大刻度和读数的关系）2、先调好刻度3、打至第一档吸入试剂4、打出试剂时要按至第二档5、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出 现离心机的使用 台秤平衡 对称插入 定时定速实验四 蛋白质呈色反应、沉淀反应及等电点的测定实验目的：1、掌握双缩脲法、茚三酮法、Folin法定性检查蛋白质的方法 2、验证几种蛋白质沉淀反应的现象及酸碱性环境的影响 3、了解蛋白质等电点测定 一、蛋白质的呈色反应实验原理： 双缩脲反应：含有CONH 、 CSNH、CH2NH等基团的化合物在浓碱液中与硫酸铜生成紫红色复合物。茚三酮反应：含有自由氨基的化合物与茚三酮共热，生成紫色化合物。Folin法： 酚性羟基在碱性环境中，与酚试剂生成钼蓝操作步骤（1）+ 1：10鸡蛋白2滴1%CuSO4 1滴 + 10%NaOH 5 滴 混匀，观察颜色（2）+ 1：10鸡蛋白4滴 + 蒸馏水10滴+0.1%茚三酮乙醇8滴，混匀，观察颜色 蒸馏水6滴+ 10%NaOH3 滴，酚试剂1滴，混匀，观察颜色+ 1：10鸡蛋白2滴+ 0.25%白明胶 0.25%酚溶液 0.25%酪氨酸二、蛋白质的沉淀反应 实验原理：1、盐析：破坏水化膜，中和电荷常用中性盐：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl2、重金